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.2016年12月；14(6):5084-5092.
doi:10.3892/mmr.2016.5907。 Epub 2016年10月31日。

机械拉伸通过NF-κB激活调节C2C12成肌细胞中microRNA的表达谱

文西华 1, 张马慧 2, 王永奎 1, 雷雨 1, 赵婷婷 1, 邱晓忠 1, 王乐余 1
附属公司

机械拉伸通过NF-κB激活调节C2C12成肌细胞中microRNA的表达谱

文西华等。 分子医学代表. 2016年12月.

摘要

微RNA（miRNAs/miRs）和核因子（NF）-κB活化参与机械拉伸诱导的骨骼肌再生。然而，据报道，在机械拉伸诱导的肌肉发生过程中，有少量miRNAs与NF‑κB激活相关。在本研究中，体外对C2C12成肌细胞进行周期性机械拉伸，以探讨拉伸介导的成肌细胞增殖过程中miRNA表达与NF‑κB活化之间的关系。结果表明，10%的变形、0.125Hz的循环机械拉伸可以促进成肌细胞的增殖。miRNA表达谱随后发生改变；miR‑500、‑1934、‑31、‑378、‑331和‑5097受到下调，而miR−1941受到上调。这些miRNAs均参与拉伸介导的成肌细胞增殖。值得注意的是，在用NF‑κB抑制剂处理0.125 Hz机械拉伸的C2C12细胞后，这些miRNAs的表达被逆转，同时伴随着C2C12的细胞生长抑制。因此，据我们所知，本研究首次证明NF‑κB‑依赖性miRNA谱与机械拉伸诱导的成肌细胞增殖相关。

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数字

图1。
图1。
适当的机械拉伸可促进成肌细胞增殖。（A） 机械拉伸频率对C2C12细胞活力的影响，如Cell Counting kit-8检测所示。（B） 流式细胞术分析第4天0.125 Hz拉伸成肌细胞和对照细胞的细胞周期进展*与对照组相比，P<0.05。†与0.125 Hz组相比，P<0.05。n=3。OD，光密度；DPI，DNA增殖指数。
图2。
图2。
对0.125 Hz机械拉伸组和对照组之间差异表达miR的log2值进行分层聚类分析。绿色表示机械拉伸组与对照组相比表达下调；红色表示机械牵张组与对照组相比表达上调；黑色表示两组之间的表达没有显著差异。miR、微小RNA。
图3。
图3。
（A） 与对照组相比，0.125 Hz机械拉伸组的miRNAs表达存在差异。（B） 对照组和0.125 Hz机械拉伸组中miR-500、miR-1934、miR-31、miR-378、miR-331、miR-5097和miR-1941的相对表达水平。0.125 Hz机械拉伸组的表达水平归一化为对照组*与对照组相比，P<0.05。n=3。miR，microRNA。
图4。
图4。
（A） 抑制NF-κB对0.125 Hz拉伸C2C12细胞中NF-κ子B p65、P-NF-κ·B p65和I-κBα蛋白表达水平的影响*与对照组相比，P<0.05。†与拉伸组相比，P<0.05。Φ与2.5µM BAY组相比，P<0.05。n＝3。（B） 对照组和5µM BAY+机械拉伸组中miR-500、miR-1934、miR-31、miR-378、miR-331、miR-5097和miR-1941的相对表达水平。将5µM Bay+0.125 Hz机械拉伸组的表达水平归一化为对照组*与对照组相比，P<0.05。n=3。miR，microRNA；核因子-κB；P-，磷酸化；I-κBα，NF-κB抑制剂；海湾，海湾11-7082。
图5。
图5。
NF-κB抑制剂BAY抑制拉伸诱导的C2C12细胞增殖。（A） NF-κB抑制对0.125 Hz拉伸C2C12细胞活力的影响，如细胞计数kit-8分析所检测到的*与对照组相比，P<0.05。†与2.5µM BAY组相比，P<0.05。（B） 流式细胞术分析第4天用5µM BAY处理的拉伸成肌细胞和对照细胞的细胞周期进展*与对照组相比，P<0.05。n=3。核因子-κB；海湾，海湾11-7082；DPI，DNA增殖指数。
图6。
图6。
（A） western blotting检测到10µM PDTC对0.125 Hz拉伸C2C12细胞中NF-κB p65、P-NF-κ）B p65和I-κBα蛋白表达水平的影响。（B） 对照组和10µM PDTC+机械拉伸组中miR-500、miR-1934、miR-31、miR-378、miR-331、miR-5097和miR-1941的相对表达水平。（C） 10µM PDTC对0.125 Hz拉伸诱导的成肌细胞增殖的影响*与对照组相比，P<0.05。n=3。miR，microRNA；核因子-κB；P-，磷酸化；I-κBα，NF-κB抑制剂；PDTC，吡咯烷二硫代氨基甲酸酯；DPI，DNA增殖指数。
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