跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年12月；112(3):677-688.
doi:10.1093/cvr/cvw209。 Epub 2016年9月22日。

内皮细胞衍生的戊四氮限制循环血管生成细胞的血管修复治疗潜力

克里斯蒂娜·奥尼尔 1, Jasenka Guduric-Fuchs公司 1, 莎拉·E·J·钱伯斯 1, 米歇尔·奥多尔蒂 1, 芭芭拉·波塔齐 2, 艾伦·W·斯蒂特 1, Reinhold J麦地那 三
附属公司

内皮细胞衍生的戊四氮限制循环血管生成细胞的血管修复治疗潜力

克里斯蒂娜·奥尼尔等。 心血管研究. 2016年12月.

摘要

目的：循环血管生成细胞（CAC）促进缺血组织的血运重建，尽管其作用机制和输送不同数量的这些细胞用于治疗的后果尚不清楚。本研究探讨了CAC调节血管形成的分子机制。

方法和结果：低CAC（2×105细胞/mL）和mid（2×106cells/mL）细胞密度显著促进体外内皮细胞管形成，而高密度（HD）CACs（2×107细胞/mL）显著抑制了这种血管生成过程。体内，基于Matrigel的血管生成分析证实中密度CACs是促血管生成的，而HD CACs则是抗血管生成的。CAC-EC条件培养基的分泌组特征确定了戊四氮3（PTX3）仅存在于HD CAC-EC共培养中。重组PTX3在体内外抑制内皮管形成。重要的是，我们的数据表明，当使用中和抗体或内皮细胞中的PTX3 siRNA阻断PTX3生物活性时，HD CAC-EC共培养中观察到的抗血管生成作用显著消失。我们证明PTX3的内皮来源是由暴露于HD CACs引起的。此外，我们证实PTX3抑制成纤维细胞生长因子（FGF）2介导的血管生成，并且PTX3 N末端（包含FGF结合位点）负责这种抗血管生成作用。

结论：内皮细胞暴露于HD CACs后，会释放PTX3，以自分泌方式显著损害血管再生反应。因此，当使用这些细胞作为缺血性疾病的细胞治疗时，CAC密度和伴随的血管分泌PTX3的释放是关键考虑因素。

