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.2016年2月1日；2(2):131-157.
doi:10.1016/j.jcmgh.2015.11.009。

小鼠体内MYO5B的丢失再现了微绒毛包涵体病，并揭示了与新生儿十二指肠不同的顶端运输途径

维多利亚·G·维斯 1, 拜伦·C·诺尔斯 2, Eunyoung Choi先生 3, 安娜·E·戈尔茨坦 1, 贾妮斯·威廉姆斯 1, 伊丽莎白·H·曼宁 3, 约瑟夫·罗兰 1, 林恩·拉皮埃尔 3, 詹姆斯·R·戈尔登林 4
附属公司

小鼠体内MYO5B的丢失再现了微绒毛包涵体病，并揭示了与新生儿十二指肠不同的顶端运输途径

维多利亚·G·维斯等。 细胞分子胃肠肝素. .

摘要

背景和目标：MYO5B失活突变导致微绒毛包涵体病新生儿严重腹泻。活性MYO5B的缺失会导致病理学包涵体的形成和刷状缘酶的畸变。

方法：我们建立了三种MYO5B生殖系小鼠模型、组成性肠道靶向小鼠模型和诱导性肠道靶点小鼠模型。对小鼠进行肠细胞形态学评估。

结果：生殖系MYO5B KO小鼠表现出早期腹泻和发育迟缓，并伴有明显的微绒毛内含物和十二指肠顶端转运蛋白的丢失。包裹体中存在IgG。心尖转运蛋白丢失，十二指肠内有包涵体，但回肠几乎没有。维林克里；MYO5B型前/后小鼠十二指肠肠上皮细胞表现出类似的病理学和形态学变化。相反，当8周龄时用三苯氧胺诱导MYO5B KO时，VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后小鼠出现严重腹泻，十二指肠刷状缘酶丧失，但在肠细胞中观察到少量内含物。然而，如果给2天大的VillinCre服用他莫昔芬ERT2系统;MYO5B型前/后小鼠可见明显的微绒毛包涵体。

结论：MYO5B缺失后形成的微绒毛内含物揭示了新生儿十二指肠肠细胞中存在一种未被识别的顶端膜运输途径。然而，MYO5B缺失后的腹泻病理是由于十二指肠肠细胞顶膜转运蛋白表达缺陷所致。

