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.2017年6月；50（3）：e12320。
doi:10.1111/cpr.12320。 Epub 2016年12月2日。

血清淀粉样蛋白A是一种急性期蛋白，刺激角质形成细胞的增殖和炎症反应

宁雨 1, 张舒杰（Shujie Zhang） 2, 卢嘉靖 1, 李颖 1, 易雪梅 1, 李唐 1, 丽娜·苏 1, 杨凤鼎 1
附属机构

血清淀粉样蛋白A是一种急性期蛋白，刺激角质形成细胞的增殖和炎症反应

宁宇等。 细胞Prolif. 2017年6月.

摘要

目标：血清淀粉样蛋白A（SAA）是一种急性期蛋白，在银屑病皮损中高表达，但其功能尚不完全清楚。本研究旨在探讨其在角质形成细胞活化中的作用。

材料和方法：采用实时PCR和免疫荧光技术检测咪喹莫特（IMQ）诱导的银屑病样小鼠SAA的表达。用SAA中和抗体治疗银屑病样小鼠，检测SAA的体内功能。使用CCK-8分析监测细胞活力。实时PCR检测与分化和炎症相关的基因表达。Ki67号机组+用流式细胞仪分析百分率和免疫标志物。通过RNA干扰检测甲酰肽受体样1（FPRL1）参与SAA信号转导。用免疫共沉淀法检测SAA与FPRL1的结合。Western blotting用于评估下游信号分子的磷酸化。

结果：SAA在IMQ治疗的银屑病样小鼠皮损中高表达，中和SAA可减轻表皮增生和炎症。SAA在体外促进角质形成细胞增殖和免疫介质的表达，同时抑制分化。SAA对角质形成细胞增殖和炎症的影响由FPRL1介导，并激活PI3K/Akt通路。

结论：这些观察结果表明，SAA/FPRL1通过促进角质形成细胞增殖和炎症参与银屑病的发病机制，从而为疾病治疗提供了潜在的治疗靶点。

关键词：咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠；角质形成细胞；银屑病；血清淀粉样蛋白A。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
血清淀粉样蛋白A(南非航空公司)imiquimod的表达增加(国际货币基金组织)诱导的银屑病皮肤损伤。IMQ公司按照材料和方法一节中的描述构建诱导银屑病小鼠模型。A、，SAA mRNA对照组背部皮肤中的表达（局部凡士林，n=6）和IMQ公司实时检测治疗小鼠（n=6）聚合酶链反应。每个点代表从对照或IMQ公司治疗小鼠。数据以平均值±表示扫描电镜三个不同的实验(***P（P）<.001，学生t吨‐测试）。B、 使用抗南非航空公司对照组和对照组背部皮肤中的抗体IMQ公司所示为经处理的小鼠。比例尺=100μm。数据代表三个独立实验之一
图2
图2
中和血清淀粉样蛋白A(南非航空公司)减轻咪喹莫特的表皮增生(IMQ公司)诱导小鼠。国际货币基金组织用中和抗南非航空公司抗体或对照IgG。A、 代表性临床图片(顶部)和H&E染色(底部)显示在的皮肤部分BALB公司/c用局部凡士林和ip注射抗南非航空公司抗体（n=6），局部凡士林和ip对照IgG（n=5），局部IMQ公司和ip反南非航空公司抗体（n=6），或局部IMQ公司治疗第14天，ip对照IgG（n=6）。比例尺=50μm。B、 测量了皮肤背面的表皮厚度和真皮中的（C）浸润细胞南非航空公司抗体或对照IgG处理小鼠。D、，伊利诺伊州‐17A和（E）CCL公司20信使核糖核酸实时检测表达聚合酶链反应对于B‐E，每个点代表从小鼠获得的皮肤样本。数据代表三个独立实验之一(*P（P）<.05, **P（P）<.01，单向方差分析)
图3
图3
血清淀粉样蛋白A(南非航空公司)增加角质形成细胞增殖并抑制分化。用不同剂量的南非航空公司（0、1、5、10、20和50μg/mL），72小时后，用CCK公司‐8分析，（B）和Ki67+百分比通过流式细胞术分析进行评估。显示了三个独立实验的代表性直方图。（C）角蛋白5(韩元5） ，角蛋白10(韩元10),丝聚蛋白(FLG公司)以及洛里克林(LOR公司)然后通过实时评估基因表达聚合酶链反应并根据GAPDH mRNA基因表达以培养基对照的平均折叠诱导绘制。（D） 在有或无20μg/mL CaCl2的情况下，用1.2 mmol/L CaCl2或0.03 mmol/LCaCl2处理角质形成细胞南非航空公司72小时后，测量细胞数。（E） 在存在或不存在20μg/mL的条件下，用1.2 mmol/L CaCl2或0.03 mmol/L CaCl2处理角质形成细胞南非航空公司24、48和72小时后LOR公司通过实时评估聚合酶链反应来自（A‐E）的数据表示平均值±扫描电镜三个实验中的一个(*P（P）<.05, **P（P）<.01，单向方差分析）
图4
图4
FPRL公司中需要1个南非航空公司诱导角质形成细胞增殖。A、 基因表达FPRL公司1在培养的角质形成细胞和永生HaCaT细胞中，通过RT公司‐聚合酶链反应一个实验代表三个实验。B、 的绑定南非航空公司到FPRL公司用免疫共沉淀法分析角质形成细胞中的1。一个实验代表三个实验。C、 用si转染角质形成细胞核糖核酸寡糖特异性FPRL公司1（硅FPRL公司1） 或非特定si核糖核酸寡糖（siControl），随后用20μg/mL刺激南非航空公司24小时，以及（C）信使核糖核酸和（D）蛋白表达FPRL公司1人通过实时评估聚合酶链反应和Western blot。一个实验代表三个实验。si核糖核酸用20μg/mL刺激转染的角质形成细胞南非航空公司72小时后，（E）用CCK公司‐8分析，（F）和Ki67+百分比通过流式细胞术分析进行评估，（G）和LOR公司通过实时评估聚合酶链反应.来自（C、E、F和G）的数据表示平均值±扫描电镜三个实验中的一个(*P（P）<.05, **P（P）<.01，单向方差分析)
图5
图5
FPRL公司1介导由南非航空公司.si核糖核酸转染角质形成细胞用南非航空公司持续24小时。（A）伊利诺伊州‐1β、 （B）CCL公司20和（C）DEFB公司4然后通过实时评估基因表达聚合酶链反应并根据GAPDH公司 信使核糖核酸（D）表达水平人类白细胞抗原‐博士和ICAM公司‐1通过流式细胞仪进行分析。显示了具有代表性的直方图。（A‐D）中的数据表示平均值±扫描电镜三个实验(*P（P）<.05, **P（P）<.01，单向方差分析)
图6
图6
南非航空公司激活圆周率3K/Akt信号通路。A、 用不同浓度的南非航空公司持续15分钟圆周率3K、Akt、Erk1/2和核聚变采用Western blot检测κB p65。β-actin用于验证每条泳道的蛋白质负荷是否相等。显示了三个独立实验的代表性印迹。B、 用Wortmanin（100 nmol/L）或年添加前294002（50μmol/L）南非航空公司（20微克/毫升）。培养72小时后，用CCK公司‐8分析。C、 LOR公司 信使核糖核酸通过实时测量液位聚合酶链反应.（B和C）中的数据表示平均值±扫描电镜具有类似结果的三个实验(*P（P）<.05, **P（P）<.01，单向方差分析). （D） si核糖核酸转染角质形成细胞用南非航空公司用Western blot分析Akt的磷酸化。显示了三个独立实验的代表性斑点
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