关键词：细胞治疗；循环血管生成细胞；贫血症；PTX3；血管修复。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
从人类血液中分离的CAC富含髓细胞。(A类)培养第7天CAC的相位对比图。比例尺100μm。绿色的波形蛋白、CD31、VEGFR2和CD14的代表性免疫细胞化学图像。细胞核用蓝色DAPI染色。放大倍数×10显示在上面板中，×40显示在下面板中。(B类)全血、MNC和CAC的流式细胞术免疫表型。红色直方图显示全血细胞、橙色直方图MNC和绿色直方图CAC。以灰色直方图显示的相应同种对照。(C类)流式细胞术定量检测MNC和CAC上T和B淋巴细胞、粒细胞和巨噬细胞的细胞表面标记物表达。橙色直方图表示MNC，绿色直方图表示CAC。以灰色直方图显示的相应同种对照。
图2
图2
CACs的血管生成潜能受其细胞密度的影响。(A类)在3D Matrigel试管形成分析中，72小时后绿色标记的MEC和红色标记的CAC共同培养的代表性图像。标尺250μm。(B类)图中所示实验组试管面积的量化和统计分析A类(n个=3–4，单向-ANOVA**P（P）与对照组相比<0.01，###P（P）<0.001（相对于MD-CAC）。(C类)不同密度下CACs CM对MEC管成型能力影响的评估(n个=3，单向方差分析*P（P）与对照组相比<0.05，##P（P）与LD-CAC相比<0.01）。(天)使用LIVE/DEAD试剂盒进行细胞死亡评估的代表性图像。EthD-1显示为红色的死细胞，calcein显示为绿色的活细胞。标尺250μm。量化每个视野（FOV）的死亡细胞数量(n个= 8; 未成对的t吨-测试；ns，不显著）。(E类)石蜡切片的代表性图像体内裸鼠基质胶血管生成模型内皮标记CD31染色为红色。细胞核用DAPI染色为蓝色。Matrigel植入物被黄色虚线包围。标尺250μm。Matrigel植入物内CD31阳性区域的量化和统计分析（数据显示为箱线图，n个=11–21，单向方差分析***P（P）<0.001与对照组*P（P）与对照组相比<0.05；ns，与对照组相比不显著；#P（P）与MD-CAC相比<0.05）。
图3
图3
PTX3仅在HD-CAC和MEC共培养中鉴定，具有抗血管生成功能。(A类)用于CM表征的蛋白质组分析器。阳性对照蛋白斑点显示在左上角、右上角和左下角。阴性对照点位于右下角(n个= 2). (B类)代表性的荧光显微镜图像在体外基于基质胶的3D试管形成测定，使用Calcein以绿色标记的牛MECs或人ECFC，暴露和不暴露于500 ng/mL PTX3。标尺250μm。各组间管子面积的统计比较(n个=6–9，未配对t吨-测试***P（P）与对照组相比<0.001）。(C类)以100 ng/mL或1µL溶媒玻璃体腔内注射1μL PTX3的C57BL/6小鼠的典型扁平安装视网膜。凝集素染色绿色识别视网膜血管。雪崩区域被一条黄线包围。1 mm比例尺。无血管区域的量化(n个=6，成对t吨-测试*P（P）与赋形剂处理的眼睛和PTX3处理的眼睛相比<0.05）。
图4
图4
PTX3介导HD-CAC对MEC的抗血管生成作用。(A类)3D Matrigel肾小管生成模型的代表性图像，显示LD CAC为红色，MEC为绿色。(B类)代表性图像显示红色HD CAC抑制MEC小管形成。(C和D)靶向C末端的PTX3抗体（C学期)和N端（N学期)加入到共同培养体系中。比例尺300μm。(E类)MEC控制标准化后MEC管面积的量化（100%处的红色虚线）（数据显示为条形图n个= 3–6; 单因素方差分析***P（P）< 0.001; ns，不显著）。
图5
图5
内皮细胞对HD-CAC反应产生的PTX3以自分泌抗血管生成的方式发挥作用。(A类)使用qRT-PCR和牛或人特异性引物进行PTX3表达分析，在三个生物复制的热图中进行可视化。(B类)四个生物复制品的CACs和ECFCs人类细胞裂解液中的蛋白质表达分析。(C类)RT-qPCR评估PTX3-siRNA敲除效率(n个=9，单向方差分析***P（P）< 0.001). (天)Western blot评估ECFC中PTX3-siRNA敲除水平。(E类)的代表性图像在体外基于3D Matrigel的试管形成分析显示CAC为红色，ECFC为绿色。标尺300μm(F类)ECFC管面积的量化和统计分析(n个=9，单向方差分析，数据可视化为条形图***P（P）与对照siRNA ECFC相比<0.001，###P（P）<0.001 vs.对照siRNA-ECFC+HD-CAC）。
图6
图6
PTX3损害FGF2介导的内皮细胞功能。(A类)克隆形成试验的代表性图像。ECFC菌落用结晶紫染色。标尺250μm。(B类)FGF2和PTX3对ECFC克隆形成潜能影响的量化和统计分析，量化为结晶紫染色覆盖的总表面积的百分比（%）(n个=9，单向方差分析，数据可视化为条形图***P（P）与对照组相比<0.001，###P（P）<0.001 vs.FGF）。(C类)3D Matrigel的代表图像在体外模型显示ECFC以绿色形成小管。FGF2（5 ng/mL）、人重组PTX3（500 ng/mL。比例尺200μm。(天)管面积的量化(n个=8–10，单向方差分析，数据可视化为条形图**P（P）与对照组相比<0.01，###P（P）<0.001与FGF，$$P（P）与FGF+PTX3相比<0.01）。
图7
图7
高细胞密度的CACs诱导IL1β和TNFα上调，从而增加内皮细胞PTX3的表达。(A类)用qRT-PCR评估共培养中IL1β的表达。ND，无法检测(n个=6，单向-ANOVA）。(B类)通过qRT-PCR评估TNFα的表达。ND，无法检测(n个=3，单向方差分析）。数据表示为平均值±SEM***P（P）<0.001与LD-CAC+MEC相比，###P（P）<0.001与MD-CAC+MEC相比**P（P）与LD-CAC+MEC相比<0.01，以及#P（P）与MD-CAC+MEC相比，<0.05。(C类)Western blot检测用20 ng/mL IL1β或40 ng/mL TNFα或500 ng/mL LPS处理5 h的ECFCs中PTX3表达。(天)拟议机制模型示意图：HD-CAC上调炎症细胞因子IL1β和TNFα的表达，从而诱导内皮细胞表达和PTX3释放，最终损害FGF2诱导的血管生成。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. de Jong R、Houtgraaf JH、Samiei S、Boersma E、Duckers HJ。急性心肌梗死后冠状动脉内干细胞输注：临床试验的荟萃分析和更新。2014年Circ心血管介入；7:156–167.-公共医学
    1. Fadini GP、Agostini C、Avogaro A.外周动脉疾病自体干细胞治疗的荟萃分析和文献系统综述。动脉粥样硬化2010；209:10–17.-公共医学
    1. Medina RJ、O'Neill CL、Sweeney M、Guduric-Fuchs J、Gardiner TA、Simpson DA、Stitt AW。内皮祖细胞（EPC）亚型的分子分析揭示了两种不同身份的不同细胞群。BMC医学基因组学2010；3点18分。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Medina RJ、O'Neill CL、O'Doherty TM、Knott H、Guduric-Fuchs J、Gardiner TA、Stitt AW。髓样血管生成细胞作为替代M2巨噬细胞，通过白细胞介素-8调节血管生成。2011年《分子医学》；17:1045–1055.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Taljaard M、Ward MR、Kutryk MJ、Courtman DW、Camack NJ、Goodman SG、Parker TG、Dick AJ、Galipeau J、Stewart DJ。急性心肌梗死强化血管生成细胞治疗（ENACT-AMI）的原理和设计：第一次急性心肌梗死增强祖细胞治疗的随机安慰剂对照试验。《美国心脏杂志》2010；159:354–360.-公共医学

出版物类型

MeSH术语