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.2016年4月;11(4):1293-1299.
doi:10.3892/etm.2016.3085。 Epub 2016年2月17日。

MicroRNA-101通过靶向c-FOS对骨肉瘤细胞具有抑制作用

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MicroRNA-101通过靶向c-FOS对骨肉瘤细胞具有抑制作用

王子丽等。 实验治疗学. 2016年4月.

缩回

摘要

微小RNA(miRs)与骨肉瘤(OS)的发展和进展有关。然而,miR-101调控OS细胞增殖、迁移和侵袭的潜在机制仍有待阐明。在本研究中,逆转录定量聚合酶链反应数据显示,与匹配的相邻非肿瘤组织相比,12例OS患者的组织样本中miR-101经常下调。此外,与人成骨细胞系hFOB1.19相比,三种常见OS细胞系Saos-2、MG63和U2OS中的miR-101显著下调(P<0.01)。还进行了荧光素酶报告分析,并将c-FOS确定为U2OS细胞中miR-101的新靶点;miR-101的过度表达显著抑制了c-FOS的蛋白表达水平,而miR-101基因的敲除显著提高了U2OS细胞中前体蛋白的表达水平(P<0.01)。c-FOS的独立抑制和miR-101表达水平的过度表达显著抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01)。然而,c-FOS的过表达逆转了miR-101上调对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,表明miR-101通过靶向c-FOS在OS细胞中起到肿瘤抑制作用。因此,我们认为miR-101/c-FOS轴可能是OS的潜在治疗靶点。

关键词:入侵;microRNA-101;迁移;骨肉瘤;增殖。

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数字

图1。
图1。
逆转录定量聚合酶链反应检测miR-101在(A)来自12例OS患者的组织样本及其匹配的相邻非肿瘤组织中的相对表达水平,以及(B)人类OS细胞系Saos-2、MG63和U2OS。以人成骨细胞系hFOB1.19为对照。数据表示为平均值±标准偏差**与hFOB1.19相比P<0.01。miR-101,microRNA-101。
图2。
图2。
(A) 显示了c-FOS mRNA 3′-UTR内miR-101的野生型或突变型种子序列。(B) 荧光素酶报告物分析数据显示,联合转染带有miR-101模拟物的U2OS细胞和含有野生型c-FOS 3′-UTR(Luc-c-FOS)的载体会导致荧光素素酶活性显著降低,而联合转染含有miR-101模仿物和含有突变型c-FOS3′-UTRA(Lux-mutant c-FOS)与对照组相比无差异。仅转染Luc-c-FOS或Luc-butant c-FOS的U2OS细胞;与Luc-c-FOS或Luc-mutant c-FOS共转染的NC、U2OS细胞和干扰miR模拟物;miR-101,与Luc-c-FOS或Luc-mutant c-FOS和miR-101模拟物共同转染的U2OS细胞。数据表示为平均值±标准偏差**与对照组相比,P<0.01。UTR,非翻译区;NC,阴性对照;miR-101,microRNA-101。
图3。
图3。
(A) 逆转录定量聚合酶链反应,并测定miR-101在用miR-101模拟物或miR-101抑制剂转染的U2OS细胞中的相对表达。(B) Western blot分析检测转染miR-101模拟物或miR-101抑制剂的U2OS细胞中c-FOS的蛋白表达水平。GAPDH被用作内部参考。对照组:未转染的U2OS细胞。数据表示为平均值±标准偏差**与对照组相比,P<0.01。
图4。
图4。
(A) Western blot分析检测转染miR-101 mimics或c-FOS siRNA或与miR-101 simics和c-FOS质粒联合转染的U2OS细胞中c-FOS的蛋白表达水平。GAPDH被用作内部参考。(B) MTT法测定转染miR-101模拟物、c-FOS siRNA或与miR-101模仿物和c-FOS质粒联合转染的U2OS细胞的增殖能力。对照组:未转染的U2OS细胞。数据表示为平均值±标准偏差**与对照组相比P<0.01。##分别与miR-101或c-FOS siRNA相比P<0.01。miR-101,microRNA-101;小干扰RNA。
图5。
图5。
(A) 伤口愈合试验,以确定转染miR-101模拟物或c-FOS siRNA的U2OS细胞的迁移能力,或与miR-101模仿物和c-FOS质粒联合转染的U2OS细胞的迁移容量。放大倍数,x40。(B) 用Transwell分析法测定转染miR-101模拟物或c-FOS siRNA,或与miR-101模仿物和c-FOS质粒联合转染的U2OS细胞的侵袭能力。放大倍数,x100。对照组:未转染的U2OS细胞。数据表示为平均值±标准偏差**与对照组相比,P<0.01。##分别与miR-101或c-FOS siRNA相比P<0.01。miR-101、微小RNA-101。

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工具书类

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