关键词：肠细胞贩运；NHE3；拉布11a；拉布8a；突触蛋白3；画笔边框。

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利益冲突声明

提交人声明，不存在利益冲突。

数字

图1
图1
生殖系MYO5B KO和MYO5 B的产生前/后老鼠。(A类)图中显示了敲除小鼠项目中MYO5B的敲除第一等位基因的示意图。该构建物通过在外显子5之前提前终止MYO5B转录来生成生殖系MYO5B KO小鼠。携带该等位基因的小鼠与β-actin–FLP小鼠交配，以产生MYO5B前/后LoxP位点位于外显子5侧面的小鼠。(B类)基因组DNA PCR显示了用于鉴定小鼠基因型的不同PCR产物模式。100 bp DNA阶梯（马萨诸塞州伊普斯威奇新英格兰生物实验室）如图所示左侧车道凝胶，表示PCR产品尺寸。显示500-bp标记。
图2
图2
生殖系MYO5B KO小鼠无法茁壮成长。(A类)野生型（WT）、MYO5B-Het和MYO2B-KO小鼠十二指肠互补DNA的PCR证实了MYO5B信使RNA的丢失。塔塔盒结合蛋白（TBP）用作负荷控制。(B类)与MYO5B杂合子小鼠相比，十二指肠的Western blot证实MYO5 B生殖系KO小鼠中MYO 5B蛋白丢失。VDAC被用作加载控制。(C类)对照十二指肠MYO5B的免疫荧光显示亚尖峰染色。这种根尖下染色在MYO5B KO十二指肠中丢失。比例尺：50微米(D类)在对照组和MYO5B KO小鼠（n=3）中计算由水构成的粪便百分比。MYO5B KO小鼠从结肠收集的粪便中含水量明显较高*P（P） = .05. (E类)对照组和5日龄MYO5B KO同窝鼠的照片显示，MYO5 KO小鼠的体型缩小。(F类)6天大时称重的小鼠在WT和MYO5B-Het小鼠之间没有差异。MYO5B KO小鼠显著小于对照同窝小鼠（WT和Het）（n=3）*P（P） = .05.
图3
图3
十二指肠MYO5B KO的免疫荧光。(A类)对照组小鼠的Ezrin免疫染色显示沿着单个绒毛的长度有一个完全形成的刷状边界。插图显示没有内部埃兹林染色。在MYO5B KO十二指肠中，除顶部刷状缘外，ezrin标记了内部内含物。左侧插图：刚刚离开地穴的细胞中形成的内含物(箭头). 也发现包涵体沿着心尖膜形成(箭头,右侧插入). Ezrin免疫染色也显示MYO5B KO十二指肠融合绒毛。比例尺：100微米。(B类)DPPIV和CD10都标记了对照组小鼠的笔刷边缘，但没有标记内部结构(插入). 在MYO5B KO十二指肠中，DPPIV和CD10从顶面塌陷成弥漫性亚顶定位（*），并局限于内部包涵体(箭头). DPPIV也被发现局限于小的点状囊泡（DPPIV插入).比例尺：50微米。(C类)MYO5B十二指肠ezrin（绿色）、CD10（红色）和DPPIV（蓝色）免疫染色显示ezrin-阳性包涵体与CD10和DPPIV共同标记(箭头).比例尺：50微米。
图4
图4
远端小肠和结肠的比较。(A类)对来自对照组和MYO5B KO小鼠的远端小肠进行了ezrin免疫标记。在对照远端小肠中，ezlin标记了顶端刷状缘，而在近端小肠中没有发现细胞内免疫反应。远端MYO5B KO小肠仅偶尔出现融合绒毛和少量ezrin阳性内含物，并伴有顶端膜标记。比例尺：100μm。(B类)在对照组远端小肠中，DPPIV用少量亚顶端群体标记顶端膜。DPPIV在MYO5B KO远端小肠中的定位与对照组织相似，除了顶端膜外，还有一个紧密的亚顶端定位。此外，DPPIV阳性的细胞内包涵体较少。比例尺：50微米。(C类)在对照组和MYO5B KO小鼠的近端和远端肠中计算融合绒毛的数量。MYO5B KO近端肠每500μm肠长约有8个融合绒毛，与对照组相比显著增加。在MYO5B KO肠中观察到融合绒毛数量呈下降趋势，只有在远端小肠中发现罕见的融合绒毛*P（P） = .05. (D类)MYO5B KO十二指肠每500μm肠道中约有140个ezrin阳性内含物。同样，与MYO5B KO十二指肠相比，MYO2B KO远端小肠内含物的数量显著减少*P（P） = .05. (E类)量化与CD10或DPPIV联合标记的ezrin阳性内含物的百分比。98%以上的ezrin阳性包涵体与ezrin-和CD10或ezrin/和DPPIV双重标记。小肠近端和远端的共标记内含物无差异。(F类)对来自对照组和MYO5B KO小鼠的结肠进行ezrin免疫标记。比例尺：50微米。
