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.2016年3月18日；17(3):387.
doi:10.3390/ijms17030387。

TFE3通过自噬诱导的脂质吞噬和PGC1α介导的脂肪酸β氧化减轻肝脏脂肪变性

杰雄 1 2, 王克洲 三, 何江平 4, 张光亚 5, 张琰琰 6, 陈凤玲 7
附属公司

TFE3通过自噬诱导的脂质吞噬和PGC1α介导的脂肪酸β氧化减轻肝脏脂肪变性

杰雄等。 国际分子科学杂志. .

摘要

自噬流量不足与肝脂肪变性的发生密切相关。转录因子E3（TFE3）是调节自噬流量和溶酶体功能的关键基因。因此，我们研究了TFE3在肝脂肪变性细胞模型中的作用。我们构建了稳定过度表达或抑制TFE3表达的L02肝细胞系。随后，通过自噬通量测定、脂质油红O（ORO）染色、免疫荧光染色和线粒体β-氧化评估，测定TFE3对肝细胞脂质代谢的影响。最后，我们使用染色质免疫沉淀（CHIP）分析和荧光素酶报告系统分析过氧化物酶体增殖激活受体γ辅活化因子1α（PGC1α）是否是TFE3在肝脂肪变性调节中的潜在靶基因。我们发现TFE3的过度表达显著减轻了肝细胞脂肪变性。相反，TFE3的下调导致脂肪变性加重。机理研究表明，TFE3对肝细胞脂肪变性的调控作用依赖于自噬诱导的脂肪酶吞噬和PGC1α介导的脂肪酸β氧化，因为Atg5小干扰RNA（siRNA）阻断了这些途径或PGC1αsiRNA显著减弱了TFE3介导的脂肪变性调节。总之，TFE3基因为肝脂肪变性和其他代谢性疾病的治疗提供了新的见解。

