Impaired von Willebrand factor adhesion and platelet response in thrombospondin-2 knockout mice

doi:10.1182/blood-2016-03-702845

.2016年9月22日；128(12):1642-50.

doi:10.182/血液-2016-03-70845。 Epub 2016年7月28日。

血小板反应蛋白-2基因敲除小鼠的血管性血友病因子粘附和血小板反应受损

附属机构

¹工程与应用科学学院生物医学工程系。
²病理科，和。
^三耶鲁大学医学院病理学系和外科系，康涅狄格州纽黑文；
⁴俄亥俄州哥伦布市全国儿童医院外科；和。
⁵耶鲁大学医学院外科，康涅狄格州纽黑文；
⁶耶鲁大学工程与应用科学学院生物医学工程系、耶鲁大学医学院麻醉系、康涅狄格州纽黑文。
⁷生物医学工程系、工程与应用科学学院、病理学系和。

采购管理信息： 27471233
PMCID公司：邮编：034742
内政部： 10.1182/血液-2016-03-702845

血小板反应蛋白-2基因敲除小鼠的血管性血友病因子粘附和血小板反应受损

尼娜·克里斯托菲克等。血液. 2016.

.2016年9月22日；128(12):1642-50.

doi:10.1182/bloud-2016-03-702845。 Epub 2016年7月28日。

附属机构

¹工程与应用科学学院生物医学工程系。
²病理科，和。
^三耶鲁大学医学院病理学系和外科系，康涅狄格州纽黑文；
⁴俄亥俄州哥伦布市全国儿童医院外科；和。
⁵耶鲁大学医学院外科，康涅狄格州纽黑文；
⁶耶鲁大学工程与应用科学学院生物医学工程系、耶鲁大学医学院麻醉系、康涅狄格州纽黑文。
⁷生物医学工程系、工程与应用科学学院、病理学系和。

采购管理信息： 27471233
PMCID公司：项目编号：5034742
内政部： 10.1182/血液-2016-03-702845

摘要

胶原细胞外基质和血管性血友病因子（VWF）之间的相互作用对止血和血栓形成至关重要。在本研究中，我们研究了细胞外基质（ECM）异常对血小板反应蛋白-2（TSP2）敲除（KO）小鼠出血素质的影响。首先，我们进行了过继性骨髓移植，并观察到将野生型（WT）骨髓引入受致命照射的TSP2 KO小鼠并不能缓解出血素质。然而，移植小鼠的血小板显示出固有的聚集缺陷，这使解释变得复杂。其次，我们进行了去内皮动脉段的介入治疗。移植到WT小鼠体内的脱色TSP2-KO动脉在体内保持通畅。相反，WT移植物发生血栓形成，并在24-48小时内完全闭塞。通过将血小板暴露于TSP2-KO真皮成纤维细胞（DF）衍生的ECM，体外证实了TSP2-KO ECM的非血栓形成特性。为了进一步探讨TSP2缺乏的影响，通过聚合酶链反应、免疫荧光和扫描电镜分析了WT和TSP2 KO DFs的ECM生成和沉积，并显示出类似的模式。此外，对WT和TSP2 KO ECM的原子力显微镜（AFM）分析没有发现刚度的差异。相反，当基质在生理流下经受血浆时，观察到TSP2 KO ECM上的VWF积累减少。AFM利用VWF涂层的2-μm珠证实与TSP2 KO ECM的弱结合，为血栓形成不足提供了一种机制解释。因此，我们的研究表明，ECM组装对于胶原与VWF的相互作用以及随后的血栓形成反应至关重要。

PubMed免责声明

数字

图1
**血管内皮细胞异常与TSP2-KO小鼠的出血素质有关。**（A）分别用KO和WT骨髓细胞抢救受照射的WT和KO小鼠，并没有改变宿主的出血时间。此外，同型拯救维持了原来的表型。将WT骨髓移植到受辐射的TSP2 KO小鼠中并没有减少出血时间。圆形(●) 表示单个小鼠。（B-C）电线损伤10分钟后，接受TSP2 KO骨髓（B）和接受WT骨髓（C）的WT小鼠剥脱颈动脉的典型SEM图像。（D） ImageJ对血栓大小的量化显示TSP2 KO动脉减少**P（P）*< .05