图5
图5
TEM鉴定微绒毛内含物。对MYO5B KO十二指肠的TEM分析显示，包涵体具有完全形成的微绒毛，证实了微绒毛包涵体的形成。十二指肠的肠细胞内可见一些微绒毛内含物(左四个面板).比例尺：4微米。此外，在顶端膜处可见微绒毛包涵体，刷状缘微绒毛具有典型的欧米伽形内陷(右侧面板).比例尺：2μm。
图6
图6
贩运ezrin阳性内含物和DPPIV。(A类)对照组和MYO5B KO小鼠的十二指肠共染ezrin（绿色）和Lamp2（红色）。在对照肠细胞中，Lamp2阳性溶酶体集中在顶端表面下方。MYO5B丢失后，一部分ezrin阳性内含物被Lamp2阳性溶酶体紧密包围或杯状包围(箭头). 然而，其他ezrin阳性内含物并不位于Lamp2附近(箭头).比例尺：25微米。(B类)在对照组中，偶尔在亚尖峰区发现与Lamp2共存的小型DPPIV种群*在MYO5B KO十二指肠中，误食小点状小泡的DPPIV亚群被发现与Lamp2共标记。比例尺：25微米。
图7
图7
MYO5B KO十二指肠顶端贩运中断。控制(顶行)和MYO5B KO(最下面一行)十二指肠切片进行顶端蛋白（Rab8a、Rab11a、STX3、NHE3和pERM）的免疫染色。顶端转运蛋白Rab8a、Rab11a和STX3浓缩在对照组织的亚顶端，Rab8a也沿着侧膜标记*Rab8a和Rab11a从心尖膜丢失，偶尔局限于包涵体(箭头)在MYO5B KO十二指肠中。STX3塌陷成一个宽阔且弥散的亚尖端区域(星号和箭头)以及局限于夹杂物(箭头). 顶端交换器NHE3通常位于小肠肠上皮细胞的顶端膜上。MYO5B丢失后，NHE3定位错误，位于弥散的亚尖端隔室(星号)和标签内含物(箭头). 此外，还检测了微绒毛结构蛋白pERM，以进一步研究MYO5B KO组织中微绒毛的状态。对照十二指肠中的pERM仅标记在绒毛肠上皮细胞的顶端表面。与ezrin一样，在MYO5B KO十二指肠中，pERM免疫染色鉴定出肠细胞内的微绒毛内含物以及肠细胞顶端表面的微绒毛包裹物的形成(箭头).比例尺：50微米。
图8
图8
基底侧贩运的免疫荧光染色。十二指肠切片进行连接蛋白E-cadherin和p120以及基底侧Na/K-ATP酶的免疫染色。所有3种蛋白均定位于对照十二指肠的基底外侧膜(顶行). 在MYO5B KO十二指肠中观察到类似的基底外侧定位(最下面一行)，因此显示在MYO5B损失后基底外侧贩运没有中断。比例尺：50微米。
图9
图9
顶端微绒毛的透射电镜和扫描电镜分析。(A类)对照十二指肠用TEM成像。图像显示肠细胞顶端表面有长而直的微绒毛。比例尺：2微米。(B类)十二指肠MYO5B KO的TEM成像显示顶端微绒毛缩短。比例尺：2μm。(C类)测量了对照组和MYO5BKO十二指肠顶端微绒毛的长度和宽度。在MYO5B KO十二指肠中，微绒毛是对照微绒毛高度的一半。此外，MYO5B KO十二指肠上皮细胞的微绒毛稍宽*P（P）< .05. (D类)对照十二指肠扫描电镜显示微绒毛紧密排列。比例尺：5微米。(E类)通过扫描电镜观察到MYO5B KO十二指肠中紧密堆积的微绒毛，表明即使微绒毛缩短，堆积也基本保持不变。比例尺：5微米。
图10
图10
胚胎十二指肠的免疫荧光染色。对来自对照组和MYO5B KO窝产仔的胚胎（E18.5）十二指肠进行顶端标记的免疫染色，以检查误吸和微绒毛包涵体形成。与新生儿一样，所有标记物（ezrin、DPPIV、CD10和NHE3）都标记了对照胚胎十二指肠的顶膜(顶行). 与新生儿相比，在MYO5B KO十二指肠中未观察到ezrin阳性包涵体，这表明直到出生后才形成微绒毛包涵体。然而，DPPIV、CD10和NHE3染色被破坏为亚尖端定位(星号)在对照组的室友中没有发现。这些发现表明，出生前存在心尖部不适，但可能要到出生后才能形成微绒毛内含物。比例尺：50微米。
图11
图11
