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.2016年12月27日；7(52):86648-86659.
doi:10.18632/目标13429。

小鼠Sirt3通过FoxO1去乙酰化促进AngII诱导的心肌肥大中的自噬

李靖远 1, 陈同帅 1, 明晓 1, 李娜（Na Li） 1, 王树健 1, 苏红燕 1, 郭晓斌 1, 刘慧（音） 1, 方英燕 1, 易阳 1, 张云 1, Peili布 1
附属公司

小鼠Sirt3通过FoxO1去乙酰化促进AngII诱导的心肌肥大中的自噬

李靖远等。 肿瘤靶点. .

勘误表in

摘要

Sirt3是一种线粒体NAD+依赖的组蛋白脱乙酰化酶，是哺乳动物Sirtuin家族中唯一被证明能延长寿命的成员。经处理的Sirt3短形式已被证明针对能量代谢和线粒体应激适应程序的许多介质。自噬作为一种动态循环机制，提供能量或代谢底物。在心脏应激触发的机制中，关于自噬是一种保护性反应还是有害反应的观点各不相同。在这里，通过用慢性血管紧张素II输注诱导Sirt3基因敲除小鼠心肌肥厚四周，我们确定了Sirt3在心肌肥厚和自噬中的作用。在这项研究中，与野生型小鼠相比，Sirt3基因敲除小鼠的心脏功能恶化，自噬受损。此外，慢病毒转染后Sirt3的过度表达通过促进自噬减轻心肌细胞肥大。我们进一步证明了Sirt3可以与FoxO1结合并激活其去乙酰化。随后，去乙酰化FoxO1转位到细胞核，促进下游E3泛素连接酶，如肌肉环指1（MuRF1）和肌肉萎缩F-box（MAFbx，Atrogin1）。总之，这些结果表明，通过减少FoxO1的乙酰化修饰，Sirt3的激活对改善自噬流量至关重要，而乙酰化修饰反过来又减轻心肌肥厚。

关键词：福克斯O1；Sirt3；自噬；脱乙酰化修饰；心肌肥厚。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1。Sirt3缺乏加剧AngII诱导的小鼠心肌肥厚
A类在假手术组和AngII处理的WT和Sirt3-KO小鼠心脏中进行Sirt3短形式的免疫印迹分析。以微管蛋白表达作为负荷对照。B类.WT和Sirt3-KO小鼠输注生理盐水或AngII 4周后的心脏重量与体重的比值。（n=5）C类左室壁厚度用超声心动图测量，如方法部分所述。（n=5）D-E公司苏木精/伊红染色的对照组或AngII处理的WT和Sirt3-KO小鼠心脏切片显示心肌细胞丢失或脱落。心脏的Masson三色染色切片用于检测纤维化（蓝色）。该图显示了假手术或AngII治疗的WT和Sirt3-KO小鼠间质纤维化的定量。（n=5）比例尺：20μm。F类.假手术或AngII治疗的WT和Sirt3-KO小鼠心脏样品中的ANF和Myh7 mRNA水平。（n=5）数据表示为三个独立实验的平均值±SEM*P<0.05，**P<0.01。
图2
图2。Sirt3调节体内自噬流量
A-D公司假手术和AngII处理的WT和Sirt3-KO小鼠心脏中LC3、Beclin-1和p62的免疫印迹分析。GAPDH表达作为负荷控制。柱状图显示了通过密度分析测定的LC3-II、Beclin-1和p62的定量。（n=5）E类自噬标记LC3的免疫组织化学分析。比例尺：20μm。数据以三个独立实验的平均值±SEM表示。*P<0.05，**P<0.01。
图3
图3。AngII激活Sirt3增加体外自噬流量
A类对AngII（1μM，24h）或氯喹（CQ，60μM，16h）处理的初生大鼠心肌细胞进行Sirt3、LC3免疫印迹分析。以微管蛋白表达作为负荷对照。B-C公司对WT和Sirt3-KO小鼠的初级新生心肌细胞进行Sirt3和自噬标记物的免疫印迹分析。以微管蛋白表达作为负荷对照。柱状图显示了通过密度分析测定的LC3-II、Beclin-1和p62的定量。（n=5）D-E公司用siRNA-Sirt3转染H9C2心肌细胞，然后用CQ和AngII处理。GAPDH表达作为负荷控制。条形图表示通过密度分析测量的LC3-II水平的量化。（n=5）F类条形图显示了ANF和Myh7 mRNA水平的量化，如D所示。（n=5）数据表示为三个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05，**P<0.01。
图4
图4。Sirt3过表达触发H9C2细胞自噬
A至B对有或无慢病毒感染（MOI=10）的H9C2提取物进行Sirt3、LC3免疫印迹分析。AngII结束前，用慢病毒感染心肌细胞，然后用CQ和3-MA（5mM，8h）刺激心肌细胞。GAPDH表达作为负荷控制。柱状图显示了通过密度分析测定的LC3-II的定量。（n=5）C类在AngII刺激结束之前，对H9C2中LC3进行免疫荧光分析，该H9C2预处理有无CQ。DAPI染色细胞核呈蓝色。图像来自数字共焦显微镜核心设备。比例尺：10μm。D类条形图显示ANF和β-MHC mRNA水平的量化。（n=5）E类有无慢病毒感染的H9C2中α-SMA的免疫荧光分析（MOI=10）。DAPI染色细胞核呈蓝色。图像来自荧光显微镜。比例尺：10μm。数据表示为三个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05，**P<0.01。
图5
图5。Sirt3控制FoxO1的乙酰化状态
A至B在假手术和AngII处理的WT和Sirt3-KO小鼠心脏中对FoxO1和ac-FoxO1进行免疫印迹分析。以微管蛋白表达作为负荷对照。条形图表示通过密度分析测量的ac-FoxO1水平的量化。（n=5）C-D公司.对照组和siRNA-FoxO1组自噬生物标记物和Sirt3的免疫印迹分析。GAPDH表达作为负荷控制。条形图表示通过密度分析测量的LC3-II水平的量化。（n=5）E类用Sirt3抗体免疫沉淀细胞提取物，并用抗FoxO1分析。F类用FoxO1抗体免疫沉淀细胞提取物，并用抗Sirt3分析。数据表示为三个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05，**P<0.01。
图6
图6。Sirt3促进FoxO1的核移位和转录活性
A类。H9C2中FoxO1的免疫荧光分析，有无慢病毒感染（MOI=10）。DAPI染色细胞核呈蓝色。图像来自荧光显微镜。比例尺：10μm。B-D公司。对照组和siRNA-FoxO1组中MuRF1和MAFBx的免疫印迹分析。GAPDH表达作为负荷控制。条形图表示通过密度分析测量的MuRF1和MAFBx水平的量化。（n=5）E类条形图显示MuRF1和MAFBx mRNA水平的量化。（n=5）数据表示为三个独立实验的平均值±SEM。*P<0.05，**P<0.01。
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