跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年8月8日；11（8）：e0160900。
doi:10.1371/journal.pone.0160900。 2016年eCollection。

GABAA受体细胞内阻断方法的评价

劳拉·阿瑟顿 1 2, 艾丽卡·S·伯内尔 1, 杰克·梅勒 1
附属机构

GABAA受体细胞内阻断方法的评价

劳拉·阿瑟顿等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

选择性阻断抑制性突触传递到特定神经元是一种有用的工具，可用于解剖正在进行的网络活动中的兴奋性和抑制性突触体成分。为了实现这一点，与其他操作相比，使用能够阻断GABAA受体的贴片溶液进行细胞内记录具有优势，例如GABA能拮抗剂的药理应用或中间神经元群体的光遗传抑制，因为大多数抑制性传播不受影响，因此保留了剩余的网络活性。在此，我们评估了三种先前描述的阻断抑制作用的方法：苦曲霉毒素、4,4'-二硝基-苯乙烯-2,2'-二磺酸（DNDS）和4,4'-二异硫氰基苯乙烯-2,1'-二磷酸（DIDS）分子在细胞内的应用。DNDS和苦毒毒素在阻断小鼠CA1锥体细胞诱发的单突触抑制性突触后电流（IPSC）方面均无效。含有DIDS和氟化铯但缺乏核苷酸ATP和GTP的细胞内溶液可有效降低IPSC的振幅。然而，发现这种效应与DIDS和细胞内核苷酸的缺失无关，而是由于该细胞内溶液中存在氟离子，这也阻止了海马锐波期间自发发生的IPSC。至关重要的是，细胞内氟离子还导致自发和诱发兴奋性突触电流的减少，并阻止了细胞内溶液中核苷酸的包含。因此，在所测试的方法中，只有氟离子对IPSC的细胞内阻滞有效，但这种方法具有额外的细胞效应，降低了其选择性和实用性。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：作者有以下兴趣。本研究部分由礼来公司资助。没有专利、正在开发的产品或已上市的产品需要申报。这并不会改变作者对所有PLOS ONE数据和材料共享政策的遵守，如作者指南中在线详述的那样。