ezrin阳性内含物中的IgG内化。通过小鼠IgG（Ms IgG，绿色)和埃兹林(红色). 为了检测内源性小鼠IgG，不能使用鼠对鼠阻断试剂盒，从而导致来自间质细胞的高背景信号。尽管如此，在对照十二指肠中未观察到明显的小鼠体内IgG(左侧面板). 相反，在MYO5B KO十二指肠中，在ezrin阳性内含物中发现了小鼠IgG(右侧面板).比例尺：10微米。
图12
图12
MYO5B KO十二指肠的增殖和细胞谱系。(A类)Ki67被用作增殖标记物。切片染色Ki67（红色）和p120（绿色）。Ki67阳性增殖细胞局限于对照小鼠的短窝内。在MYO5B KO小鼠中，观察到增殖增加以及隐窝扩张。4'，6-二氨基-2-苯基吲哚（蓝色）。比例尺：50μm。(B类)为了确定Paneth细胞的状态，对切片进行溶菌酶（红色）和E钙粘蛋白（E-cad）（绿色）的免疫染色。在MYO5B KO十二指肠中观察到Paneth细胞过早成熟。比例尺：50微米。(C类)对对照组和MYO5B KO十二指肠每个隐窝的Ki67阳性增殖细胞数量进行量化。在MYO5B KO十二指肠中发现了少量但显著的增殖增加*P（P） = .05. (B类)溶菌酶阳性的Paneth细胞在MYO5B KO中出现的时间早于对照窝友。虽然在对照十二指肠中每10个隐窝中发现的Paneth细胞少于1个，但在MYO5B KO十二指肠内每10个密窝中计数的Paneth4个以上*P（P） = .05. (D类)组织切片共染血统标记物Muc2或Chga（红色）和p120（绿色）。对照组和MYO5B KO组织中均存在杯状细胞（Muc2阳性）和肠内分泌细胞（Chga阳性）。比例尺：50微米。
图13
图13
VillinCre的特性；MYO5B型前/后肠。(A类)对照组和VillinCre的近端和远端小肠；MYO5B型前/后对小鼠进行MYO5B（绿色）和Na/K-ATP酶（红色）免疫染色。对照组织中观察到明显的亚峰值MYO5B浓度，但在VillinCre中这种免疫反应性消失；MYO5B型前/后肠（近端和远端）。值得注意的是，Na/K-ATP酶的表达和定位没有观察到显著变化。比例尺：25微米。(B类)VillinCre的图像；MYO5B型前/后小白鼠和对照同窝小白鼠表现出明显的尺寸差异。(C类)5日龄小鼠的体重显示VillinCre；MYO5B型前/后小白鼠的体重约为对照窝鼠的一半*P（P） = .05 (D类)Ezrin免疫荧光显示绒毛融合(绿色箭头)VillinCre中存在ezrin阳性包涵体；MYO5B型前/后近端小肠。然而，在VillinCre仅观察到偶尔的包裹体；MYO5B型前/后远端小肠和罕见的融合绒毛(右下面板).比例尺：50微米。(E类)类似于生殖系MYO5B KO小鼠，VillinCre；MYO5B型前/后小鼠表现出从小肠近端到远端的表型梯度。近端肠每500μm长度约有5个融合绒毛，这在远端小肠中减少为罕见的融合绒毛。同样，VillinCre；MYO5B型前/后小肠远端的内含物明显少于近端。此外，98%以上的ezrin阳性内含物也标记有CD10或DPPIV，在小肠近端和远端之间没有发现显著差异*P（P）=.05。SI，小肠。
图14
图14
瓦解VillinCre的顶点贩运；MYO5B型前/后十二指肠。(A类)控制(顶行)和VillinCre；MYO5B型前/后(最下面一行)十二指肠切片进行顶端蛋白（pERM、NHE3、CD10和DPPIV）的免疫染色。对照十二指肠pERM染色显示微绒毛仅位于绒毛肠上皮细胞的顶面。在VillinCre；MYO5B型前/后十二指肠，pERM免疫染色确定肠细胞内的微绒毛内含物以及肠细胞顶端表面的微绒毛包裹物的形成(箭头). 顶端交换器NHE3通常位于小肠肠上皮细胞的顶端膜上。MYO5B丢失后，NHE3被错误定位于弥漫性根尖下室(星号)并在内含物中标记(箭头). CD10和DPPIV都标记了对照小鼠的刷尖边界。在VillinCre；MYO5B型前/后十二指肠、CD10和DPPIV被重新定位到弥散的尖端下定位(星号)以及内部包裹体(箭头). DPPIV也定位于小点状囊泡(箭头). 在VillinCre；MYO5B型前/后远端小肠(最后一列)，尽管观察到一些DPPIV亚尖峰聚集，但与对照组相比，未发现明显的总体差异。