Sterol Carrier Protein-2, a Nonspecific Lipid-Transfer Protein, in Intracellular Cholesterol Trafficking in Testicular Leydig Cells

doi:10.1371/journal.pone.0149728

.2016年2月22日；11（2）：e0149728。

doi:10.1371/journal.pone.0149728。电子收集2016。

睾丸间质细胞内胆固醇转运中的非特异性脂质转运蛋白甾醇载体蛋白-2

南希·C·李^1 2, 锦江扇^1 三, 瓦西里奥斯·帕帕佐普洛斯^1 2 三 4

附属公司

¹麦吉尔大学健康中心转化生物学中心研究所，1001 Boul。Décarie，加拿大魁北克省蒙特利尔，H4A 3J1。
²加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学药理学与治疗学系，H3G 1A4。
^三加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学医学系，H3G 1A4。
⁴加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学生物化学系，H3G 1A4。

PMID： 26901662
预防性维修识别码：项目经理4762939
内政部： 10.1371/新闻稿.0149728

睾丸间质细胞细胞内胆固醇运输中的类固醇载体蛋白-2，一种非特异性脂质转移蛋白

南希·C·李等。公共科学图书馆一号. 2016.

.2016年2月22日；11（2）：e0149728。

doi:10.1371/journal.pone.0149728。电子收集2016。

作者

南希·C·李^1 2, 锦江扇^1 三, 瓦西里奥斯·帕帕佐普洛斯^1 2 三 4

附属公司

¹麦吉尔大学健康中心研究所，转化生物学中心，1001 Boul。Décarie，加拿大魁北克省蒙特利尔，H4A 3J1。
²加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学药理学与治疗学系，H3G 1A4。
^三加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学医学系，H3G 1A4。
⁴麦吉尔大学生物化学系，魁北克省蒙特利尔市，H3G 1A4，加拿大。

PMID： 26901662
预防性维修识别码：项目经理4762939
内政部： 10.1371/新闻稿.0149728

摘要

甾醇载体蛋白-2（SCP2），也称为非特异性脂质转运蛋白，被认为在细胞内脂质转运和代谢中起着重要作用，它与脂质转运异常相关的疾病有关，如Zellweger综合征。Scp2基因编码58kDa固醇载体蛋白-x（SCPX）和15kDa原-Scp2蛋白，这两种蛋白的C末端均含有13kDa Scp2结构域。我们发现22-NBD-胆固醇（胆固醇的荧光类似物和首选SCP2配体）未定位于过氧化物酶体中。这就对以往关于SCPX和SCP2蛋白定位及其与细胞内胆固醇转运中过氧化物酶体和线粒体的关系的报道提出了质疑。小鼠睾丸和MA-10小鼠肿瘤Leydig细胞冷冻切片的免疫荧光染色显示，SCPX和SCP2存在于小鼠睾丸间质组织和MA-10细胞中。利用SCPX和SCP2的荧光融合蛋白，以及共焦活细胞成像，研究这些蛋白的亚细胞靶向性和假定的线粒体靶向序列的功能。结果表明，SCPX和SCP2通过C末端PTS1结构域靶向过氧化物酶体，但仅假定的N末端线粒体靶向序列不足以将SCPX与SCP2定位到线粒体。同源模型和分子对接研究表明，SCP2结构域结合胆固醇、，但缺乏结合和/或转运的特异性。这些发现进一步加深了我们对SCPX和SCP2在细胞内胆固醇转运中作用的理解，并对这些蛋白质在胆固醇转运中的作用提出了新的观点。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

**图1。22-NBD-胆固醇与线粒体和过氧化物酶体的亚细胞定位。**
（A）用22-NBD-胆固醇染色的MA-10细胞的共焦激光显微镜图像（左），用丝裂原-DsRed-pero转染的细胞（中），以及22-NBD胆固醇和丝裂原DsRed-pero染色的重叠（右）。（B）比较线粒体和过氧化物酶体（P）的荧光强度分布（红色）和22-NBD-胆固醇的荧光强度（绿色）。22-NBD-胆固醇（绿色）不与线粒体-DsRed-pero标记的过氧化物酶体定位，如MA-10细胞系中的小高强度点（红色）所示。22-NBD-胆固醇和过氧化物酶体的荧光强度不相关的区域用红星标记。（C） 22-NBD-胆固醇（绿色）与过氧化物酶体标记物DsRed-pero（红色）的显色。图像右侧的面板显示了具有重叠绿色和红色通道、仅绿色通道和仅红色通道（从上到下）的高亮区域。（D） 22 NBD胆固醇（绿色）与线粒体标记TSPO DsRed（红色）的共定位。图像右侧的面板显示了具有重叠绿色和红色通道、仅绿色通道和仅红色通道（从上到下）的高亮区域。

