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.2017 1月17日;8(3):44 49445。
DOI:101863/OnCo Toal.1389.

GABARAPL1通过抑制PI3K/Akt通路抑制前列腺癌转移

附属
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GABARAPL1通过抑制PI3K/Akt通路抑制前列腺癌转移

魏素等。 肿瘤靶点. .
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摘要

转移仍然是前列腺癌(CAP)相关死亡的主要原因。使用全基因组shRNA筛选,我们鉴定了GABARAPL1作为潜在的冠状病毒转移抑制因子。GABARAPL1 mRNA水平与人CAP细胞系的侵袭潜能呈负相关。较低的mRNA水平与临床CAP肿瘤样品中较高的格里森评分相关。此外,Kaplan Meier曲线分析显示,癌组织中GABARAPL1的下调与CAP患者无病生存率的降低有关。在人LNCaP细胞中敲除GABARAPL1导致体外侵袭增加和淋巴结转移。反之,GABARAPL1的异位表达降低了CWR22Rv1细胞的侵袭力。我们以前的体外shRNA筛选鉴定了FXO4,PI3K/Akt失活下游靶点,作为潜在的CAP转移抑制因子。我们在这里显示沉默FOXOs导致减少的GABARAPL1表达和增强的侵袭在LNCaP细胞。组成性激活的Akt(Myr Akt)的转染增加了LNCaP细胞的侵袭,这与FOXOs的失活有关,并降低了GABARAPL1的表达。事实上,GABARAPL1的强迫表达逆转了LNCaP /MYR Akt细胞的侵袭性增加。最后,免疫组织化学分析显示AKT磷酸化与人帽状组织中GABARAPL1的表达呈负相关。综上所述,我们的数据表明,通过Akt抑制FXOS- GABARAPL1信号是CAP进展和转移的重要机制。

关键词Akt;FOXOs;GABARAPL1;转移;前列腺癌。

利益冲突陈述

利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突。

数据

图1
图1。LNCaP基因帽状异种移植模型中转移抑制基因的功能缺失
概要描述高通量全基因组shRNA筛选方法,以确定抑制LNCaP原位转移模型区域淋巴结转移的基因。)在用解码(OpenSosiSosits)感染的LNCaP细胞注射后形成的原发肿瘤中持续的GFP荧光汇集了编码人类shRNA的pGIPZ慢病毒库。CGFP荧光图像显示一个代表性的小鼠淋巴结转移。红色箭头表示GFP图像中的转移。
图2
图2。GABARAPL1的表达与CAP细胞和组织中的侵袭和转移呈负相关。
用qRT-PCR法检测了不同转移能力的永生化前列腺上皮细胞RWPE-1和CAP细胞中GABARAPL1的表达。误差条,SE的三个独立的QRT-PCR测定。***<0.001;细胞对RWPE-1细胞有明显的抑制作用。)GABARAPL1 mRNA在正常(NOR)、原发癌(PCA)或转移瘤(MET)中的表达水平。帽组织获得四项研究可在OncMin网站:LaPount等。〔39〕,LauliPpe等人。〔40〕泰勒等。〔6〕和VANAJA等。〔41〕。C用QRT-PCR检测GABARAPL1 mRNA在80个CAP肿瘤组织中的表达,并用格里森评分和59个良性前列腺组织样本进行评估。在插入表中显示两组之间的值:< 0.05;**< 0.01;***< 0.001。D)Kaplan Meier图分析HTTP://www. cPioprTal.Org/PualthPoalal/从泰勒等人进行的研究中,174例CAP病例的疾病与时间无关。〔6〕。
图3
图3。Akt介导的FXOs失活和FXOS诱导基因GABARAPL1的表达促进LNCaP细胞的侵袭
GABARAPL1表达被shRNA敲除,并用IB分析验证。β-肌动蛋白是内部控制。通过SCHROM、SHBA-1或SHBA-2转染的LNCaP细胞的单层融合,引入伤口。在0和24小时的光镜下监测迁移。C)在SnGub、SHBA-1或SHBA-2转染的LNCaP细胞中进行MatRIL的侵袭试验。计数每个字段的细胞数,并将结果汇总在条形图中。误差条,三重实验的S.E.*< 0.05。D野生型GABARAPL1的异位表达降低了CWR22Rv1的侵袭力。通过IB分析评价GABARAPL1蛋白表达(上图)。GABARAPL1过表达对MatMatel侵袭性的影响被量化(下表)。误差条,三重实验的S.E.*< 0.05。eFXOX(FXO1、FXO3和FXO4)通过siRNA转染在LNCaP细胞中被击倒。通过IB分析评价FXOS和GABARAPL1的蛋白表达。GADPH是内部加载控制。f以FasXs敲除的LNCaP细胞进行MatRelL侵袭试验。计数每个字段的细胞数,并将结果汇总在条形图中。误差条,三重实验的S.E.*< 0.05。G)LNCaP细胞瞬时转染含有组成性激活的Akt(Myr Akt)的载体。通过IB分析评价磷光体Akt(Ser47 3)、磷Fox O1(Ser256)、FxO1、磷-FxO3(Ser253)、Fox O3和GABARAPL1的表达。GADPH是装载控制。H用Myr Akt或对照载体转染LNCaP细胞,进行MatRelL侵袭试验。计数每个字段的细胞数,并将结果汇总在条形图中。误差条,三重实验的S.E.*< 0.05。I)用控制载体、MYR AKT或MYR Akt加GABARAPL1瞬时转染LNCaP细胞。通过IB分析评估PAKT(Ser47 3)和GABARAPL1的表达水平。GAPDH是加载控制(上面板)。LNCaP细胞表达对照、MYR AKT或MYR Akt加GABARAPL1的MatMatel侵袭试验显示在下板中。误差条,三重实验的S.E.*< 0.05。
图4
图4。AKT在人帽状癌组织中的表达与GABARAPL1表达呈负相关
磷蛋白Akt(Ser47 3)水平在原发性人帽状癌组织和邻近的非肿瘤组织中通过IHC评估。介绍了IHC研究的代表性图像。放大倍数:左边的图像,×100;右边的图像,×400。GABARAPPL1蛋白在原发性人帽状癌组织和癌旁非癌组织中表达。介绍了IHC研究的代表性图像。放大倍数:左边的图像,×100;右边的图像,×400。C在肿瘤组织和相邻非肿瘤组织中的相对GABARAPL1组织学评分按方法描述并在条形图中呈现。**< 0.01。
图5
图5。Akt介导的FXOS/GABARAPL1在CAP进展和转移中的负调控
激活的Akt直接磷酸化FXOs并导致其失活,随后抑制其靶基因GABARAPL1的表达,并导致CAP的侵袭和转移增强。

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