比例尺：50微米。(B类)顶端转运蛋白Rab8a、Rab11a和STX3浓缩在对照组织的亚顶端，Rab8a也沿着侧膜标记。Rab8a和Rab11a从根尖膜中丢失，在根尖下区域有少量积累(星号)偶尔局限于包裹体(箭头)在VillinCre；MYO5B型前/后十二指肠。STX3塌陷成弥漫的亚尖端区域(星号)以及局限于夹杂物(箭头).比例尺：50微米。(C类)控制和VillinCre；MYO5B型前/后十二指肠E-钙粘蛋白和p120免疫染色。在控制组和VillinCre中；MYO5B型前/后十二指肠、E-cadherin和p120标记基底外侧膜，两者无明显差异。比例尺：50微米。SI，小肠。
图15
图15
绒毛中溶酶体的定位和细胞组成的特征。(A类)来自对照组和VillinCre的十二指肠；MYO5B型前/后十二指肠被三重染色，分别为ezrin（蓝色）、Lamp2（绿色）和DPPIV（红色）。在对照肠细胞中，Lamp2阳性溶酶体集中在ezrin和DPPIV阳性的顶面下方。在VillinCre；MYO5B型前/后十二指肠是ezrin阳性包涵体的一个子集，被Lamp2阳性溶酶体紧密包围或呈杯状(箭头). 然而，其他ezrin阳性内含物并不位于Lamp2附近(箭头). DPPIV内化为与Lamp2共定位的小泡(星号).比例尺：25微米。(B类)控制和VillinCre；MYO5B型前/后分析十二指肠的增殖细胞（绿色为Ki67）和Paneth细胞的早期成熟（红色为溶菌酶）。两种小鼠品系之间没有发现显著差异。4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（蓝色）。比例尺：50μm。(C类)切片进行Muc2免疫染色（红色，左侧面板)和Chga（红色，右侧面板)带有p120（绿色）。与生殖系MYO5B KO相似，对照窝友与VillinCre之间没有显著差异；MYO5B型前/后十二指肠。4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（蓝色）。比例尺：50微米。
图16
图16
VillinCre根尖微绒毛的透射电镜和扫描电镜分析；MYO5B型前/后老鼠。(A类)对照十二指肠用TEM成像。图像显示肠细胞顶端表面有长而直的微绒毛。比例尺：500纳米。(B类)VillinCre的TEM成像；MYO5B型前/后十二指肠顶端微绒毛缩短，内部内含物有明显微绒毛。比例尺：500纳米(左侧面板). TEM分析也显示了内部微绒毛内含物，微绒毛完全形成。比例尺：2微米(右侧面板). (C类)对照组和VillinCre的顶端微绒毛长度和宽度；MYO5B型前/后测量十二指肠。在VillinCre；MYO5B型前/后十二指肠微绒毛明显短于对照微绒毛。此外，VillinCre的微绒毛也较宽；MYO5B型前/后十二指肠肠细胞*P（P）< .05. (D类)对照十二指肠扫描电镜显示微绒毛紧密排列。比例尺：2微米。(E类)扫描电镜下可见VillinCre中紧密堆积的微绒毛；肌肉5b前/后十二指肠，显示即使微绒毛缩短，填塞也基本保持不变。比例尺：2微米。
图17
图17
VillinCre的特性ERT2系统;MYO5B型前/后用三苯氧胺诱导8周龄小鼠的小鼠小肠。八岁的VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后给小鼠腹腔注射一次2mg三苯氧胺，以诱导MYO5B的肠道KO。(A类)对照组和VillinCre的近端和远端小肠ERT2系统;MYO5B型前/后对小鼠进行MYO5B免疫染色。在对照组织中观察到明显的亚峰值MYO5B浓度，但在VillinCre中MYO5免疫荧光消失ERT2系统;MYO5B型前/后近端和远端肠道中的小鼠。比例尺：50微米。(B类)在对照组和VillinCre组中测定了由水构成的粪便百分比ERT2系统;MYO5B型前/后老鼠。维尔林克里ERT2系统;MYO5B型前/后小鼠从结肠收集的粪便中的水分含量明显较高（90%的粪便水）*P（P） = .05. (C类)对照组小鼠的Ezrin免疫染色显示沿绒毛长度有一个完全形成的刷状边界。