跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

HTTP服务器

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年8月18日;35(33):4379-87.
doi:10.1038/onc.2015.507。 Epub 2016年1月25日。

VEGF-A通过神经纤维蛋白-1发挥作用,提高表皮癌干细胞存活率,并形成侵袭性和高血管化肿瘤

附属公司

VEGF-A通过神经纤维蛋白-1发挥作用,提高表皮癌干细胞存活率,并形成侵袭性和高血管化肿瘤

D格伦等。 癌基因. .

摘要

与非干细胞癌细胞相比,我们发现鳞状细胞癌中表皮癌干细胞(ECS细胞)的有限亚群形成了快速生长、侵袭性和高度血管化的肿瘤。这些ECS细胞生长为非附着的球体,迁移和侵袭增强。我们表明,ECS细胞产生的血管内皮生长因子(VEGF)-A是维持这种表型所必需的,因为VEGF-A基因表达的下调或VEGF-A-激活抗体的治疗会降低这些反应。此外,贝伐单抗治疗可减少肿瘤的血管形成和生长。令人惊讶的是,VEGF-A通过与VEGF受体相互作用而发挥作用的经典机制并不介导这些事件,因为这些细胞缺乏VEGFR1和VEGFR2。相反,VEGF-A通过神经纤维蛋白-1(NRP-1)共受体发挥作用。NRP-1的敲除抑制ECS细胞球体的形成、侵袭和迁移,并减弱肿瘤的形成。这些研究表明,VEGF-A通过与NRP-1的相互作用触发细胞内事件,导致ECS细胞存活,并形成侵袭性、侵袭性和高血管化肿瘤。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
表皮癌干细胞(ECS)形成大且高度血管化的肿瘤。()SCC-13细胞作为单层(附着)或球形(未附着)培养物生长的图像。(b条)干细胞标记物在单层细胞和球形细胞中的表达。细胞培养10天,制备总提取物,用于免疫印迹检测指示蛋白。在三个独立的实验中都观察到了类似的结果。(c(c),)肿瘤形态学和组织学。在NSG小鼠的每个前翼注射非干细胞癌细胞和ECS细胞(10万/注射部位)。4周后,采集肿瘤并拍照。原发肿瘤石蜡包埋、切片并用H&E或检测CD31(内皮细胞)和K5(上皮细胞)抗体染色。箭头表示血管,条形=125微米。(e(电子))CD31分布的ImageJ量化。使用ImageJ量化CD31分布,并表示为总面积的百分比。数值为平均值±标准误差。,n个=6,星号表示显著差异,P(P)<0.05. 箭头表示CD31染色。((f))CD31水平。对非干细胞癌(单层)和ECS细胞(球形)衍生肿瘤的肿瘤提取物进行电泳,以检测CD31的免疫印迹。()K5和人核抗原(HNA)的分布。箭头显示HNA和K5阳性的人类上皮性肿瘤细胞。请注意,包括血管在内的间充质细胞为K5和HNA阴性。
图2
图2
VEGF-A在ECS细胞源性肿瘤中的血管生成活性。()ECS细胞肿瘤提取物刺激血管形成。从非干细胞癌细胞或ECS细胞衍生肿瘤中制备提取物,并将300μg裂解物与HUVEC培养物孵育18 h。收集图像(左侧面板)并分析以检测连接、节段和节点形成(右侧面板)。(b条)显示通过ImageJ分析面板中图像检测到的连接、分段和节点频率的曲线图. (c(c))抗VEGF-A抑制血管形成。ECS细胞肿瘤裂解物(300μg)用0或10μg/ml抗VEGF-A处理,然后在HUVEC分析中测试刺激血管形成的能力。数值为平均值±标准误差。,n个=3,星号表示显著差异,P(P)<0.05. ()VEGF信号蛋白在肿瘤中的表达。制备肿瘤提取物用于免疫印迹检测指示蛋白。(e(电子))肿瘤中mRNA编码VEGF信号蛋白的水平。从非肿瘤和ECS细胞源性肿瘤中分离出RNA,用于qRT-PCR测量mRNA编码的血管生成信号蛋白。数值为平均值±标准误差。,n个=3,星号表示显著差异,P(P)<0.05. ((f),)贝伐单抗抑制肿瘤形成。将ECS细胞(10万)注射到NSG小鼠的两个前侧,用0或10 mg/kg贝伐单抗开始治疗,并监测肿瘤大小和形态。数值为平均值±标准误差。,n个=6,星号表示有显著差异,P(P)<0.05. 肿瘤图像来自于4周的肿瘤。(小时)ECS细胞肿瘤中CD31的免疫印迹检测。将ECS细胞(10万)注射到NSG小鼠的每个前侧腹,并以10 mg/kg体重的水平每周腹腔注射三次贝伐单抗。4周后,采集肿瘤并制备提取物以检测CD31。
图3
图3
