跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

HTTP服务器

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年6月21日;7(25):38367-38379.
doi:10.18632/目标9525。

蚜虫精靶向DNA修复使原发性慢性淋巴细胞白血病细胞对嘌呤类似物敏感

附属公司

蚜虫精靶向DNA修复使原发性慢性淋巴细胞白血病细胞对嘌呤类似物敏感

伊丽莎·斯塔切夫斯卡等。 Oncotarget公司. .

摘要

嘌呤类似物是治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)最有效的化疗药物之一。然而,耐药性和毒性限制了其临床应用。在这里,我们报告了DNA聚合酶抑制剂蚜虫双唑啉,作为原代CLL细胞中的单一药物,其细胞毒性可忽略不计,它通过增强细胞凋亡与氟达拉滨和克拉屈滨显著协同作用。重要的是,不管CLL预后标志物如何,都记录了协同作用。在分子水平上,蚜虫精增强了嘌呤类似物诱导的p53磷酸化和γH2AX的积累,与DNA损伤的增加一致。此外,蚜虫灵延缓了嘌呤类似物去除后出现的γH2AX的消失,这表明蚜虫灵通过阻碍DNA损伤修复而导致DNA损伤增加。类似地,蚜虫灵抑制紫外线诱导的DNA修复,这种修复主要通过核苷酸切除修复(NER)途径发生。最后,我们发现氟达拉滨诱导了XPA的核输入,XPA是NER不可或缺的因子,并且XPA沉默使细胞系对氟达拉滨产生反应而发生凋亡。总之,我们的数据表明,蚜虫精通过抑制涉及DNA聚合酶的DNA修复途径(很可能是NER),增强嘌呤类似物的细胞毒性,并为利用其进行治疗提供了理论依据。

关键词:DNA损伤;蚜虫灵;慢性淋巴细胞白血病;氟达拉滨;γH2AX。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者表示没有潜在的利益冲突。

