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.2016年11月；12(5):2803-2810.
doi:10.3892/etm.2016.3736。 Epub 2016年9月21日。

MPP+处理星形胶质细胞自噬激活的潜在保护作用

寸州沈 1, 西安文标 1, 周红岩 1, 陈玲 1, 钟培 1
附属公司

MPP+处理星形胶质细胞自噬激活的潜在保护作用

寸州沈等。 实验治疗学. 2016年11月.

摘要

具有多种重要功能的星形胶质细胞以前与帕金森病（PD）有关，特别是在PD的1-甲基-4-苯基吡啶（MPP+）和1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）模型中。MPP+是MPTP的有毒代谢产物，由单胺氧化酶B的酶活性产生，其主要位于星形胶质细胞中。MPP+作为线粒体复合物I抑制剂。自噬是真核细胞中进化上保守的自噬途径，它是对各种应激（包括饥饿和氧化应激）的反应。此前研究表明，锂治疗通过抑制肌醇单磷酸酶诱导星形胶质细胞自噬，肌醇单磷酸酶可能有助于治疗神经退行性疾病，包括亨廷顿病，其中有毒蛋白质是自噬底物。因此，本研究采用western blotting和MTT分析，旨在研究锂诱导的自噬对MPP+治疗引起的星形胶质细胞损伤的保护作用及其潜在机制。本研究结果表明，锂能够诱导经MPP+处理的星形胶质细胞自噬，这可能是通过激活磷脂酰肌醇3-激酶/AKT途径实现的。

关键词：1-甲基-4-苯基吡啶；3-甲基腺嘌呤；帕金森病；星形胶质细胞；自噬；锂；微管相关蛋白轻链-3；磷酸化AKT。

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数字

图1。
图1。
MPP+对原代星形胶质细胞活性的浓度依赖性影响。用0、50、100、200、400、800或1200µM MPP+处理细胞24小时，并使用MTT分析测定细胞活力。使用微孔板阅读器测量吸光度。数据表示为五个实验平均值的平均值±标准误差*与未经治疗的对照组相比，P<0.05。MPP+，1-甲基-4-苯基吡啶。
图2。
图2。
MPP+对原代星形胶质细胞中LC3 II蛋白表达水平的影响。（A和B）用FBS（Con）处理细胞，不使用FBS（饥饿）或MPP+（100、200、400、800或1200µM）处理24 h。自噬通过使用western blotting检测LC3 II的蛋白表达水平来确定。通过测量带密度来量化蛋白质浓度。（C和D）用FBS（Con）、不含FBS（饥饿）或MPP+（200、400或800µM）和溶酶体抑制剂处理细胞24小时。用western blotting检测LC3 II的蛋白表达水平。通过测量带密度来量化蛋白质浓度。数据表示为三次试验平均值的平均值±标准误差*与对照组相比，P<0.05。MPP+，1-甲基-4-苯基吡啶；LC3，微管相关蛋白轻链-3；胎牛血清；Con，对照组。
图3。
图3。
自噬抑制剂对MPP+处理的星形胶质细胞活性的影响。（A） 3-MA对MPP+处理细胞活力的影响。用3-MA（10 mM）预处理星形胶质细胞1 h，然后用MPP+（400或800µM）处理24 h。（B）不同剂量的3-MA对MPP+处理细胞活力的影响。用3-MA（2、5或10 mM）预处理星形胶质细胞1 h，然后用MPP+（800µM）处理24 h。（C）CQ对MPP+处理细胞活力的影响。用CQ（0.01 mM）预处理星形胶质细胞1 h，然后用MPP+（400或800 mM）处理24 h。使用MTT分析测定细胞活力，并使用微孔板阅读器测量吸光度。数据表示为一式三份实验平均值的平均值±标准误差*与Con和MPP+处理的星形胶质细胞相比，P<0.05。MPP+，1-甲基-4-苯基吡啶；3-甲基腺嘌呤；CQ，氯喹；Con，对照组。
图4。
图4。
3-MA预处理对MPP+处理的星形胶质细胞中LC3 II和pAkt蛋白表达水平的影响。用3-MA（10mM）预处理星形胶质细胞1小时，之后用MPP+（400或800µM）处理24小时。使用蛋白质印迹检测（A）LC3 II和（B）pAkt的蛋白质表达水平。通过计算OD值量化（C）LC3 II和（D）pAkt的相对蛋白表达水平。数据表示为三次试验平均值的平均值±标准误差*与对照组相比P<0.05；#与MPP+治疗的星形胶质细胞相比，P<0.05。3-甲基腺嘌呤；LC3Ⅱ，微管相关蛋白轻链-3；MPP+，1-甲基-4-苯基吡啶鎓；OD，光密度；Con，控制。
图5。
图5。
锂对MPP+处理的星形胶质细胞的保护作用。用Li（10 mM）预处理星形胶质细胞1 h，然后用MPP+（400或800µM）处理24 h。使用MTT分析测定细胞活力，并使用微孔板阅读器测量吸光度。数据表示为三次试验平均值的平均值±标准误差*与对照组相比，P<0.05。MPP+，1-甲基-4-苯基吡啶；锂，锂；Con，控制。
图6。
图6。
锂预处理对MPP+处理的星形胶质细胞中LC3 II和pAkt蛋白表达水平的影响。用Li（10 mM）预处理星形胶质细胞1 h，然后用MPP+（400µM）和CQ（0.01 mM）处理24 h。（A）用western blotting检测LC3 II的蛋白表达水平。（B） 用Li（10 mM）预处理星形胶质细胞1 h，然后用MPP+（400µM）处理24 h。用western blotting检测pAkt的蛋白表达水平。通过量化OD值来确定（C）LC3 II和（D）pAkt的相对蛋白表达水平。数据表示为三次试验平均值的平均值±标准误差*与对照组相比P<0.05；#与MMP+组相比P<0.05；##与单用3-MA相比，P<0.05。Li，锂；LC3Ⅱ，微管相关蛋白轻链-3；MPP+，1-甲基-4-苯基吡啶；CQ，氯喹；OD，光密度；Con，控制。
图7。
图7。
锂诱导的自噬对星形胶质细胞具有保护作用。用Li（10mM）预处理星形胶质细胞1小时，之后用MPP+（400或800µM）和CQ（0.01mM）处理24小时。使用MTT测定法测定细胞活力，并使用微孔板读数器测量吸光度。数据表示为三次试验平均值的平均值±标准误差*与对照组相比，P<0.05。锂，锂；MPP+，1-甲基-4-苯基吡啶；CQ，氯喹；Con，控制。
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