Tubular Overexpression of Angiopoietin-1 Attenuates Renal Fibrosis

doi:10.1371/journal.pone.0158908

.2016年7月25日；11（7）：e0158908。

doi:10.1371/journal.pone.0158908。 2016年eCollection。

血管生成素-1过度表达减轻肾纤维化

苏迪尔·辛格¹, 斯科特·曼森², 希多·李¹, Yeawon Kim先生¹, 刘拓恩^三, 郭秋莎², 朱利奥·杰米尼亚尼², 保罗·F·奥斯汀², 陈莹（音）¹

附属机构

¹美利坚合众国密苏里州圣路易斯华盛顿大学医学院内科肾脏科。
²美国密苏里州圣路易斯华盛顿大学医学院外科泌尿科。
^三美国密苏里州圣路易斯华盛顿大学医学院内科肿瘤科。

采购管理信息： 27454431
PMCID公司：项目经理4959721
内政部： 10.1371/新闻稿.0158908

血管生成素-1过度表达减轻肾纤维化

苏迪尔·辛格等。公共科学图书馆一号. 2016.

.2016年7月25日；11（7）：e0158908。

doi:10.1371/journal.pone.0158908。 2016年eCollection。

作者

苏迪尔·辛格¹, 斯科特·曼森², 希多·李¹, Yeawon Kim先生¹, 刘拓恩^三, 郭秋莎², 朱利奥·杰米尼亚尼², 保罗·F·奥斯汀², 陈莹（音）¹

附属机构

¹华盛顿大学医学院内科肾病科，密苏里州圣路易斯，美利坚合众国。
²美国密苏里州圣路易斯华盛顿大学医学院外科泌尿科。
^三美国密苏里州圣路易斯华盛顿大学医学院内科肿瘤科。

采购管理信息： 27454431
PMCID公司：项目经理4959721
内政部： 10.1371/新闻稿.0158908

摘要

新的证据强调了微血管损伤在肾纤维化发展和进展中的关键作用。血管生成素-1（Ang-1）是一种分泌的血管生长因子，与内皮特异性Tie2受体结合。Ang-1/Tie2信号传导对于调节血管发育和调节损伤后的血管反应至关重要，但在成熟、静止的血管中是不必要的。尽管血管内皮生长因子（VEGF）信号的失调已在肾脏病理学中得到了很好的研究，但对Ang-1/Tie2途径在肾间质纤维化中的作用知之甚少。以前的研究表明，当使用不同的Ang-1工程形式时，系统性过度表达Ang-1对肾小管间质纤维化的影响是相互矛盾的。在这里，我们通过利用条件转基因小鼠系统[Pax8-rtTA/（TetO）7 Ang-1]来研究天然Ang-1的定点表达对肾纤维化过程和肾小管周围毛细血管网络的影响，该系统允许成年小鼠增加肾小管Ang-1生成。使用小鼠单侧输尿管梗阻（UUO）纤维化模型，我们证明靶向Ang-1过表达可减弱肌成纤维细胞的活化和间质胶原I的积聚，抑制转化生长因子β1的上调和随后Smad 2/3的磷酸化，抑制肾脏炎症，并刺激阻塞肾中的肾小管周围毛细血管的生长。我们的结果表明，Ang-1是一种潜在的治疗药物，可以靶向肾纤维化中的微血管损伤，而不会损害人体正常的生理血管系统。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

**图1。转基因构建和实验计划。**
（A）转基因小鼠系中用于产生逆四环素控制转录激活物（rtTA）系统（Tet-On系统）的两种结构的示意图。a。Pax8启动子指导肾小管细胞中rtTA的表达。b。（TetO）₇/CMV-Ang-1-ZsGreen转基因由多西环素（DOX）结合的rtTA诱导。（B） 11周龄P8TA冷冻肾切片；TETANG-1小鼠在三周龄时分别接受常规或DOX食物，持续8周。在给予DOX的双阳性转基因小鼠中，绿色荧光蛋白（ZsGreen）在肾小管的所有节段中表达。比例尺，40μm。（C） DOX给药8周后，显示基因型小鼠全肾裂解物中Ang-1表达的代表性免疫印迹。（D） UUO研究使用的实验计划。CON，控制。

