跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年12月1日；11（12）：e0167658。
doi:10.1371/journal.pone.0167658。 电子收集2016。

肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子通过典型NF-κB/MMP9途径促进肝星状细胞迁移

徐明翠 1, 张峰 1, 王爱秀 2, 陈旺 2, 于曹 2, 张明（Ming Zhang） 2, 张明明 2, Min Su（苏敏） 2, 邹小平 2, 徐桂芳 2, 裕正诸葛 1
附属公司

肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子通过典型NF-κB/MMP9途径促进肝星状细胞迁移

徐明翠等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

在肝脏中，肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导剂（TWEAK）的信号和功能主要与肝脏再生相关。然而，TWEAK对肝纤维化的作用尚未完全阐明。为了研究TWEAK对人肝星状细胞（HSC）的影响并探讨相关的潜在机制，用TWEAK培养人HSC细胞系-LX-2。跨阱法检测细胞迁移；用细胞计数试剂盒-8评价细胞活力；定量实时聚合酶链反应和western blotting检测MMP1、MMP2、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13基因的表达；酶联免疫吸附试验检测基质金属蛋白酶（MMPs）活性；小干扰RNA转染用于去除MMP9和p65。跨阱分析结果表明，TWEAK促进了LX-2的迁移。随后，我们的数据证明，TWEAK可以诱导LX-2细胞中MMP9的表达和活性，从而增强迁移。此外，我们的研究结果表明，TWEAK上调了IκBα和p65蛋白的磷酸化，从而增加了LX-2细胞中MMP9的表达。同时，TWEAK治疗后α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白和结蛋白表达上调。本研究的结果表明，TWEAK通过典型的NF-κB/MMP9途径促进HSC迁移，这可能为TWEAK靶向治疗肝纤维化提供了分子基础。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。TWEAK促进LX-2细胞迁移。
（A） 用载体（PBS）或20 ng/ml、40 ng/ml和100 ng/ml TWEAK处理LX-2细胞24 h，然后进行跨阱分析。这里显示的数据来自三个具有类似结果的独立实验。原稿放大200倍。（B） 与对照组相比，迁移细胞的数量显示为直方图。数据显示为基于三个独立实验的五个区域中细胞的平均值。（C） 用载体（PBS）或不同浓度的TWEAK处理LX-2细胞24小时或48小时，并用CCK-8进行分析。结果表示为三个独立实验的平均值±SD**P（P）<0.05, ***P（P）<与对照组比较0.01。
图2
图2。TWEAK显著增加LX-2细胞MMP7、MMP8、MMP9、MMP13的表达和MMP9的活性。
（A） 用qRT-PCR法检测40 ng/ml和100 ng/ml TWEAK处理24 h的LX-2细胞中MMP7、MMP8、MMP9和MMP13的mRNA表达。（B） 用qRT-PCR检测40 ng/ml和100 ng/ml TWEAK作用24 h的LX-2细胞中MMP1、MMP2、MMP3、MMP10、MMP11和MMP12的mRNA。β-actin作为内对照。（C） Western blotting检测用40 ng/ml和100 ng/ml TWEAK处理24 h的LX-2细胞中MMP7、MMP8、MMP9和MMP13的表达。以β-actin为负荷对照。（D） 用40 ng/ml和100 ng/ml TWEAK处理24 h后，Elisa检测LX-2细胞培养液中激活的MMP9的表达。结果表示为三个独立实验的平均值±SD*P（P）<0.05时**P（P）<0.01****P（P）<0.0001.
图3
图3。MMP9敲除抑制LX-2细胞对TWEAK的迁移。
（A） 用QRT-PCR检测转染对照siRNA（20nM）或MMP9特异性siRNA（20 nM）的LX-2细胞中MMP9的表达。β-actin起到了内部控制作用。（B） 用对照siRNA（20nM）或MMP9特异性siRNA（20 nM）转染LX-2细胞48 h，再与100 ng/ml TWEAK孵育24 h。通过western blotting分析MMP9敲除的效果。（C） 用对照siRNA或MMP9特异性siRNA转染LX-2细胞48小时，并进一步用100ng/ml TWEAK孵育24小时。通过transwell测定分析迁移。原稿放大200倍。（D） 迁移细胞的数量以直方图显示，与其他组相比，以平均值±SD表示的数据代表三个独立实验****P（P）<0.0001.
图4
图4。TWEAK诱导LX-2细胞典型NF-κB通路激活，然后增加MMP9的表达。
（A） 制备全细胞提取物，并通过western blotting分析用40 ng/ml和100 ng/ml TWEAK处理24 h的LX-2细胞中的p-IκBα、IκBα和p-p65、p65。β-actin作为内部对照。（B） 通过qRT-PCR（B）和western blotting（C）检测p65在LX-2细胞中的表达，该细胞转染了干扰RNA（20nM）或p65特异性siRNA。β-actin起到了内部控制作用。（D） 用对照siRNA（20nM）或p65特异性siRNA（20 nM）转染LX-2细胞48 h，再与TWEAK（100 ng/ml）孵育24 h。用western blotting检测细胞裂解液中p65、p-p65和MMP9的蛋白。β-actin作为负荷对照。所有数据均表示为三个独立实验的平均值±SD****P（P）<0.0001.
图5
图5。TWEAK显著增加LX-2细胞中α-SMA、波形蛋白、结蛋白的表达，改变细胞形态。
用qRT-PCR和western blotting分析40 ng/ml和100 ng/ml TWEAK处理24 h的LX-2细胞中α-SMA、波形蛋白、结蛋白的mRNA（A）和蛋白（B）。β-actin起到了内部控制作用。数据表示为三个独立实验的平均值±SD。（C） 在LX-2细胞中，磷灰石染色的肌动蛋白细胞骨架（绿色）。细胞核用DAPI（蓝色）染色。这里显示的数据来自三个具有类似结果的独立实验。比例尺，50微米*P（P）<0.05,**P（P）<0.005,***P（P）<0.0005,****P（P）<0.0001.
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Hernandez-Gea V，Friedman SL.肝纤维化的发病机制。2011年《病理学年鉴》；6:425–56. 10.1146/anurev-pathol-011110-130246-内政部-公共医学
    1. Puche JE，Saiman Y，Friedman SL。肝星状细胞与肝纤维化。2013年《综合物理》；3(4):1473–92. 10.1002/cphy.c120035-内政部-公共医学
    1. Cao Y、Szabolcs A、Dutta SK、Yaqoob U、Jagavelu K、Wang L等。Neuropilin-1介导不同的R-Smad信号和肌成纤维细胞表型。生物化学杂志2010；285(41):31840–8. 10.1074/jbc。M110.151696号-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Cao S、Yaqoob U、Das A、Shergill U、Jagavelu K、Huebert RC等。Neuropilin-1通过增强肝星状细胞中PDGF/TGF-beta信号，促进啮齿动物和人类肝脏的肝硬化。临床投资杂志2010；120(7):2379–94. 10.1172/JCI41203-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Wang R，Ding Q，Yaqoob U，de Assuncao TM，Verma VK，Hirsova P，等。肝星状细胞引起鞘氨醇1-磷酸依赖性迁移的外显子粘附和内化。生物化学杂志2015；290（52）：30684–96。10.1074/jbc。M115.671735号-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

MeSH术语

赠款和资金

这项工作得到了国家自然科学基金（批准号81570550）的支持网址：http://www.nsfc.gov.cn/)至YZZG。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。