数字

图1
图1。阿培地考林增强氟达拉滨和克拉屈滨对原代CLL淋巴细胞的细胞毒性
CLL淋巴细胞在3μM蚜虫灵(APC)和不同浓度的氟达拉滨或克拉屈滨存在或不存在的情况下培养96小时。使用MTT法测量细胞活力。分别对氟达拉滨和克拉屈滨进行了47次和32次分析。(A类)在不存在或存在APC的情况下,氟达拉滨或克拉屈滨的剂量反应曲线。所示值为平均值±SEM。通过双向方差分析和Bonferroni后验分析了与APC缺失相关的显著性。(B类)集成电路50根据图1A中的个别数据计算,在没有或存在APC的情况下服用氟达拉滨和克拉屈滨。个人IC50显示了平均值±SEM。通过Wilcoxon配对签名秩检验分析与APC缺失相关的显著性。(C类)根据乘法模型[18]对氟达拉滨/APC和克拉屈滨/APC组合的观察到的细胞存活率和预期的细胞存活率进行比较。连续线为x个=. (D类E类)根据CLL细胞对嘌呤类似物的敏感性使用蚜虫灵的效果。根据IC将CLL样本分为两组(“高”或“低”灵敏度)50在没有APC的情况下获得的氟达拉滨(D)或克拉屈滨(E):氟达拉滨<5μM或≥5μM,克拉屈滨<1μM。通过Wilcoxon配对签名秩检验分析与APC缺失相关的显著性,并通过Mann-Whitney检验评估敏感性较低和较高样本之间的差异。对于所有面板:*P(P)< 0.05; **P(P)< 0.01; ***P(P)< 0.001; ****P(P)< 0.0001.
图2
图2。阿培地考林增强氟达拉滨诱导的细胞凋亡
(A类)在不含或不含氟达拉宾的3μM蚜虫灵(APC)中,在0.3和1μM培养48 h后,通过Western blot分析三名患者的CLL细胞中的Procaspase-9和Procaspase-3。β-肌动蛋白作为负荷控制。(B类)在不含或不含1μM氟达拉滨的3μM APC中孵育24 h后,通过荧光测定法测定CLL细胞中Caspase-3的活性(n个= 4). 数值为平均值±SEM。通过双向方差分析和Bonferroni后验分析了与APC缺失相关的显著性:*P(P)< 0.05.
图3
图3。阿西德洛林对嘌呤类似物诱导的p53磷酸化和γH2AX积累的影响
(A类B类)将3名不同患者的CLL细胞与指定浓度的氟达拉滨(A)或克拉滨(B)在没有或存在3μM蚜虫灵(APC)的情况下孵育24小时。Western blot分析p53在Ser-15和总p53的磷酸化。显示的CLL6数据是从相同的western blot图像中裁剪出来的,并按照虚线所示进行合并。(C类F类)在不存在或存在3μM蚜虫灵(APC)的情况下,用0.3或1μM氟达拉滨(C,E)或0.1或0.5μM克拉屈滨(D,F)培养的CLL细胞中γH2AX的时间累积。结果是5个独立实验的平均值±SEM。通过双向Anova分析与APC缺失相关的显著性,然后进行Bonferroni后验:**P(P)< 0.01; ***P(P)< 0.001; ****P(P)< 0.0001. 在所有面板中,γH2AX表示为未经处理细胞的倍数增加。
图4
图4。蚜虫灵对不同DNA损伤处理后DNA修复的影响
(A类)用1μM氟达拉滨(左面板)或0.1μM克拉屈滨(右面板)预培养CLL细胞24小时。然后清洗细胞,将其重新悬浮在新鲜培养基中,并在没有或存在3μM蚜虫精(APC)的情况下培养。在指定时间通过流式细胞仪分析γH2AX,并表示为时间0时值的%。(B类)将CLL细胞置于UV-C光(30J/m2)(左面板)或IR,剂量为5 Gy(右面板),并立即在没有或存在3μM APC或10μM NU7026的情况下培养。在指定时间通过流式细胞仪分析γH2AX,并表示为折叠变化(UV)或时间0时值的%(IR)。在所有面板中,结果是3-5个独立实验的平均值±SEM。通过双向Anova分析与APC缺失相关的显著性(显示在最后一个孵育时间),然后进行Bonferroni后验:**P(P)< 0.01; ****P(P)< 0.0001.
图5
图5。XPA参与细胞对氟达拉滨的敏感性
(A类)将CLL细胞与指定浓度的氟达拉滨孵育24小时。提取细胞质和细胞核组分并用Western blot分析XPA。β-肌动蛋白和层粘连蛋白B1(一种特殊的核蛋白)作为负荷控制。显示的CLL1数据是从相同的western blot图像中裁剪出来的,并按照虚线所示进行组合。(B))GM0536和(C类)分别用打乱(siCTL)或XPA siRNA(siXPA)转染EHEB细胞24小时或48小时。然后,用指定浓度的氟达拉滨再培养细胞24小时。上面板显示通过Western blot分析的siCTL处理和siXPA处理细胞中的XPA水平,下面板显示通过荧光分析测量的caspase-3活性。结果是3个独立实验的平均值±SEM。通过双向Anova分析与siCTL处理细胞相关的显著性,然后进行Bonferroni后测试:*P(P)< 0.05; **P(P)< 0.01; ***P(P)< 0.001.

类似文章

引用人

工具书类

    1. Dameshek W.慢性淋巴细胞白血病——一种免疫功能低下淋巴细胞的累积性疾病。鲜血。1967;29:566–584.-公共医学
    1. Messmer BT、Messmer D、Allen SL、Kolitz JE、Kudalkar P、Cesar D、Murphy EJ、Koduru P、Ferrarini M、Zupo S、Cutrona G、Damle RN、Wasil T等。体内测量记录了慢性淋巴细胞白血病B细胞的动态细胞动力学。临床投资杂志。2005年;115:755–764.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Woyach JA,Johnson AJ。慢性淋巴细胞白血病的靶向治疗:耐药机制和管理策略。鲜血。2015;126:471–477.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Fischer K、Bahlo J、Fink AM、Goede V、Herling CD、Cramer P、Langerbeins P、von Tresckow J、Engelke A、Maurer C、Kovacs G、HerlingM、Tausch E等。先前未治疗的CLL患者FCR化疗免疫治疗后的长期缓解:CLL8试验的最新结果。鲜血。2016;127:208–215.-公共医学
    1. Rossi D、Terzi-di-Bergamo L、De Paoli L、Cerri M、Ghilardi G、Chiarenza A、Bulian P、Visco C、Mauro FR、Morabito F、Cortelezzi A、Zaja F、Forconi F等。慢性淋巴细胞白血病一线氟达拉滨-环磷酰胺-利妥昔单抗治疗后持久缓解的分子预测。鲜血。2015;126:1921–1924.-项目管理咨询公司-公共医学