**图2。肾小管中Ang-1的靶向过度表达可减轻UUO后肾间质纤维化。**
双转基因P8TA/Ang-1或单转基因对照小鼠（Ang-1/+或P8TA/+）在DOX给药8周后接受假手术或梗阻7天（n=6只小鼠/组）。偏振光下天狼星红染色分析肾皮质（A）和髓质（C）纤维化。比例尺，40μm。根据所示组（n=6只小鼠/组）的肾矢状切面分别对皮质（B）或髓质（D）中天狼星红阳性区域进行形态计量学定量。在x400倍放大镜下，分别在皮质或髓质均匀地拍摄了10张照片/肾脏。使用Image J软件分析复合显微镜图像。*P<0.05；**方差分析显示P<0.001。CON，控制。

**图3。肾小管中Ang-1的靶向过表达下调TGF-β1信号传导。**
在DOX治疗8周后，P8TA/Ang-1和对照（Ang-1/+或P8TA/+）小鼠接受假手术或7天UUO（n=6只小鼠/组）。在12周龄时采集肾脏进行RNA和蛋白质分析。（A）通过定量RT-PCR评估指定组的肾脏TGF-β1转录水平。将TGF-β1的表达标准化为与小鼠GAPDH的比率，并将假手术对照小鼠的平均TGF-α1/GAPDH比率设置为1。平均值±标准差；**方差分析显示P<0.001。（B）对所示组的肾裂解物中的磷酸-Smad 2/3和GAPDH蛋白进行代表性免疫印迹分析。（C）定量RT-PCR显示了指定组肾脏中Snail1和Twist的相对转录水平。首先将绝对水平标准化为GAPDH的水平，然后再将其标准化为假手术对照肾脏的水平。平均值±SD；**方差分析显示P<0.001。CON，控制。

**图4。肾小管靶向过度表达Ang-1可改善肾纤维化反应。**
DOX处理的P8TA/Ang-1和对照（Ang-1/+或P8TA/+）小鼠接受假手术或7天UUO（n=6只小鼠/组）。在12周龄时采集肾脏进行RNA、蛋白质和IF分析。（A和D）定量RT-PCR显示了所示基因型的非手术或UUO肾脏中α-SMA（A）和I型胶原（D）的相对转录水平。首先将绝对水平标准化为GAPDH的水平，然后将其标准化为假手术单转基因对照肾脏的水平。*P<0.05；**方差分析显示P<0.001。（B）通过WB分析指定组的全肾裂解物的α-SMA和GAPDH水平。肾裂解物中α-SMA的定量标准化为GAPDH。假手术对照小鼠的平均α-SMA/GAPDH比值设为1。平均值±SD；*方差分析显示P<0.05和**P<0.001。（C和E）IF染色，定量检测指定组石蜡肾切片上的α-SMA（红色）（C）或I型胶原（绿色）（E）。原始放大倍数：x200。所示组（n=6只小鼠/组）肾矢状切面皮质中α-SMA-（C）或胶原I-（E）阳性区域的形态计量学定量。在放大x200倍的情况下，在皮质中均匀地拍摄了五张照片/肾脏。使用Image J软件分析复合显微图像。假手术对照小鼠的α-SMA或I型胶原阳性区域设为1。平均值±SD；*P<0.05；**方差分析显示P<0.001。CON，控制。

**图5。靶向性肾小管Ang-1上调抑制UUO诱导的炎症。**
暴露于8周DOX的P8TA/Ang-1和对照（Ang-1/+或P8TA/+）小鼠接受假手术或7天UUO（n=6只小鼠/组）。在12周龄时采集肾脏进行IF染色和mRNA定量。（A）所示组石蜡肾切片上的F4/80（红色）IF染色。细胞核用Hoechst 33342（蓝色）复染。比例尺，50μm。（B）通过q-RT-PCR评估指定组的肾脏TNFα转录水平。TNFα的表达被标准化为与小鼠GAPDH的比率，而假手术对照小鼠的平均TNFα/GAPDH比率设置为1。平均值±SD；*方差分析显示P<0.05和**P<0.001。（C）定量RT-PCR显示所示组肾脏中ICAM-1和MCP-1的相对转录水平。首先将绝对水平标准化为GAPDH的水平，然后再将其标准化为假手术对照肾脏的水平。平均值±SD；*方差分析显示P<0.05和**P<0.001。CON，控制。

**图6。UUO后，肾小管导向的Ang-1过度表达促进肾小管周围毛细血管网络的生长。**
（A）在DOX治疗8周后，P8TA/Ang-1和对照（Ang-1/+或P8TA/+）小鼠接受假手术或7天UUO（n=6只小鼠/组）。采集肾脏，WB分析裂解物中Ang-1、CD31和GAPDH的水平。在指定组的肾裂解液中，（B）Ang-1或（C）CD31标准化为GAPDH的定量。假手术对照小鼠的平均Ang-1/GAPDH或CD31/GAPDH比值设为1。平均值±SD；*方差分析显示P<0.05和**P<0.001。（D） DOX处理的P8TA/Ang-1小鼠和假手术或UUO 7天的对照（Ang-1/+或P8TA/+）小鼠（n=6只小鼠/组）石蜡肾切片上CD31（红色）的IF染色。细胞核用Hoechst 33342（蓝色）复染。比例尺，50μm。CON，控制。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