**图2。小鼠氨基酸预测序列的序列比对与分析*Scp2系列*人类的基因和亚型1和2Scp2系列基因。**
序列比对表明*Scp2系列*基因编码SCPX和前SCP2蛋白，这两种蛋白都包含SCP2蛋白质或C末端结构域的序列。预测的线粒体靶向序列（有丝分裂或预序列）、过氧化物酶体靶向PTS1信号（PTS1[P]）以及SCPX和SCP2中L/V-（X）1-5-Y-（X。红色向上箭头表示预测的SCP2序列的开始（GenBank ID:M62361用于小鼠，M55421用于人类），包含虚线方框中突出显示的拟议的mito-seq。

**图3。低转录表达*Scp2系列*MA-10细胞系中的基因。**
（A） RNA-Seq数据表明*Scp2系列*和*Scpx公司*转录物在MA-10细胞系中具有低表达。（B）在控制基因座没有发现*Scp2d1号机组*基因，在RNA-seq中用作阴性对照。（C）详细查看*Scp2系列*该基因显示该外显子的低表达水平，并说明B2衍生的启动子正好位于该基因之前。（D）详细查看*Scpx公司*显示该外显子的低表达水平。

**图4。使用SCPX和SCP2特异性抗体对小鼠睾丸组织进行免疫荧光染色冰冻切片。**
该分析旨在研究SCPX和SCP2在野生型小鼠睾丸中的内源性分布。（A–B）SCPX在小鼠睾丸的间质结缔组织中高度表达，该区域富含睾丸间质细胞，但在曲精管的生殖细胞中不表达。（C–D）SCP2与SCPX的分布相同，但表达水平较低。比例尺，50μm。

**图5。MA-10细胞内源性SCPX和SCP2蛋白的双重免疫荧光染色和免疫印迹分析。**
（A） MA-10细胞（红色）、PMP70（过氧化物酶体标记蛋白，绿色）和VDAC1（线粒体标记蛋白，蓝色）内源性SCPX的双重免疫荧光染色。用DAPI（涂成绿色）对细胞核进行复染。比例尺，5μm。（B） MA-10细胞裂解物亚细胞组分中内源性SCPX的免疫印迹分析。COXIV用作线粒体标记蛋白，GAPDH用作全细胞裂解物负荷控制。M、蛋白质标记，以kDa表示；全细胞裂解液总量；细胞、胞质部分；线粒体富集组分。（C） MA-10细胞（红色）、PMP70（涂成绿色）和VDAC1（涂成绿色）中内源性SCP2的双重免疫荧光染色。nNucleus用DAPI（涂成绿色）复染。比例尺，5μm。（D） MA-10细胞裂解物亚细胞组分中内源性SCP2的免疫印迹分析。VDAC1用作线粒体标记蛋白，GAPDH用作全细胞裂解物负荷控制。（E–F）对分离的MA-10亚细胞组分进行免疫印迹分析，确定线粒体基质蛋白HSP60（E）和过氧化物酶体基质蛋白过氧化氢酶（CAT）（F）。GAPDH用作加载控制。M、蛋白质标记，以kDa表示；全细胞裂解物总量；细胞、细胞溶质组分；线粒体富集组分。

**图6。通过共焦激光显微镜对MA-10细胞中SCPX、SCP2和mito-DsRed-pero荧光融合蛋白的亚细胞定位进行活体细胞成像。**
（A–H）ECFP–SCPX（A–D）和ECFP-SCP2（E–H）融合蛋白与mito-DsRed-pero共转染。过氧化物酶体和线粒体双重标记物。重叠表明ECFP–SCPX和ECFP-SCP2蛋白在过氧化物酶体中的定位（如白色箭头所示）。比例尺，5μm。（I–J）SCPX-ECFP（I）和SCP2-ECFP（J）蛋白与mito-DsRed-pero共转染。当过氧化物酶体靶向信号被阻断时，SCPX–ECFP和SCP2-ECFP在细胞质中广泛分布，SCP2–ECFPs也分布在细胞核中。比例尺，2μm。（K）使用Hoechst 33342进行核酸染色，单独转染ECFP-N1载体。比例尺，5μm。（L–M）使用SCPX和SCP2特异性抗体对MA-10细胞中的内源性SCPX和SCP2进行免疫荧光染色，其中SCP2的核染色由白色箭头指示。（N）丝裂原-DsRed-pero荧光融合蛋白与过氧化物酶体膜标记AmCyan-Pex11α的克隆化，除了线粒体定位外，还表明丝裂原DsRed-per的过氧化物酶定位。

