The Assembly Factor SDHAF2 Is Dispensable for Flavination of the Catalytic Subunit of Mitochondrial Complex II in Breast Cancer Cells

doi:10.1074/jbc.C116.755017

.2016年10月7日；291(41):21414-21420.

doi:10.1074/jbc。C116.755017。 Epub 2016年9月1日。

组装因子SDHAF2对乳腺癌细胞线粒体复合物Ⅱ催化亚基的Flavination是不必要的

阿耶纳切夫·贝扎沃克·格利塔¹, 董兰凤², 雅库布·罗莱纳^三, 吉里·纽齐尔^4 三

附属公司

¹来自澳大利亚昆士兰4222 Southport格里菲斯大学医学院a.bezawork-geleta@griffith.edu.au。
²来自澳大利亚昆士兰州南港格里菲斯大学医学院，邮编：4222。
^三捷克科学院生物技术研究所，捷克共和国布拉格西部252 50号。
⁴来自澳大利亚昆士兰4222 Southport格里菲斯大学医学院j.neuzil@griffith.edu.au。

PMID： 27587393
预防性维修识别码：项目经理5076811
内政部： 10.1074/jbc。C116.755017号

组装因子SDHAF2对乳腺癌细胞线粒体复合物Ⅱ催化亚基的Flavination是不必要的

阿耶纳切夫·贝扎沃克·格利塔等。生物化学杂志. 2016.

.2016年10月7日；291(41):21414-21420.

doi:10.1074/jbc。C116.755017。 Epub 2016年9月1日。

作者

阿耶纳切夫·贝扎沃克·格利塔¹, 董兰凤², 雅库布·罗莱纳^三, 吉里·纽齐尔^4 三

附属公司

¹来自澳大利亚昆士兰4222 Southport格里菲斯大学医学院a.bezawork-geleta@griffith.edu.au。
²来自澳大利亚昆士兰州南港格里菲斯大学医学院，邮编：4222。
^三捷克科学院生物技术研究所，捷克共和国布拉格西部252 50号。
⁴来自澳大利亚昆士兰4222 Southport格里菲斯大学医学院j.neuzil@griffith.edu.au。

PMID： 27587393
预防性维修识别码：项目经理5076811
内政部： 10.1074/jbc。C116.755017号

摘要

线粒体复合物II或琥珀酸脱氢酶（SDH）处于氧化磷酸化和三羧酸循环的十字路口。研究表明，Sdh5（哺乳动物中的SDHAF2/Sdh5）是酵母中Sdh1亚基（人类细胞中的SDHA）黄变所必需的。这里我们证明，在人类乳腺癌细胞中，SDHAF2/SDH5对SDHA黄变是不必要的。与酵母相比，CRISPR-Cas9烟碱酯酶介导的SDHAF2-KO乳腺癌细胞具有黄染SDHA的特征，并保留完全组装和功能复合物II，以及正常的线粒体呼吸。我们的数据表明，乳腺癌细胞中SDHA黄变作用与SDHAF2无关，采用了另一种机制。

关键词：SDH组装系数；SDHA；SDHAF2；装配系数；肿瘤生物学；癌细胞；细胞生物学；复合II组件；黄素腺嘌呤二核苷酸；黄变；黄素化；哺乳动物；线粒体；线粒体复合体Ⅱ；线粒体呼吸链复合体；琥珀酸脱氢酶。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
**SDHAF2敲除细胞系的产生和SDHA黄素化分析。** A类，显示SDHAF2基因结构和sgRNA靶点的方案。B类亲代细胞HRM曲线分析(标准)和两个选定的克隆。C类分析第一内含子和第二编码外显子中SDHAF2基因中跨越SDHAF2-靶区的核苷酸序列。序列的反向补码(*版次C*)用于反义链分析。*参考序列*，参考序列；*前轮驱动*，向前；利润，反向。D类，WB显示在KO1和KO2细胞系中不存在SDHAF2。肌动蛋白被用作加载控制。E类WB显示CII蛋白亚基的稳态水平，抗Core2作为负荷控制。F类WB中抗FAD的SDHA黄变分析(*上部频带*)和FAD的荧光信号(*中间频带*)SDS-PAGE凝胶暴露于紫外线下。考马斯亮蓝R染色用作负荷控制(*底部带*).G公司用紫外线法和抗FAD IgG检测SDHAF2和SDHA的黄变，并用WB检测SDHAF_2和SDHA水平。考马斯亮蓝R(*哥伦比亚广播公司*)染色和肌动蛋白作为负荷控制。

**图2。**
**在缺乏SDHAF2的情况下呼吸复合体的组装和活动。** A类和E类将从对照细胞和SDHAF2敲除细胞系中分离的线粒体溶解在洋地黄素中，并通过BN-PAGE分析指示抗体检测到的呼吸复合物的组装。标准，亲代细胞。B类使用10μg洋地黄素固体化线粒体分析hrCNE-3后复合物II的凝胶内活性。C类和D类，平方根(C类)和SDH(D类)通过600 n时DCPIP吸光度的变化来评估活性米.F类和*G公司*，常规呼吸分析(F类)和复杂的I和II驱动呼吸(*G公司*)在渗透细胞中使用Oxygraph-2k进行。*电子交易系统*电子传递系统；*ROX公司*，剩余氧气消耗。*H（H）*在含有葡萄糖或半乳糖的培养基中培养亲代和SDHAF2 KO细胞，并使用结晶紫法分析细胞增殖。*误差线*表示平均值±S.D。

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