COMP-血管生成素-1改善单侧输尿管梗阻模型中的肾纤维化。
Kim W、Moon SO、Lee SY、Jang KY、Cho CH、Koh GY、Choi KS、Yoon KH、Sung MJ、Kim DH、Lee S、Kang KP、Park SK。 Kim W等人。《美国肾脏病杂志》。2006年9月；17（9）：2474-83。doi:10.1681/ASN.2006020109。Epub 2006年8月2日。《美国肾脏病杂志》。2006 采购管理信息：16885409
CD44标准和CD44-variant-3在慢性阻塞性肾病肾小管损伤和肾纤维化发展中的相反作用。
Rampanelli E、Rouschop KM、Claessen N、Teske GJ、Pals ST、Leemans JC、Florquin S。 Rampanelli E等人。《肾脏国际》2014年9月；86(3):558-69. doi:10.1038/ki.2014.87。Epub 2014年4月9日。《肾脏国际》2014。采购管理信息：24717295
血管紧张素II输注模型中血管生成因子与肾小管间质损伤的调节。
北山H、前岛Y、高泽Y、山本Y、吴Y、一代K、广岛K、杉山H、山崎Y、牧野H。北山H等人。美国高血压杂志。2006年7月；19(7):718-27. doi:10.1016/j.amjhyper.2005.09.022。美国高血压杂志。2006 采购管理信息：16814127
血管生成素在肾脏发育和疾病中的作用。
Woolf AS、Gnudi L、Long DA。 Woolf AS等人。《美国肾脏病杂志》。2009年2月；20(2):239-44. doi:10.1681/ASN.2008020243。Epub 2008年9月17日。《美国肾脏病杂志》。2009 采购管理信息：18799719 审查。
血管生成素-1在肾脏疾病中的作用。
金·W。金·W·。电解质血压计。2008年6月；6(1):22-6. doi:10.5049/EBP.2008.6.1.22。Epub 2008年6月30日。电解质血压计。2008 采购管理信息：24459518 免费PMC文章。审查。

查看所有类似文章

引用人

帕利骨化醇改善阿霉素诱导肾病中的血管生成素/Tie-2和VEGF/VEGFR2信号通路。
Deluque AL、Oliveira BM、Souza CS、Maciel ALD、Francescato HDC、Giovanini C、de Almeida LF、de Paula FJA、Costa RS、Antunes-Rodrigues J、Coimbra TM。 Deluque AL等人。营养物。2022年12月14日；14(24):5316. doi:10.3390/nu14245316。营养物。2022 采购管理信息：36558475 免费PMC文章。
慢性肾脏疾病的肾脏微循环：新的诊断方法和治疗前景。
李S、王菲、孙丹。李S等。细胞生物学。2021年5月17日；11(1):90. doi:10.1186/s13578-021-00606-4。细胞生物学。2021 采购管理信息：34001267 免费PMC文章。审查。
全反式维甲酸调节血管生成素-1和减轻间质纤维化大鼠细胞外基质积聚。
钟Z，李海燕，钟H，林W，林S，周T。 Zhong Z等人。任正非（Ren Fail）。2021年12月；43(1):658-663. doi:10.1080/0886022X.2021.1910046。任正非（Ren Fail）。2021 采购管理信息：33820492 免费PMC文章。
高分子量透明质酸减轻肾损伤中的肾小管间质瘢痕。
Wang X、Balaji S、Steen EH、Blum AJ、Li H、Chan CK、Manson SR、Lu TC、Rae MM、Austin PF、Wight TN、Bollyky PL、Cheng J、Keswani SG。王X等。 JCI洞察力。2020年6月18日；5（12）：e136345。doi:10.1172/jci.insight.136345。 JCI洞察力。2020 采购管理信息：32396531 免费PMC文章。
针对肾脏疾病中的血管生成和淋巴管生成。
Tanabe K、Wada J、Sato Y。 Tanabe K等人。 Nat Rev Nephrol公司。2020年5月；16(5):289-303. doi:10.1038/s41581-020-0260-2。Epub 2020年3月6日。 Nat Rev Nephrol公司。2020 采购管理信息：32144398 审查。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Boor P，Ostendorf T，Floege J.肾纤维化：机制和治疗靶点的新见解。Nat Rev Nephrol公司。2010;6(11):643–56. 电子出版2010/09/15。10.1038/nrneph.2010.120 nrneph2010.120[pii]。-内政部-公共医学
1. Zeisberg M，Neilson EG.肾小管间质纤维化的机制。《美国肾脏病杂志》。2010;21(11):1819–34. 电子出版2010/09/25。10.1681/ASN.2010080793 ASN.20101080793[pii]。-内政部-公共医学
1. Fine LG、Norman JT。慢性缺氧作为慢性肾脏疾病进展的机制：从假说到新疗法。《肾脏国际》2008；74(7):867–72. 电子出版2008/07/18。10.1038/ki.2008.350 ki2008350[pii]。-内政部-公共医学
1. Hutchison N、Fligny C、Duffield JS。常驻间充质细胞和纤维化。Biochim生物物理学报。2013;1832(7):962–71. 电子出版2012/12/12。10.1016/j.bbadis.2012.11.015 S0925-4439（12）00275-X[pii]。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
1. Thomas SE、Anderson S、Gordon KL、Oyama TT、Shankland SJ、Johnson RJ。衰老中的肾小管间质疾病：潜在肾小管周毛细血管损伤的证据，肾缺血的潜在作用。《美国肾脏病杂志》。1998;9(2):231–42. 电子版1998/04/04。-公共医学