插入：一条强而尖锐的埃兹林阳性画笔边缘带。在VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠，ezrin沿着刷状缘标记出一条细带，提示顶端微绒毛缩短或消失(星号). 值得注意的是，在VillinCre中只观察到偶尔的ezrin阳性包涵体ERT2系统;MYO5B型前/后小鼠肠道。类似地，绒毛蛋白标记对照十二指肠中明亮而宽的刷状边界。在VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠，顶部绒毛染色薄得多，甚至在某些部位没有(星号)，仅观察到罕见夹杂物。比例尺：50微米。(D类)对融合绒毛和埃兹林阳性包涵体总数进行量化。对照组和VillinCre组融合绒毛的数量没有差异ERT2系统;MYO5B型前/后小肠近端和远端。与对照组相比，近端肠中埃兹林阳性内含物的数量显著增加。然而，在VilinCre，每500μm组织中的夹杂物总数仅为0.75个ezrin阳性夹杂物ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠*P（P） = .05. SI，小肠。
图18
图18
CD10和DPPIV内化并运输至溶酶体。(A类)来自control和VillinCre的十二指肠ERT2系统;MYO5B型前/后小鼠共染CD10（绿色）和Lamp2（红色）。在对照肠细胞中，Lamp2阳性溶酶体正好位于CD10标记的顶端表面下方。诱导MYO5B丢失后，CD10的一个子集被内化(星号和箭头). 当CD10从心尖表面内化时，在CD10周围发现Lamp2(箭头)此外，Lamp2与内部CD10群体共定位(星号).比例尺：25微米。(B类)对照组和VillinCre的近端和远端小肠ERT2系统;MYO5B型前/后对小鼠进行DPPIV（绿色）和Lamp2（红色）免疫标记。在近端和远端小肠对照组中，DPPIV主要位于刷状缘，但在与Lamp2共同定位的亚顶端区域发现少量DPPIV(星号). 在VillinCreERT2系统;肌肉5b前/后十二指肠，DPPIV塌陷成弥漫的尖端下区域和小点状小泡(星号). DPPIV标记的小泡，以及部分弥漫DPPIV染色，与Lamp2共同标记(星号). 在VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后小肠远端，大多数DPPIV残留在顶端膜上，在小泡中发现少量内化的DPPIV(星号). 与十二指肠一样，这种内部化的DPPIV群与Lamp2共同标记(星号).比例尺：25微米。SI，小肠。
图19
图19
VillinCre顶端和基底外侧贩运的中断ERT2系统;MYO5B型前/后老鼠。(A类)Control和VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后对十二指肠进行顶端交换蛋白（NHE3）和顶端运输蛋白（Rab8a和Rab11a）染色。NHE3正常根尖定位(左上面板)对照组十二指肠在VillinCre的细胞质中塌陷成弥散型ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠(绿色星号). 相应地，Rab8a和Rab11a在VillinCre的正常集中亚顶端定位被破坏ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠(绿色星号). 在VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠、Rab8a和Rab11a明显从顶下区丢失，转移到非常弥散的细胞质定位。比例尺：50微米。(B类)通过Na/K-ATP酶、E-cadherin和p120的免疫染色分析对照组和VillinCre的基底侧贩运ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠。在对照十二指肠中，所有3种蛋白都紧密定位于肠细胞的基底外侧膜。虽然在VillinCre保留了一些正常的基底外侧定位ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠、异常的内部点状小泡也观察到Na/K-ATP酶、E-cadherin和p120(绿色星号和插入)，这表明MYO5B的丢失扰乱了基底侧的贩运。比例尺：50微米。
