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.2016年10月；12(4):1993-2002.
doi:10.3892/etm.2016.3568。 Epub 2016年8月4日。

蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛小鼠模型中小窝蛋白-1表达的变化

叶雄 1, 王雪敏 1, 明忠 1, 李泽群 1, 王志 1, 左福田 1, 匡正 1, 仙溪潭 1
附属公司

蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛小鼠模型中小窝蛋白-1表达的变化

叶雄等。 实验治疗学. 2016年10月.

摘要

本研究的目的是评估蛛网膜下腔出血（SAH）大鼠模型中延迟性脑血管痉挛（DCVS）后基底动脉小窝蛋白-1的表达水平，以探讨小窝蛋白1与DCVS之间的关系及其作为SAH DCVS治疗的潜力。共150只Sprague-Dawley大鼠被随机分为空白组、生理盐水组和SAH组。模型建立后，SAH组和生理盐水组分为第3、5、7和14天。通过将自体动脉血双次注入马加那池建立SAH小鼠模型，并使用Bederson神经严重程度评分检测DCVS。苏木精-伊红（HE）染色观察基底动脉管内周长及基底动脉壁厚度变化。采用免疫荧光和western blot分析检测基底动脉小窝蛋白-1蛋白水平的变化；而通过逆转录定量聚合酶链反应检测小窝蛋白-1 mRNA表达水平的改变。在本研究中，在第3天（n=3）、第5天（n=5）和第7天（n=2）组中，15只小鼠死于SAH诱导的DCVS。SAH组在观察过程中，空白对照组和生理盐水组均未观察到死亡。SAH组所有小鼠的Bederson神经系统严重程度评分均≥1；而空白组和生理盐水组均未检测到神经损伤，证明模型成功。HE染色评估血管痉挛，结果显示SAH组第3天基底动脉管内周长减小；而在第7天组达到峰值。与空白组和生理盐水组相比，基底动脉壁厚度显著增加（P<0.05），基底动脉管壁厚度和内周长无明显变化。通过免疫荧光和蛋白质印迹分析检测，与空白组和生理盐水组相比，SAH组第7天小窝蛋白-1的表达水平显著降低（P<0.01），其中未检测到显著变化。RT-qPCR检测到，SAH组Caveolin-1 mRNA表达水平在第7天显著高于空白组和生理盐水组（P<0.01）。此外，与空白组和生理盐水组相比，SAH组在第14天检测到显著差异（P>0.05），其中未检测到显著变化。因此，本研究结果表明，小窝蛋白-1蛋白在SAH模型大鼠基底动脉中下调，这可能与DCVS有关。这表明小窝蛋白-1可能是治疗DCVS的潜在靶点。

关键词：洞穴-1；迟发性脑血管痉挛；蛛网膜下腔出血。

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数字

图1。
图1。
新鲜脑组织取自（A）空白组和（B）实验组。
图2。
图2。
用光学显微镜（放大20倍）检测蛛网膜下腔出血（SAH）诱导的迟发性脑血管痉挛小鼠模型基底动脉的苏木精和伊红染色。（A） 空白组、（B）生理盐水组、（C）实验组给予蛛网膜下腔出血3天、（D）5天、（E）7天和（F）14天。空白组和生理盐水组基底动脉内膜光滑，内弹力保持完整。与空白组和生理盐水组相比，蛛网膜下腔出血组基底动脉内周长减少，光镜下基底动脉动脉壁厚度增加，内膜呈屈曲状。
图3。
图3。
蛛网膜下腔出血（SAH）诱导的迟发性脑血管痉挛（DCVS）小鼠模型基底动脉小窝蛋白-1表达的免疫荧光分析（放大40倍）。（A） 空白组、（B）生理盐水组和实验组接受SAH诱导的DCVS治疗（C）5和（D）7天。红色荧光表示小窝蛋白-1表达；而蓝色表示细胞核染色。与空白组和生理盐水组相比，SAH诱导DCVS 5天的实验组基底动脉内皮细胞Caveolin-1表达显著降低（P<0.05）。尽管小窝蛋白-1的表达在第7天显著改善，但与空白组和生理盐水组相比，第7天的表达仍显著降低（P<0.05）。生理盐水组与空白组之间未发现显著差异。
图4。
图4。
蛛网膜下腔出血（SAH）诱导的迟发性脑血管痉挛小鼠模型基底动脉小窝蛋白-1表达的Western blot分析。GAPDH被用作内部参考。1、SAH组第3天；SAH组第5天；SAH组第7天；SAH组第14天，空白组第5天；生理盐水组第7天、第6天。GAPDH，3-磷酸乙醛脱氢酶。
图5。
图5。
caveolin-1蛋白的相对表达水平，如灰度分析所示。蛛网膜下腔出血；GAPDH，3-磷酸甘油醛脱氢酶*与空白组相比，P<0.05**与生理盐水组相比，P<0.05；#与其他时间点相比P＜0.05。
图6。
图6。
小窝蛋白-1 mRNA表达水平的逆转录定量聚合酶链反应分析。小窝蛋白-1mRNA表达在SAH组的所有时间点均显著上调，在SAH第7天达到峰值（P<0.05）。空白组和生理盐水组之间未发现显著差异。蛛网膜下腔出血*与空白组相比，P<0.05**与生理盐水组相比，P<0.05；#与其他时间点相比，P<0.05。
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