关键词：PGC1α；TFE3；自噬；肝脂肪变性；β-氧化。

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数字

图1
图1
在游离脂肪酸（FFA）诱导的肝细胞脂肪变性和转录因子E3中，自噬通量受损(TFE3型)可能与此过程有关。(A类)与未添加FFA的细胞相比，暴露于1mM FFA混合物中24小时的油红O（ORO）染色细胞的代表性图像。标尺，100μm；(B类)细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶的水平；(C类)细胞内TG含量；(天)qPCR数据显示调节自噬体和溶酶体融合的不同基因的mRNA水平(虚拟专用交换机11,第18页)，溶酶体水解能力(CTSD公司,C类TSL公司)和TFE3型; (E类,F类)自噬通量相关蛋白的免疫印迹和密度分析(生命周期3,SQSTM1/p62),虚拟专用交换机11,CTSL公司,TFE3型和内控蛋白β-肌动蛋白显示了具有代表性的图像，并将数据表示为三个独立实验的平均值±SEM*第页< 0.05, **第页<0.01，以及***第页< 0.001与对照组。
图2
图2
的过度表达TFE3型增加自噬通量，并击倒TFE3型产生相反的结果。(A类)过度表达或敲除TFE3型通过向培养基中添加强力霉素来启动。将细胞暴露于1 mM FFA混合物中24 h，然后在不含FFA的培养基中再培养24 hTFE3型和调节自噬体的代表性基因(Atg5型,附件16)，溶酶体膜蛋白(灯1,MCOLN1型)自噬体与溶酶体的融合(虚拟专用交换机11,视频处理18)和溶酶体水解酶(C类TSD公司,C类TSL公司)如图所示；(B类,C类)免疫印迹和密度分析TFE3型,生命周期3,SQSTM1/p62,Atg5型,C类TSL公司和β-肌动蛋白; (天)pEGFP-生命周期3将质粒转染到L02细胞12小时后，再将其暴露于(A类)然后通过观察GFP分析自噬通量-生命周期3点和LysoTracker染色。比例尺，20μm。显示了三个独立实验的代表性图像；(E类)GFP的量化-生命周期3每个单元格中的点。计数15个细胞，数据以平均值±SEM表示；(F类)用LysoTracker Red装载溶酶体，并通过共焦显微镜观察。LysoTracker红平均荧光表示为平均荧光强度；(G公司)LysoTracker红染GFP的定量-生命周期3点，表示每个细胞的自溶体数量**第页<0.01，以及***第页< 0.001与LV-Vector组；## 第页<0.01，以及### 第页< 0.001与LV-shScram组。
图2
图2
的过度表达TFE3型增加自噬通量，并击倒TFE3型产生相反的结果。(A类)过度表达或敲除TFE3型通过向培养基中添加强力霉素来启动。将细胞暴露于1 mM FFA混合物中24 h，然后在不含FFA的培养基中再培养24 hTFE3型和调节自噬体的代表性基因(Atg5型,第16页)，溶酶体膜蛋白(灯1,MCOLN1型)自噬体与溶酶体的融合(虚拟专用交换机11,视频处理18)和溶酶体水解酶(C类TSD公司,C类TSL公司)如图所示；(B类,C类)免疫印迹和密度分析TFE3型,生命周期3,SQSTM1/p62,Atg5型,C类TSL公司和β-肌动蛋白; (天)pEGFP-生命周期3将质粒转染到L02细胞12小时后，再将其暴露于(A类)然后通过观察GFP分析自噬通量-生命周期3点和LysoTracker染色。比例尺，20μm。显示了三个独立实验的代表性图像；(E类)GFP的量化-生命周期3每个单元格中的点。对15个细胞进行计数，数据以平均值±SEM表示；(F类)用LysoTracker Red装载溶酶体，并通过共焦显微镜观察。LysoTracker红平均荧光表示为平均荧光强度；(G公司)LysoTracker红染GFP的定量-生命周期3点，表示每个细胞的自溶体数量**第页<0.01，以及***第页< 0.001与LV-Vector组；## 第页<0.01，以及### 第页< 0.001与LV-shScram组。
图3
图3
TFE3型以自噬介导的脂肪酶依赖性方式影响肝细胞脂肪变性。细胞被转染Atg5型小干扰RNA或干扰小干扰RNA；转染后12小时TFE3型通过向培养基中添加多西环素开始培养，然后将细胞暴露于1 mM FFA混合物中24小时，并在不含FFA的培养基中培养36小时(A类)或24小时(B类); (A类)油脂红O染色。比例尺，100μm；(B类)LC3免疫荧光（红色）和BODIPY 493/503（绿色）脂质荧光染色。如白色箭头所示生命周期3带有BODPY493/503染料的圆点表示脂类吞噬的诱导（黄色）。比例尺，20μm；(C类)通过测量520 nm处的吸光度来量化ORO；(天)五个显微镜视野中平均噬脂点的定量；(E类)各组细胞上清液中AST水平；(F类)各组细胞内TG含量。显示了具有代表性的图像，并以三个独立实验的平均值±SEM表示数据**第页<0.01，以及***第页< 0.001与LV-Vector组；# 第页<0.05，以及## 第页< 0.01与LV-shScram组；$ 第页<0.05，以及$$$ 第页< 0.001与转染干扰siRNA的相应组。
图3
图3