数字

图1
图1。DNDS、苦毒毒素和CsF-DIDS对诱发IPSC的影响。
A-E上部面板：K-葡萄糖酸盐（A）、K-葡萄糖酸酯+DNDS（B）、K--葡萄糖酸酯+DN DS和CaCl扩散过程中的痕迹示例2（C） 、K-葡萄糖酸盐+苦曲霉毒素（D）和Cs-氟化物+DIDS（E）细胞内移液管溶液。每条记录道显示了记录开始时的IPSC（黑色，中间面板中的时间点i）、浸提苦毒毒素前的最后一分钟（洋红色，中间面板的时间点ii）和浸提苦毒素结束时的IPCC（蓝色，中间面板上的时间点iii）。A-E中间面板：标准化IPSC振幅。蓝色条表示存在浴液苦毒毒素（PTX）。A-D的下面板：实验期间对应的串联电阻。NBQX和AP5出现在整个实验中。E） 在时间点ii采集的四种细胞内移液管溶液的归一化诱发IPSC振幅的组数据，单个数据点标记为品红点。摘要统计数据表示对每个数据集在时间点ii的归一化诱发IPSC振幅与归一化基线振幅进行比较的测试。数据绘制为平均值±SEM。
图2
图2。DIDS、核苷酸缺失和KF对诱发IPSC的影响。
A-D的上面板：三种细胞内移液管溶液（K-葡萄糖酸盐+DIDS（A）、不含ATP或GTP（B）的K-葡萄糖酸酯和-80mV（C）和-50mV（D）的K-氟化物）扩散过程中的样本痕迹。每条记录道显示了记录开始时的IPSC（黑色，中间面板中的时间点i）、浸提苦毒毒素前的最后一分钟（洋红色，中间面板的时间点ii）和浸提苦毒素结束时的IPCC（蓝色，中间面板上的时间点iii）。A-D中间面板：标准化IPSC振幅。蓝色条表示存在浴液苦毒毒素。A-D的下面板：实验期间对应的串联电阻。NBQX和AP5出现在整个实验中。E） 在时间点ii采集的归一化IPSC振幅的组数据，用洋红色点标记的单个数据点。摘要统计数据表示对每个数据集在时间点ii的归一化诱发IPSC振幅与归一化基线振幅进行比较的测试。数据绘制为平均值±SEM。
图3
图3。海马尖波特征。
A） 海马尖波的示例轨迹（i）显示了原始的局部场电位（上部）、滤波的<30Hz尖波带（中部）和滤波的120-300Hz波纹带（下部）。由i）中的虚线框标记的单个锐波的缩放版本如ii）所示。B） 显示不同频带功率（彩色）随时间变化的平均锐波频谱图。C） 在一个小时长的记录周期内，以分钟为单位的锐波发生率（黑色）、振幅（蓝色）和长度（红色）的分组数据。D&F）原始LFP的NBQX（D）和苦曲霉毒素（F）前后的样本痕迹（上部），检测到的尖波由绿点标记。洋红色条表示缩放轨迹中显示的区域（如下）。F3ii）在F3i中对品红色框进行进一步缩放。D-G中的灰色条表示存在NBQX（D-E）和苦毒毒素（F-G）。E&G）NBQX（E）和苦毒毒素（G）前后锐波特性的分组数据，以分钟为单位。数据绘制为平均值±SEM。
图4
图4。基于氟的细胞内移液管溶液可以在海马尖波期间阻断自发IPSC。
A-B）左图显示了使用K-葡萄糖酸盐（A）和Cs-氟化物+DIDS细胞内移液管溶液（B）的实验痕迹示例。在每种情况下，记录LFP（黑色），同时将电池保持在4种不同的保持电位（-80mV、-70mV、-60mV和-50mV）中的1种（灰色）。在锐波（绿点）期间检测到的向内和向外PSC分别由洋红色和蓝色点标记。右侧面板中显示了不同保持电位下的单个示例锐波和PSC。C-D）组数据显示在K-葡萄糖酸盐（C）和Cs-氟化物+DIDS（D）细胞内移液管溶液中，在不同的保持电位下检测到同时向内（品红色）或向外（蓝色）PSC的锐波百分比。数据绘制为平均值±SEM。
图5
图5。氟化物对自发和诱发EPSCs的影响。
A-B）来自1的锐波（黑色）和相应自发EPSC的示例轨迹（上面板）标准在葡萄糖酸钾（A）和氟化钾（B）细胞内移液管溶液中记录5分钟。下面板：洗井期间，分组归一化EPSC振幅时间过程。灰色条（时间点i）和洋红色条（时间点ii）表示从上面板中采集示例记录道的时间。D-E的上面板）：K-葡萄糖酸盐（D）和K-氟罗利特（E）洗脱过程中经药物分离、诱发的EPSC的痕迹示例。每条记录道显示洗入开始时（黑色，中间面板中的时间点i）和洗入结束时（洋红色，中间面板的时间点ii）的EPSC。D-E中间板：冲洗过程中的标准化EPSC振幅。D-E下部板：冲洗期间的相应串联电阻。在整个实验过程中，浴液中都存在苦毒毒素。C&F）在记录自发（C）和诱发（F）EPSC的最后5分钟内采集的正常化EPSC振幅的平均组数据，以洋红色点标记的单个数据点。摘要统计数据表示对每个数据集在最后5分钟记录的归一化EPSC振幅与归一化基线振幅进行比较的测试。数据绘制为平均值±SEM。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Shu YS，Hasenstaub A，McCormick DA。开启和关闭周期性平衡皮层活动。自然。2003;423(6937):288–93. 10.1038/nature01616。-内政部-公共医学
    1. Atallah BV，Scanziani M.通过平衡激发与抑制对伽马振荡频率的瞬时调制。神经元。2009;62(4):566–77. 10.1016/j.neuron.2009.04.027。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Okun M，Lampl I.进行中活动和感觉诱发活动期间兴奋和抑制的瞬时相关性。自然神经科学。2008;11(5):535–7. 10.1038/nn.2105。-内政部-公共医学
    1. Anderson JS，Carandini M，Ferster D.猫初级视觉皮层输入传导、兴奋和抑制的定向调节。神经生理学杂志。2000;84(2):909–26. .-公共医学
    1. Wehr M，Zador AM。平衡抑制是调节和锐化听觉皮层棘波计时的基础。自然。2003;426(6965):442–6. 10.1038/nature02116。-内政部-公共医学

赠款和资金