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.2016年8月;14(2):1610-6.
doi:10.3892/mmr.2016.5405。 Epub 2016年6月16日。

加味参汤含药血清通过TGF-β1/Smad信号通路抑制血管紧张素II诱导的心脏成纤维细胞增殖

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加参汤含药血清通过TGF-β1/Smad信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心脏成纤维细胞增殖

林翠等。 摩尔医学代表. 2016年8月.

摘要

加减汤是一种被广泛用于治疗慢性心力衰竭的中药。然而,其潜在机制仍有待阐明。本研究旨在探讨JSD对心脏成纤维细胞(CF)增殖和分化影响的机制。CFs取自新生(1-3天龄)Sprague-Dawley大鼠的心脏,并用JSD药物血清(JSDS)治疗,包括或不包括血管紧张素II(Ang II)。使用细胞计数试剂盒‑8试剂评估细胞增殖。此外,还分析了转化生长因子‑β1(TGF‑β1mRNA表达水平和磷酸化的小母亲对抗十进制瘫痪(p‑Smad)2/3的mRNA表达及其蛋白表达水平。与对照组相比,Ang II‑治疗组的CF增殖显著增加(P<0.05)。Ang II‑治疗组胶原、α‑平滑肌肌动蛋白、TGF‑β1和p‑Smad2/3的表达水平也增加(p<0.05)。JSDS治疗后,胶原蛋白和细胞增殖水平的增加受到抑制,p‑Smad2和p‑Smad3表达水平的增加也受到抑制(p<0.05)。这些数据表明,JSDS可能通过减弱TGF‑β1/Smad信号通路抑制CF增殖。

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数字

图1
图1
原代培养新生大鼠CFs的特征。(A) 光学显微镜下新生大鼠CFs第一代的细胞形态。原始放大倍数,×20。(B) 对原代培养的CFs进行波形蛋白免疫荧光染色以确定其纯度。红色显示波形蛋白染色;DAPI显示为蓝色(核)。原始放大倍数,×40。CFs,心脏成纤维细胞。
图2
图2
不同浓度Ang II对CFs细胞增殖的影响。(A) 用不同浓度的Ang II处理新生大鼠CF 24 h。(B)用不同浓度Ang II治疗CF 48 h。数据表示为平均值的平均值±标准误差。*与非AngⅡ治疗组相比,P<0.05。CFs、心脏成纤维细胞;血管紧张素Ⅱ;外径,光密度。
图3
图3
JSDS抑制Ang II诱导的细胞增殖并降低CFs中的胶原蛋白含量。(A) 用不同浓度的JSDS和Ang II(1µM) 24小时。细胞数量以OD值表示,通过细胞计数分析确定。(B) 细胞培养液中羟脯氨酸的含量。*与对照组相比,P<0.05;#与AngⅡ治疗组相比,P<0.05。数据表示为平均值的平均值±标准误差。CFs、心脏成纤维细胞;JSDS、加参汤指示血清;血管紧张素Ⅱ;外径,光密度。
图4
图4
JSDS对血管紧张素Ⅱ诱导CFs中I型胶原表达的影响。(A) 采用逆转录定量聚合酶链反应分析评估I型胶原mRNA表达水平。(B) I型胶原表达的荧光强度。(C)使用异硫氰酸荧光素结合IgG在免疫荧光染色中观察细胞I型胶原。(a)对照组和(b)Ang II治疗组的代表性图像。(c)JSDS处理组。数值表示为平均值的平均值±标准误差(n=3)。*与对照组相比,P<0.05;#与AngⅡ治疗组相比,P<0.05。原始放大倍数,×20,显示有代表性的图像;n=3。CFs、心脏成纤维细胞;JSDS、加参汤指示血清;血管紧张素II。
图5
图5
JSDS对AngⅡ诱导CFsα-SMA表达的影响。(A) 采用逆转录定量聚合酶链反应分析评估不同组α-SMA的mRNA表达水平。(B) α-SMA表达的荧光强度。(C) 用异硫氰酸荧光素结合IgG免疫荧光染色观察细胞α-SMA。(a)对照组、(b)AngII治疗组和(c)JSDS治疗组的代表性图像。数值表示为平均值的平均值±标准误差(n=3)。*与对照组相比,P<0.05;#与AngⅡ治疗组相比,P<0.05。原始放大倍数,×20,显示代表性图像;n=3。CFs、心脏成纤维细胞;JSDS、加参汤指示血清;α-SMA,α-平滑肌肌动蛋白;血管紧张素II。
图6
图6
JSDS抑制血管紧张素Ⅱ诱导的CFs中TGF-β1的相对mRNA和蛋白水平。(A) 使用逆转录定量聚合酶链反应分析来评估TGF-β1的mRNA表达水平。将数据归一化为GAPDH mRNA。(B)用western blot分析细胞裂解物以确定TGF-β1的蛋白表达水平。数值表示为平均值的平均值±标准误差(n=3)。*与对照组相比,P<0.05;#与AngⅡ治疗组相比,P<0.05。CFs、心脏成纤维细胞;JSDS、加参汤指示血清;转化生长因子-β1;血管紧张素II。
图7
图7
JSDS抑制Ang II诱导的CFs中p-Smad2和p-Smad3的表达。(A) 用western blot分析测定p-Smad2的蛋白表达水平。(B) 使用蛋白质印迹分析测定p-Smad3的蛋白质表达水平。数值表示为平均值的平均值±标准误差(n=3)。*与对照组相比,P<0.05;#与AngⅡ治疗组相比,P<0.05。CFs、心脏成纤维细胞;JSDS、加参汤指示血清;p-Smad,磷酸化小母亲对抗十脑麻痹;血管紧张素II,血管紧张素II。

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