**图7。SCPX和SCP2的前序列在线粒体靶向中没有作用。**
（A） SCPX（SCPX-mito）和SCP2（SCP2-mito）的预测线粒体靶向序列与已知线粒体蛋白ACBD2（ACBD2-mito）的序列比对。（B-E）用ACBD2-mito-DsRed作为阳性对照（红色），对SCPX-mito-EGFP（B-C）和SCP2-mito-EGFP（D-E）荧光融合蛋白（绿色）的亚细胞定位进行活细胞成像。白色箭头，表示B和D中未染色的线粒体，C和E中分别用ACBD2-mito-DsRed染色的线粒体。比例尺，5μm。

**图8。小鼠SCP2结构域的同源性建模以及SCP2与其潜在配体胆固醇（Chol）和22-NBD-胆固醇（22-NBD-Chol）的分子对接研究。**
（A–B）利用基于兔SCP2的X射线晶体学结构的同源模型进行分子对接研究（PBD:1C44）。（C–D）使用基于人类SCP2核磁共振结构的同源模型进行分子对接研究（PBD:1QND）。（E–F）使用基于人类过氧化物酶体多功能酶2型（MFE-2；PDB:1IKT）配体结合SCP2样结构域的X射线晶体学结构的同源模型进行分子对接研究。指示了胆固醇（Chol）、22NBD胆固醇（22NBD-Chol）、负责结合胆固醇的Trp70残基以及过氧化物酶体靶向PTS1信号（-AKL）。Autodock-Vina计算的对接亲和力（kcal/mol）在每个相应构象下显示。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

家蚕固醇载体蛋白x/固醇载体蛋白质2（SCPx/SCP2）基因的克隆与鉴定。
龚杰、侯毅、查芳、鲁C、朱毅、夏奎。龚J等。 DNA序列。2006年10月；17(5):326-33. doi:10.1080/10425170600886706。 DNA序列。2006 PMID：17343205
固醇载体蛋白2（非特异性脂质转运蛋白）在融合蛋白和过氧化物酶体中的新进展。
Bun-ya M、Muro Y、Niki T、Kondo J、Kamiryo T。 Bun-ya M等人。细胞生物化学与生物物理学。2000;32弹簧：107-16。doi:10.1385/cbb:32:1-3:107。细胞生物化学与生物物理学。2000 PMID：11330036 审查。
固醇载体蛋白X是一种具有内源性固醇载体和脂质转移活性的过氧化物酶体3-氧酰基辅酶A硫解酶。
西多夫·U、布莱斯·P、恩格尔·T、施拉格·K、阿斯曼·G。 Seedorf U等人。生物化学杂志。1994年8月19日；269(33):21277-83. 生物化学杂志。1994 PMID：8063752
鸡固醇载体蛋白2/固醇载体蛋白质x:cDNA克隆揭示了结构和调控表达的进化保护。
Pfeifer SM、Sakuragi N、Ryan A、Johnson AL、Deeley RG、Billheimer JT、Baker ME、Strauss JF第三。 Pfeifer SM等人。生物化学与生物物理学Arch Biochem Biophys。1993年7月；304(1):287-93. doi:10.1006/abbi.1993.1351。生物化学与生物物理学Arch Biochem Biophys。1993 PMID：8323294
甾醇载体蛋白2：在类固醇激素合成中的作用？
Pfeifer SM、Furth EE、Ohba T、Chang YJ、Rennert H、Sakuragi N、Billheimer JT、Strauss JF 3rd。 Pfeifer SM等人。类固醇生物化学分子生物学杂志。1993年12月；47(1-6):167-72. doi:10.1016/0960-0760（93）90071-4。类固醇生物化学分子生物学杂志。1993 PMID：8274432 审查。

