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.2017年4月;37(4):1494-1507.
doi:10.1177/0271678X16657572。 Epub 2016年1月1日。

大鼠全脑缺血再灌注后胚胎致死性视力异常蛋白和富含腺嘌呤和尿苷元素的mRNA

附属公司

大鼠全脑缺血再灌注后胚胎致死性视力异常蛋白和富含腺嘌呤和尿苷元素的mRNA

王海辉等。 大脑血流代谢杂志. 2017年4月.

摘要

翻译停滞时间延长与全脑缺血再灌注后海马CA1神经元的延迟性神经元死亡相关。以前的许多研究都是对核糖体分子生物学进行研究,但对脑缺血后mRNA的调控机制研究较少。在这里,我们研究了胚胎致死性视力异常/Hu亚型HuR、HuB、HuC和HuD,以及大鼠脑缺血后含腺嘌呤和富含尿苷元素的mRNA的表达。从对照组大鼠海马CA1和CA3分离的胚胎致死性异常视力免疫沉淀或多聚体的蛋白质组学研究,或在缺血10分钟加再灌注8小时后,显示出不同的mRNA结合蛋白集,表明每种情况下的mRNA调控不同。值得注意的是,在NIC CA1中未检测到HuB、HuC和HuD。再灌注8h时,CA3中含有腺嘌呤和丰富尿苷元素的多聚体相关mRNA占缺血预调节mRNA的46.1%,而CA1中仅占18.7%。由于含有腺嘌呤和丰富尿苷元素的mRNAs调节对一些细胞应激反应很重要,因此我们的结果表明,与CA3相比,CA1在应对缺血应激方面处于不利地位,这有望成为CA1选择性脆弱性的重要促因。(数据可通过ProteomeXchange标识符PXD004078和GEO系列登录号GSE82146获得)。

关键词:全脑缺血再灌注;腺嘌呤和富尿苷元素mRNA;胚胎致死性视力异常;海马CA1;mRNA调节。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
非缺血对照组和10岁以下患者海马CA1和CA3甲苯胺蓝染色的亮视野显微照片(20X)最小缺血时间和8h(8R)或72h(72R)再灌注。比例尺适用于所有面板。
图2。
图2。
(a) 翻译标记用多聚体颗粒的蛋白质印迹。(b) 多体RNA的琼脂糖电泳。(c)用于细胞器标记的多体颗粒的蛋白质印迹。均质、未分离匀浆;PMS:线粒体后上清液;pp:多聚体颗粒;垫S:蔗糖垫上的上清液。Western blots右侧显示了kDa分子量标记。文本中使用的抗原缩写。
图3。
图3。
(a) ELAV免疫沉淀(IP)后ELAV抗血清和ELAV Western在皮层(C)或海马(H)中检测到多条带。右侧为乐队标识。(b) 在皮层线粒体后上清液上用ELAV或组蛋白H3进行IP后的ELAV Western。(c) 大脑皮层控制ELAV IP后的ELAV Western(N)和810后再灌注h最小缺血时间(8R)。p: 多聚体颗粒;u: 未分离的匀浆。(d) ELAV IP/Weistern将ELAV抗血清与Dynabeads(DB)或蛋白A琼脂糖(PA)连接,以降低IP反应。右侧显示了以kDa为单位的分子量标记。ELAV:胚胎致命性视力异常。
图4。
图4。
(a) –(d)是ELAV IP后的Western blot,(e)–(h)分别是ELAV、AUF1、hnRNP K和hnRNP M的相应密度测定。对于显示多个谱带的ELAV和AUF1,分别对每个谱带进行方差分析。只有36人方差分析显示,kDa ELAV谱带不显著。对于所有其他波段,方差分析p < 0.05和*表示Tukey post hoc的差异。对于面板(g)和(h),方差分析p < 0.05和*表示Tukey事后差异。右边是kDa分子量标记。还显示了ELAV和AUF1波段的微波。ELAV:胚胎致命性视力异常。

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