VEGF-A信号蛋白与ECS细胞功能的控制。(,b条)反VEGF-A对球体形成的影响。将SCC-13细胞以40000个细胞/孔接种在超低附着板中,接种在含有10μg/ml抗VEGF或对照IgG的球形培养基中。3天后,分析球体数量和大小分布,并表示为平均值±标准偏差。,n个=4,星号表示显著差异,P(P)<0.05. (c(c),)抗VEGF-A治疗抑制ECS细胞迁移和侵袭。将ECS细胞以汇合密度放置在常规培养板上,然后刮伤以形成均匀的伤口。在受伤时加入抗血管内皮生长因子-A(0或10μg/ml),在0、8和18小时时监测伤口宽度。将ECS细胞接种到基质凝胶层顶部的跨阱室中,加入0或10微克/毫升抗血管内皮细胞生长因子A,并在18小时监测细胞侵袭。星号表示存在显著差异,n个=3中,P(P)<0.05. (e(电子))VEGF-A信号蛋白表达。从指示细胞系的单层培养物中制备提取物,用于指示蛋白质的免疫印迹检测。((f),)ECS细胞球体的形成和迁移需要VEGF-A和NRP-1。用3μg对照组、VEGF-A、VEGFR1-、VEGFR2-或NRP-1-siRNA电穿孔SCC-13单层细胞,并以每孔40000个细胞的速度在超低附着培养皿中电镀成三份,5天后拍摄球体。同时,将电穿孔细胞接种在传统平板的汇合处,允许其附着并使用10μl移液管尖端均匀损伤。添加球形培养基,并在0、16和24小时监测伤口闭合情况(小时)面板中使用的siRNA处理的ECS细胞中VEGF-A和NRP-1敲除的免疫印迹确认(f)我们通常会使VEGF-a水平接近完全降低,NRP-1水平降低50%。
图4
图4
EG00229抑制ECS细胞功能和肿瘤形成。()EG00229对ECS细胞球体形成的影响。将SCC-13细胞以每孔40000个细胞的速度接种在含有0-100μM EG00229的球形培养基中的超低附着板中。3天后,分析球体数,并将其表示为平均值±s.e.m。,n个=3中,P(P)<0.05. (b条)EG00229对ECS细胞基质胶侵袭的影响。ECS细胞在0或100μM EG00229存在下接种到基质凝胶层顶部的跨阱室中,并在18小时时监测侵袭。数值为平均值±标准偏差,星号表示显著差异,n个=3中,P(P)<0.05. (c(c)小时)EG00229抑制肿瘤形成和血管化。ECS细胞通过10天的球状生长得到富集,并将10万个细胞注射到NSG小鼠的每个前腹。用0或10 mg EG00229/kg体重的小鼠进行不同时间的治疗(c(c))或各种剂量的EG00229持续4周()每周注射三次IP。用卡尺监测肿瘤形成情况,并在第4周采集时拍摄肿瘤照片(e(电子),10 mg/kg体重)。数值为平均值±标准误差。,n个=6,星号表示显著差异,P(P)<0.05. EG00229处理对动物体重没有影响。切片用抗CD31染色并用ImageJ处理,染色强度用面积百分比表示((f)). 数值为平均值±标准误差。,n个=6,星号表示显著差异,P(P)<0.05. 肿瘤提取物的免疫印迹证实CD31水平降低(). 三种肿瘤比较中的每一种都观察到了类似的结果。用0或10 mg/kg体重的EG00229处理肿瘤,制备肿瘤切片,然后染色检测CD31(血管化标记物)和角蛋白5(K5,上皮细胞标记物)(小时). 箭头表示CD31-阳性血管。棒=125μm。()NRP-1/VEGF-A相互作用的证据。从SCC-13衍生ECS细胞在裂解缓冲液中制备提取物,用抗NRP-1或抗VEGF-A免疫沉淀200μg提取物,然后进行免疫印迹检测指示的表位。电泳总提取物(25μg)作为对照。在三个实验中观察到类似的结果。

类似文章

引用人

工具书类

    1. 美国癌症协会网站。癌症事实和数字。2010年,网址:网址:http://www.cancer.org/
    1. Bickers DR、Lim HW、Margolis D、Weinstock MA、Goodman C、Faulkner E等。皮肤病的负担:2004年,美国皮肤病学会和皮肤病研究学会的联合项目。美国皮肤病学会杂志。2006;55:490–500.-公共医学
    1. Rogers HW、Weinstock MA、Harris AR、Hinkley MR、Feldman SR、Fleischer AB等。美国非黑色素瘤皮肤癌发病率估计,2006年。Arch Dermatol公司。2010;146:283–287.-公共医学
    1. Pleasance ED、Cheetham RK、Stephens PJ、McBride DJ、Humphray SJ、Greenman CD等。人类癌症基因组体细胞突变的综合目录。自然。2010;463:191–196.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Folkman J.血管生成在肿瘤生长中的作用。塞明癌症生物学。1992;3:65–71.-公共医学

出版物类型

物质