图2
**TSP2-全剥脱主动脉移植物抗血栓形成。**将WT和TSP2 KO小鼠的主动脉段剥离并移植到WT小鼠。显示了术后48小时移植体苏木精-伊红（H&E）染色切片的代表性图像。WT到WT移植物（A）完全闭塞，而KO到WT-移植物完全通畅（B）（蔡司）。（C-D）显示了对PECAM-1（棕色）进行免疫染色的WT（C）和TSP2 KO（D）主动脉段的代表性图像，并显示缺乏内皮。D中的箭头表示内皮残余物。（E-F）显示了TSP2（棕色）免疫染色的WT（E）和TSP2 KO（F）主动脉节段的代表性图像，并分别证明存在和不存在TSP2。E中的箭头表示TSP2-免疫活性细胞。（G-H）显示WT（G）和TSP2 KO（H）主动脉段VWF（绿色）免疫荧光检测的代表性图像（蔡斯）。WT片段在血栓形成区显示出过度的VWF免疫反应，而TSP2-KO移植物中没有这种免疫反应。星号（*）表示流明面积；箭头表示容器边缘。切片用甲基绿（A-F）或DAPI（G-H）复染。n=5。

图3
**蛋白质表达、沉积和ECM机械特性分析。**（A） DF衍生脱细胞WT和TSP2 KO ECM（蔡司）中几个ECM成分的免疫荧光检测的代表性图像。（B-C）沉积在组织培养塑料上的WT（B）和TSP2 KO（C）脱细胞ECM的典型SEM图像。后者胶原纤维排列不太整齐（日立）。（D）对WT和TSP2 KO DFs表达的几个ECM蛋白进行PCR分析，发现其表达水平相似。（E）用原子力显微镜测定ECM杨氏模量。使用附着在AFM悬臂梁末端的2μm珠对WT和TSP2 KO ECM进行纳米压痕研究。收集力曲线后，使用NanoScope分析软件测定杨氏模量。n=8。胶原。

图4
**细胞衍生的TSP2 KO ECM不支持血小板聚集。**在长期（7天）培养的脱细胞后，在体外制备DF衍生ECM。将小鼠血小板暴露于WT或TSP2 ECM中30分钟。（A-C）WT（A）或TSP2 KO ECM上罗丹明-球蛋白（红色）显示的血小板代表性图像。对FN（绿色）的检测证实了ECM在实验期间的保留（蔡司）。（C） ImageJ对血小板面积的定量显示TSP2 KO ECM上的血小板聚集减少。n=5**P（P）*< .05. （D）将TSP2 KO ECM与5μg/mL TSP2（通过免疫荧光检测，绿色）孵育过夜，似乎没有增加TSP2 GO ECM上的血小板聚集。

图5
**减少VWF与TSP2 KO衍生ECM的相互作用。**将来自WT（A，C）和TSP2 KO小鼠（B，D）的DFs培养10天，然后通过脱细胞去除。然后将ECM暴露在流动的等离子体中（15达因/厘米²)持续15分钟。（A-B）FN（绿色）的免疫荧光检测显示实验结束时ECM保留。免疫荧光（绿色）（蔡司）检测ECM上的（C-D）VWF积聚。与WT（C）相比，与TSP2 KO ECM（D）的交互作用最小，这通过使用ImageJ（E）的图像分析得到了证实。n=3**P（P）*< .05

图6
**AFM测量到TSP2 KO衍生ECM上的VWF粘附力降低。**使用附着在AFM悬臂梁末端的VWF-共轭2μm珠进行粘附力研究。这些研究是在BSA治疗后第7天从WT和TSP2 KO DFs中去除细胞的ECM上进行的，以及在未经处理的塑料、胶原蛋白、TSP1、TSP2涂层塑料和BSA处理的组织培养塑料对照上进行的。VWF涂层珠与WT ECM（A）粘附的代表性AFM方法和收缩曲线，其中存在显著粘附（由收缩曲线中的向下尖峰表示）和TSP2 KO ECM（B），其中没有可见粘附。使用NanoScope分析软件进行粘附力的定量，并显示与WT ECM相比，在TSP2 KO ECM上的VWF粘附减少（C），并且与胶原I和TSP1相比，在纯TSP2上没有VWF粘附（D）。n=5**P（P）*< .05; #*P（P）*< .0001.