查看所有类似文章

引用人

纳米孔测序揭示了冷激活小鼠棕色脂肪组织转录组的复杂性。
Engelhard CA、Khani S、Derdak S、Bilban M、Kornfeld JW。 Engelhard CA等人。 iScience。2023年6月23日；26(8):107190. doi:10.1016/j.sci.2023.107190。eCollection 2023年8月18日。 iScience。2023 PMID：37564700 免费PMC文章。
甾醇载体蛋白2：动脉粥样硬化发病机制中的一个有希望的靶点。
Xu C，Li H，Tang CK。徐C等。基因疾病。2022年1月10日；10(2):457-467. doi:10.1016/j.gendis.2021.2.007。电子收款2023年3月。基因疾病。2022 PMID：37223526 免费PMC文章。审查。
STAR和SCP2/SCPx在胆固醇和其他脂质转运中的作用。
加拉诺M、维努戈帕尔S、帕帕佐普洛斯V。 Galano M等人。国际分子科学杂志。2022年10月11日；23(20):12115. doi:10.3390/ijms23212115。国际分子科学杂志。2022 PMID：36292972 免费PMC文章。审查。
SCP2变异与脂质代谢改变、脑干神经变性和睾丸缺陷有关。
Galano M、Ezzat S、Papadopoulos V。 Galano M等人。人类基因组学。2022年8月22日；16(1):32. doi:10.1186/s40246-022-00408-w。人类基因组学。2022 PMID：35996156 免费PMC文章。
LINC00261升高通过靶向FOXP3上调SCP2抑制胰腺癌细胞的血管生成和细胞周期进展。
邹J、裴X、邢D、吴X、陈S。邹杰等。《细胞分子医学杂志》，2021年10月；25（20）：9826-9836。doi:10.1111/jcmm.16930。Epub 2021年9月19日。《细胞分子医学杂志》2021。 PMID：34541823 免费PMC文章。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Seedorf U，Assmann G.（1991）大鼠肝脏固醇载体蛋白2 cDNA的克隆、表达和核苷酸序列。生物化学杂志266:630-636。-公共医学
1. Ohba T，Holt JA，Billheimer JT，Strauss JF III.（1995）人类固醇载体蛋白x/固醇载体蛋白质2基因有两个启动子。生物化学——US 34:10660–10668。-公共医学
1. Atshaws BP，Petrescu AD，Starodub O，Roths JB，Kier AB，Schroeder F.（1999）转染小鼠L细胞成纤维细胞中58kDa固醇载体蛋白-2/3-氧酰基-CoA硫酶的表达和细胞内处理。《脂质研究杂志》40:610-622。-公共医学
1. Moncecchi D、Murphy EJ、Schroeder DP。（1996）小鼠L细胞成纤维细胞中甾醇载体蛋白-2的表达改变胆固醇摄取。BBA-血脂测定仪1302:110–116。-公共医学
1. Schroeder F、Myers-Payne SC、Billheimer JT、Wood WG。（1995）探索脂肪酸和固醇载体蛋白质的配体结合位点：乙醇的影响。生物化学美国34:111919–11927。-公共医学

出版物类型

行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动
行动

赠款和资金

MOP152983/加拿大卫生研究院/加拿大

LinkOut-更多资源

[1] Seedorf U，Assmann G.（1991）大鼠肝脏固醇载体蛋白2 cDNA的克隆、表达和核苷酸序列。生物化学杂志266:630-636。-公共医学

[2] Seedorf U，Assmann G.（1991）大鼠肝脏固醇载体蛋白2 cDNA的克隆、表达和核苷酸序列。生物化学杂志266:630-636。-公共医学

[3] Ohba T，Holt JA，Billheimer JT，Strauss JF III.（1995）人类固醇载体蛋白x/固醇载体蛋白质2基因有两个启动子。生物化学——US 34:10660–10668。-公共医学

[4] Ohba T，Holt JA，Billheimer JT，Strauss JF III.（1995）人类固醇载体蛋白x/固醇载体蛋白质2基因有两个启动子。生物化学——US 34:10660–10668。-公共医学

[5] Atshaws BP，Petrescu AD，Starodub O，Roths JB，Kier AB，Schroeder F.（1999）转染小鼠L细胞成纤维细胞中58kDa固醇载体蛋白-2/3-氧酰基-CoA硫酶的表达和细胞内处理。《脂质研究杂志》40:610-622。-公共医学

[6] Atshaws BP，Petrescu AD，Starodub O，Roths JB，Kier AB，Schroeder F.（1999）转染小鼠L细胞成纤维细胞中58kDa固醇载体蛋白-2/3-氧酰基-CoA硫酶的表达和细胞内处理。《脂质研究杂志》40:610-622。-公共医学

[7] Moncecchi D、Murphy EJ、Schroeder DP。（1996）小鼠L细胞成纤维细胞中甾醇载体蛋白-2的表达改变胆固醇摄取。BBA-血脂测定仪1302:110–116。-公共医学

[8] Moncecchi D、Murphy EJ、Schroeder DP。（1996）小鼠L细胞成纤维细胞中甾醇载体蛋白-2的表达改变胆固醇摄取。BBA-血脂测定仪1302:110–116。-公共医学

[9] Schroeder F、Myers-Payne SC、Billheimer JT、Wood WG。（1995）探索脂肪酸和固醇载体蛋白质的配体结合位点：乙醇的影响。生物化学美国34:111919–11927。-公共医学

[10] Schroeder F、Myers-Payne SC、Billheimer JT、Wood WG。（1995）探索脂肪酸和固醇载体蛋白质的配体结合位点：乙醇的影响。生物化学美国34:111919–11927。-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

睾丸间质细胞内胆固醇转运中的非特异性脂质转运蛋白甾醇载体蛋白-2

附属公司

睾丸间质细胞细胞内胆固醇运输中的类固醇载体蛋白-2，一种非特异性脂质转移蛋白

作者

附属公司

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医疗

分子生物学数据库

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

医疗

分子生物学数据库