图20
图20
VillinCre的增殖和EM分析ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠。(A类)对照组十二指肠透射电镜图像显示肠细胞顶面有长而直的微绒毛。比例尺：2微米。(B类)通过TEM分析，VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠顶端微绒毛有不同程度的畸变。顶端微绒毛缩短的常见区域(左侧面板)观察到顶部微绒毛剥蚀斑块(右侧面板).比例尺：2微米。(C类)对照组和VillinCre的顶端微绒毛长度和宽度ERT2系统;MYO5B型前/后对十二指肠肠细胞进行定量。在VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠肠上皮细胞、微绒毛明显短于对照微绒毛。此外，VillinCre的顶端微绒毛也较宽ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠肠细胞*P（P）< .05. (D类)对照十二指肠扫描电镜显示微绒毛紧密排列。比例尺：2μm。(E类)通过SEM，在VillinCre中可以看到紧密堆积的微绒毛区域ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠，以及微绒毛缩短的区域。比例尺：2微米(左侧面板). 此外，对一些横切面肠细胞的扫描电镜分析进一步证实了短微绒毛的区域(右上面板;比例尺：1μm），并显示异常微绒毛形态，如连接外观(右下面板;比例尺：1μm）。(F类)对照组和VillinCre中的增殖ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠通过Ki67（绿色）和4′，6-二氨基-2-苯基吲哚（蓝色）免疫荧光检测。增殖（Ki67免疫反应性显示）仅限于对照组和VillinCre组的隐窝ERT2系统;MYO5B型前/后十二指肠。比例尺：50微米。(G公司)量化每个隐窝中Ki67阳性细胞的数量以进行比较。VillinCre的增殖显著增加ERT2系统;肌肉5b前/后十二指肠隐窝与对照十二指肠的隐窝进行比较*P（P） = .05.
图21
图21
VillinCre MYO5B缺失的新生儿诱导ERT2系统;MYO5B型前/后老鼠。他莫昔芬诱导的对照组2日龄窝鼠MYO5B丢失(顶行和第二个插入行)和VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后老鼠(第三排和底部插入行)进行了检查，以分析新生儿与成年VilinCre相比微绒毛内含物的形成ERT2系统;MYO5B型前/后老鼠。十二指肠切片进行三重染色，检测MYO5B（蓝色）、DPPIV（绿色）和ezrin（红色）。在对照组中，MYO5B定位于DPPIV和ezrin阳性共标记刷边界下方的亚尖端区域。在对照组中观察到一些弥漫性内部DPPIV(星号). 在VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后新生儿十二指肠，显著的MYO5B亚尖端定位丢失在绒毛底部。值得注意的是，MYO5B并没有从绒毛上半部分完全丢失。DPPIV从心尖膜上消失，并塌陷到一个突出的弥漫性心尖下区域(星号). 此外，与成人VillinCre相比ERT2系统;MYO5B型前/后小鼠，VillinCreERT2系统;MYO5B型前/后新生儿在十二指肠内形成了许多内部ezrin阳性包涵体(箭头)与DPPIV联合标记。这些内含物类似于MYO5B KO和VillinCre中发现的微绒毛内含物；MYO5B型前/后新生小鼠。比例尺：50μm。
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引用人