请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

血栓性基质什么时候不是血栓性的？
劳勒·J·。劳勒·J·。鲜血。2016年9月22日；128(12):1543-4. doi:10.1182/bloud-2016-08-732149。鲜血。2016 采购管理信息：27658700 没有可用的摘要。

类似文章

通过加入新的细胞外基质改善脱细胞血管移植物的体内结果。
新泽西州克里斯托菲克（Kristofik NJ）、秦（Qin L）、卡拉布罗（Calabro NE）、迪米特里夫斯卡（Dimitrievska S）、李（Li G）、特利德斯（Tellides）、尼古拉森（Niklason LE）、基里亚基德斯（Kyriakides。 Kristofik NJ等人。生物材料。2017年10月；141:63-73. doi:10.1016/j.biomaterials.2017.06.025。Epub 2017年6月22日。生物材料。2017 采购管理信息：28667900 免费PMC文章。
血管性血友病因子和因子VIII是在损伤静脉中形成稳定闭塞血栓的独立必需因子。
Chauhan AK、Kisuka J、Lamb CB、Bergmeier W、Wagner DD。 Chauhan AK等人。鲜血。2007年3月15日；109(6):2424-9. doi:10.1182/bloud-2006-06-028241。Epub 2006年11月21日。鲜血。2007 采购管理信息：17119108 免费PMC文章。
血小板与内皮VWF对血小板粘附和止血的贡献。
Kanaji S、Fahs SA、Shi Q、Haberichter SL、Montgomery RR。 Kanaji S等人。血栓止血杂志。2012年8月；10(8):1646-52. doi:10.1111/j.1538-7836.2012.04797.x。血栓止血杂志。2012 采购管理信息：22642380 免费PMC文章。
血栓形成与血管性血友病因子。
沙希迪M。沙希迪M。高级实验医学生物。2017年；906:285-306. doi:10.1007/5584_2016_122。高级实验医学生物。2017 采购管理信息：27628010 审查。
血小板-血管壁相互作用在血栓形成和血管性血友病因子再狭窄中的作用。
Hoylaerts MF公司。 Hoylaerts MF公司。 Verh K Acad Geneeskd Belg公司。1997;59(3):161-83. Verh K Acad Geneeskd Belg公司。1997 采购管理信息：9490916 审查。

查看所有类似文章

引用人

2型糖尿病患者血小板反应蛋白-2的细胞外状态及其作为早期糖尿病肾病检测的生物标志物的应用。
Lin Z、Zhang D、ZhangX、Guo W、Wang W、Zhang-Y、Liu Z、Bi Y、Wu M、Lin Z和Lu X。 Lin Z等人。 BMC肾病。2023年5月31日；24(1):154. doi:10.1186/s12882-023-03216-z。 BMC肾病。2023 采购管理信息：37259071 免费PMC文章。
糖尿病细胞中TSP2-Rac1-WAVE2轴的失调会导致细胞骨架紊乱、细胞僵硬和功能障碍。
Xing H、Huang Y、Kunkemoeller BH、Dahl PJ、Muraleetharan O、Malvankar NS、Murrell MP、Kyriakides TR。 Xing H等人。科学报告2022年12月28日；12(1):22474. doi:10.1038/s41598-022-26337-1。科学报告2022。采购管理信息：36577792 免费PMC文章。
小直径血管移植的细胞外基质。
Kimicata M、Swamykumar P、Fisher JP。 Kimicata M等人。组织工程A部分2020年12月；26(23-24):1388-1401. doi:10.1089/ten。茶.2020.0201。组织工程A部分2020。采购管理信息：33231135 免费PMC文章。审查。
血栓反应蛋白2升高导致糖尿病患者伤口延迟愈合。
Kunkemoeller B、Bancroft T、Xing H、Morris AH、Luciano AK、Wu J、Fernandez-Hernando C、Kyriakides TR。 Kunkemoeller B等人。糖尿病。2019年10月；68(10):2016-2023. doi:10.2337/db18-1001。Epub 2019年8月7日。糖尿病。2019 采购管理信息：31391172 免费PMC文章。
细胞外基质衍生生物材料在工程细胞功能中的应用。
Xing H、Lee H、Luo L、Kyriakides TR。 Xing H等人。生物技术进展2020年9月至今；42:107421. doi:10.1016/j.biotechadv.2019.107421。Epub 2019年8月2日。生物技术2020年版。采购管理信息：31381963 免费PMC文章。审查。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Gospodarowicz D，Delgado D，Vlodavsky I。细胞外基质对体外细胞增殖的允许作用。美国国家科学院学报，1980年；77(7):4094–4098.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Kubow KE、Klotzsch E、Smith ML、Gourdon D、Little WC、Vogel V。细胞衍生3D支架的交联上调了由种子细胞组装的新细胞外基质的伸展和展开。Integr Biol（Camb）2009年；1(11-12):635–648.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Vlodavsky I，Eldor A，HyAm E，Atzom R，Fuks Z。血小板与培养内皮细胞产生的细胞外基质的相互作用：研究分离内皮下基底膜血栓形成性的模型。《血栓研究》1982；28(2):179–191.-公共医学
1. 翟伟，张华，吴川，等。原花青素交联隐静脉内皮细胞用于小直径血管置换。生物材料研究杂志B应用生物材料。2014;102（6）：1190–1198。-公共医学
1. Hamill KJ、Kligys K、Hopkinson SB、Jones JC。层粘连蛋白沉积在细胞外基质中：出现了一幅复杂的画面。细胞科学杂志。2009;122（第24部分）：4409–4417。-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