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动
行动
行动
行动

赠款和资金

LinkOut-更多资源

[1] Boor P，Ostendorf T，Floege J.肾纤维化：机制和治疗靶点的新见解。Nat Rev Nephrol公司。2010;6(11):643–56. 电子出版2010/09/15。10.1038/nrneph.2010.120 nrneph2010.120[pii]。-内政部-公共医学

[2] Boor P，Ostendorf T，Floege J.肾纤维化：机制和治疗靶点的新见解。Nat Rev Nephrol公司。2010;6(11):643–56. 电子出版2010/09/15。10.1038/nrneph.2010.120 nrneph2010.120[pii]。-内政部-公共医学

[3] Zeisberg M，Neilson EG.肾小管间质纤维化的机制。《美国肾脏病杂志》。2010;21(11):1819–34. 电子出版2010/09/25。10.1681/ASN.2010080793 ASN.20101080793[pii]。-内政部-公共医学

[4] Zeisberg M，Neilson EG.肾小管间质纤维化的机制。《美国肾脏病杂志》。2010;21(11):1819–34. 电子出版2010/09/25。10.1681/ASN.2010080793 ASN.20101080793[pii]。-内政部-公共医学

[5] Fine LG、Norman JT。慢性缺氧作为慢性肾脏疾病进展的机制：从假说到新疗法。《肾脏国际》2008；74(7):867–72. 电子出版2008/07/18。10.1038/ki.2008.350 ki2008350[pii]。-内政部-公共医学

[6] Fine LG、Norman JT。慢性缺氧作为慢性肾脏疾病进展的机制：从假说到新疗法。《肾脏国际》2008；74(7):867–72. 电子出版2008/07/18。10.1038/ki.2008.350 ki2008350[pii]。-内政部-公共医学

[7] Hutchison N、Fligny C、Duffield JS。常驻间充质细胞和纤维化。Biochim生物物理学报。2013;1832(7):962–71. 电子出版2012/12/12。10.1016/j.bbadis.2012.11.015 S0925-4439（12）00275-X[pii]。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Hutchison N、Fligny C、Duffield JS。常驻间充质细胞和纤维化。Biochim生物物理学报。2013;1832(7):962–71. 电子出版2012/12/12。10.1016/j.bbadis.2012.11.015 S0925-4439（12）00275-X[pii]。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[9] Thomas SE、Anderson S、Gordon KL、Oyama TT、Shankland SJ、Johnson RJ。衰老中的肾小管间质疾病：潜在肾小管周毛细血管损伤的证据，肾缺血的潜在作用。《美国肾脏病杂志》。1998;9(2):231–42. 电子版1998/04/04。-公共医学

[10] Thomas SE、Anderson S、Gordon KL、Oyama TT、Shankland SJ、Johnson RJ。衰老中的肾小管间质疾病：潜在肾小管周毛细血管损伤的证据，肾缺血的潜在作用。《美国肾脏病杂志》。1998;9(2):231–42. 电子版1998/04/04。-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

血管生成素-1过度表达减轻肾纤维化

附属机构

血管生成素-1过度表达减轻肾纤维化

作者

附属机构

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医疗

分子生物学数据库

其他

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医疗

分子生物学数据库

其他