  • 一种新型基于患者的MYO5B点突变模型揭示了MVID发病机制。
    Burman A、Momoh M、Sampson L、Skelton J、Roland JT、Ramos C、Krystofiak E、Acra S、Golderning JR、Kaji I。 Burman A等人。 细胞分子胃肠肝素。2023;15(4):1022-1026. doi:10.1016/j.jcmgh.2022.12.015。Epub 2022年12月31日。 细胞分子胃肠肝素。2023 PMID：36592862 免费PMC文章。 没有可用的摘要。
  • 肌球蛋白Vb作为肠癌的抑癌基因。
    Cartón-García F、Brotons B、Anguita E、Dopeso H、Tarragona J、Nieto R、Garcáa-Vidal E、Macaya I、Zagyva Z、Dalmau M、Sánchez-Martín M、van Ijzendoorn SCD、Landolfi S、Hernandez-Losa J、Schwartz S Jr、Matias-Guiu X、Ramón Y Cajal S、Martínez-Bariocanal a、Arango D。 Cartón-García F等人。 致癌物。2022年12月；41(49):5279-5288. doi:10.1038/s41388-022-02508-2。Epub 2022年11月1日。 致癌物。2022 PMID：36316444
  • 肌球蛋白5b是在肠刷边界中正确定位绒毛间粘附复合体所必需的。
    Dooley SA、Engevik KA、Digrazia J、Stubler R、Kaji I、Krystofiak E、Engevi AC。 Dooley SA等人。 美国生理学杂志胃肠病学肝病生理学。2022年11月1日；323（5）：G501-G510。doi:10.1152/ajpgi.00212.2022。Epub 2022年10月11日。 美国生理学杂志胃肠病学肝病生理学。2022 PMID：36218265 免费PMC文章。
  • 血清糖皮质激素诱导激酶1 SGK1缺失会加重微绒毛包涵体病（MVID）的吸收不良和腹泻。
    Ahsan MK、Dos Reis DC、Barbieri A、Sumigray KD、Nottoli T、Salas PJ、Ameen NA。 Ahsan MK等人。 《临床医学杂志》，2022年7月19日；11(14):4179. doi:10.3390/jcm11144179。 《临床医学杂志》，2022年。 PMID：35887942 免费PMC文章。
  • 缺乏Rab11FIP1的小鼠出现自发性炎症，并表现出对结肠损伤的敏感性增加。
    Rathan-Kumar S、Roland JT、Momoh M、Goldstein A、Lapierre LA、Manning E、Mitchell L、Norman J、Kaji I、Golderning JR。 Rathan-Kumar S等人。 美国生理学杂志胃肠病学肝病生理学。2022年9月1日；323（3）：G239-G254。doi:10.1152/ajpgi.00042.2022。Epub 2022年7月12日。 美国生理学杂志胃肠病学肝病生理学。2022 PMID：35819177 免费PMC文章。
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工具书类

    1. Erickson R.P.、Larson-Thome K.、Valenzuela R.K.Navajo微绒毛包涵体病是由MYO5B突变引起的。《美国医学遗传学杂志》，2008年；146A:3117-3119。-公共医学
    1. Muller T.、Hess M.W.、Schiefermier N.MYO5B突变导致微绒毛包涵体疾病并破坏上皮细胞极性。自然遗传学。2008;40:1163–1165.-公共医学
    1. Ruemmele F.M.、Muller T.、Schiefermier N.MYO5B功能丧失是微绒毛包涵体疾病的主要原因：15种新突变和CaCo-2 RNAi细胞模型。哼，变种。2010;31:544–551.-公共医学
    1. Davidson G.P.，Cutz E.，Hamilton J.R.家族性肠病：一种从出生起就长期腹泻、发育不良和发育不良绒毛萎缩的综合征。胃肠病学。1978;75:783–790.-公共医学
    1. Ruemmele F.M.，Schmitz J.，Goulet O.微绒毛包涵体病（微绒毛萎缩）孤儿罕见疾病杂志。2006;1:22.-项目管理咨询公司-公共医学

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