行动
行动
行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动
行动

赠款和资金

LinkOut-更多资源

[1] Gospodarowicz D，Delgado D，Vlodavsky I。细胞外基质对体外细胞增殖的允许作用。美国国家科学院学报，1980年；77(7):4094–4098.-项目管理咨询公司-公共医学

[2] Gospodarowicz D，Delgado D，Vlodavsky I。细胞外基质对体外细胞增殖的允许作用。美国国家科学院学报，1980年；77(7):4094–4098.-项目管理咨询公司-公共医学

[3] Kubow KE、Klotzsch E、Smith ML、Gourdon D、Little WC、Vogel V。细胞衍生3D支架的交联上调了由种子细胞组装的新细胞外基质的伸展和展开。Integr Biol（Camb）2009年；1(11-12):635–648.-项目管理咨询公司-公共医学

[4] Kubow KE、Klotzsch E、Smith ML、Gourdon D、Little WC、Vogel V。细胞衍生3D支架的交联上调了由种子细胞组装的新细胞外基质的伸展和展开。Integr Biol（Camb）2009年；1(11-12):635–648.-项目管理咨询公司-公共医学

[5] Vlodavsky I，Eldor A，HyAm E，Atzom R，Fuks Z。血小板与培养内皮细胞产生的细胞外基质的相互作用：研究分离内皮下基底膜血栓形成性的模型。《血栓研究》1982；28(2):179–191.-公共医学

[6] Vlodavsky I，Eldor A，HyAm E，Atzom R，Fuks Z。血小板与培养内皮细胞产生的细胞外基质的相互作用：研究分离内皮下基底膜血栓形成性的模型。《血栓研究》1982；28(2):179–191.-公共医学

[7] 翟伟，张华，吴川，等。原花青素交联隐静脉内皮细胞用于小直径血管置换。生物材料研究杂志B应用生物材料。2014;102（6）：1190–1198。-公共医学

[8] 翟伟，张华，吴川，等。原花青素交联隐静脉内皮细胞用于小直径血管置换。生物材料研究杂志B应用生物材料。2014;102（6）：1190–1198。-公共医学

[9] Hamill KJ、Kligys K、Hopkinson SB、Jones JC。层粘连蛋白沉积在细胞外基质中：出现了一幅复杂的画面。细胞科学杂志。2009;122（第24部分）：4409–4417。-项目管理咨询公司-公共医学

[10] Hamill KJ、Kligys K、Hopkinson SB、Jones JC。层粘连蛋白沉积在细胞外基质中：出现了一幅复杂的画面。细胞科学杂志。2009;122（第24部分）：4409–4417。-项目管理咨询公司-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

血小板反应蛋白-2基因敲除小鼠的血管性血友病因子粘附和血小板反应受损

附属机构

血小板反应蛋白-2基因敲除小鼠的血管性血友病因子粘附和血小板反应受损

作者

附属机构

摘要

数字

中的注释

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医疗

分子生物学数据库

研究材料

其他

摘要

数字

中的注释

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医疗

分子生物学数据库

研究材料

其他