TFE3型以自噬介导的脂肪酶依赖性方式影响肝细胞脂肪变性。细胞被转染Atg5型小干扰RNA或干扰小干扰RNA；转染后12小时TFE3型通过向培养基中添加多西环素开始培养，然后将细胞暴露于1 mM FFA混合物中24小时，并在不含FFA的培养基中培养36小时(A类)或24小时(B类); (A类)油脂红O染色。比例尺，100μm；(B类)LC3免疫荧光（红色）和BODIPY 493/503（绿色）脂质荧光染色。如白色箭头所示生命周期3带有BODPY493/503染料的圆点表示脂类吞噬的诱导（黄色）。比例尺，20μm；(C类)通过测量520 nm处的吸光度来量化ORO；(天)五个显微视野中平均吞噬点的定量；(E类)各组细胞上清液中AST水平；(F类)各组细胞内TG含量。显示了具有代表性的图像，并以三个独立实验的平均值±SEM表示数据**第页<0.01，以及***第页< 0.001与LV-Vector组；# 第页<0.05，以及## 第页< 0.01与LV-shScram组；$ 第页<0.05，以及$$$ 第页< 0.001与转染干扰siRNA的相应组。
图4
图4
TFE3型通过以下途径调节肝细胞脂肪变性PGC1α-介导线粒体脂肪酸β氧化。(A类)调节脂肪生成和TG合成基因的mRNA水平(FASN公司,行政协调会,SCD1系列,DGAT公司1,DGAT2公司)，经典的TG脂肪分解酶(PNPLA2项目,锂离子电池)以及调节线粒体β-氧化的物质(PGC1α,PPARα,CPT1α,环氧乙烷1); (B类,C类)免疫印迹和密度分析PGC1α,PPARα,CPT1α,环氧乙烷1和β-肌动蛋白; (天)测定培养基中β-羟基丁酸的释放量；(E类)各组细胞内TG含量；(F类)每组的FFA水平。给出了具有代表性的图像，并将数据表示为三个独立实验的平均值±SEM*第页< 0.05, **第页<0.01，以及***第页< 0.001与LV矢量组；# 第页<0.05，以及## 第页< 0.01与LV-shScram组；$ 第页< 0.05,$$ 第页<0.01，以及$$$ 第页< 0.001与转染干扰siRNA的相应组。
图5
图5
PGC1α-通过耗氧率（OCR）和剩余呼吸容量（SRC）测量介导的线粒体脂肪酸β-氧化。(A类)在整个实验期间，在基线检查时，在存在以下指示药物的情况下连续测量OCR：寡霉素（1μM）；羰基氰化物-4-三氟甲氧基苯腙（FCCP，1μM）；鱼藤酮（1μM）加抗霉素A（1μM）。一个代表性的图显示了PGC1α-从属的TFE3型-诱导备用呼吸能力增加；(B类)各组初始基础OCR（底部水平虚线）；(C类)通过计算最大非受控OCR（顶部水平虚线）和初始基础OCR（底部水平虚线。显示了三个独立实验的代表性结果，数据以三个技术复制品的平均值±SEM表示**第页<0.01，以及***第页< 0.001与LV-Vector组；# 第页<0.05，以及## 第页< 0.01与LV-shScram组；$ 第页< 0.05,$$ 第页<0.01，以及$$$ 第页< 0.001与转染干扰siRNA的相应组。
图6
图6
TFE3型调节PGC1α通过结合其启动子区域。(A类)的结构PGC1α启动程序显示电子箱的位置；(B类)之间的约束TFE3型和PGC1α启动子经CHIP分析。用抗TFE3和IgG抗体免疫沉淀可溶性染色质。免疫沉淀物通过qPCR分析，使用的引物位于PGC1α发起人（此处命名为E-box 1和E-box 2）。该值显示为相对于输入的百分比。(C类)E-box的突变减弱了荧光素酶的活性。这个PGC1α发起人(PGC1αwt），−444位点突变启动子(PGC1αmut 1），−257位点突变启动子(PGC1αmut 2）和启动子，其中−444和−257位点均发生突变(PGC1αmut all）被克隆到pGL3-荧光素酶载体中。荧光素酶活性在细胞与TFE3型和wt或突变PGC1α启动子构建体。为了正常化目的，共转染对照Renilla质粒。与空载体质粒共转染的细胞中的荧光素酶活性设置为1，并计算相对于该活性水平的折叠变化。显示了三个独立实验的代表性结果，数据以三个技术复制品的平均值±SEM表示**第页<0.01，以及***第页< 0.001与IgG对照组(B类)或pCDNA3.1-Vector组(C类);# 第页<0.05，以及### 第页< 0.001与转染pPGC1αwt。
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    1. Brunt E.M.非酒精性脂肪性肝病：评估组织系统的利弊。国际分子科学杂志。2015;17:97. doi:10.3390/ijms17010097。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
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    1. Berlanga A.、Guiu-Jurado E.、Porras J.A.、Auguet T.非酒精性脂肪肝的分子途径。临床。实验胃肠病学。2014;7:221–239。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Martinet W.，Agostinis P.，Vanhocke B.，Dewaele M.，de Meyer G.R.疾病自噬：一把具有治疗潜力的双刃剑。临床。科学。2009;116:697–712. doi:10.1042/CS20080508。-内政部-公共医学
    1. Amir M.、Czaja M.J.非酒精性脂肪性肝炎的自噬。胃肠病学专家版。肝素。2011;5:159–166. doi:10.1586/egh.11.4。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

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