Rapamycin reduces fibroblast proliferation without causing quiescence and induces STAT5A/B-mediated cytokine production

doi:10.1080/19491034.2015.1128610

.2015;6(6):490-506.

doi:10.1080/19491034.2015.1128610。

雷帕霉素降低成纤维细胞增殖而不引起静止，并诱导STAT5A/B介导的细胞因子产生

附属公司

¹a食品和生物制品科学部；萨斯喀彻温大学；加拿大萨斯卡通。
²b环境、健康和社会研究所；布鲁内尔大学；伦敦，Uxbridge，英国。
^三c计算机科学系；萨斯喀彻温大学；加拿大萨斯卡通。
⁴d医学部；呼吸、危重病护理和睡眠医学司；皇家大学医院；加拿大萨斯卡通。
⁵e细胞和系统生物学系；多伦多大学；加拿大多伦多。
⁶f基因组进化和功能分析中心；加拿大安大略省多伦多市多伦多大学。

PMID： 26652669
预防性维修识别码：项目经理4915505
内政部： 10.1080/19491034.2015.1128610

雷帕霉素降低成纤维细胞增殖而不引起静止，并诱导STAT5A/B介导的细胞因子产生

佐伊·吉莱斯皮等。核. 2015.

.2015;6(6):490-506.

doi:10.1080/19491034.2015.1128610。

附属公司

¹a食品和生物制品科学部；萨斯喀彻温大学；加拿大萨斯卡通。
²b环境、健康和社会研究所；布鲁内尔大学；伦敦，Uxbridge，英国。
^三c计算机科学系；萨斯喀彻温大学；加拿大萨斯卡通。
⁴d医学部；呼吸、危重病护理和睡眠医学司；皇家大学医院；加拿大萨斯卡通。
⁵e细胞和系统生物学系；多伦多大学；加拿大多伦多。
⁶f基因组进化和功能分析中心；加拿大安大略省多伦多市多伦多大学。

PMID： 26652669
预防性维修识别码：项目经理4915505
内政部： 10.1080/19491034.2015.1128610

摘要

雷帕霉素是雷帕霉素靶向信号级联的著名抑制剂；然而，该药物对正常原代细胞中全球基因组功能和组织的影响尚不清楚。为了探讨这种影响，我们用雷帕霉素治疗原代人包皮成纤维细胞，观察到细胞增殖减少而不会导致细胞死亡。雷帕霉素处理后，18号和10号染色体被重新定位到与血清还原诱导成纤维细胞进入静止状态相似的位置。尽管在定位上发生了类似的变化，但比较转录组分析表明，雷帕霉素处理的成纤维细胞和静止诱导的成纤维纤维细胞之间的基因表达模式存在显著差异。雷帕霉素治疗诱导细胞因子基因的上调，包括来自白细胞介素（IL）-6信号网络的基因，如IL-8和白血病抑制因子（LIF），而静止的成纤维细胞则表现出参与补体和凝血级联反应的基因的上调。此外，雷帕霉素处理显著上调的基因显示，转录因子信号转导子和转录激活子5A/B（STAT5A/B）的启动子占用率增加。总之，我们证明，用雷帕霉素治疗成纤维细胞可降低增殖，导致染色体区域重新定位，并诱导STAT5A/B介导的细胞因子富集基因表达变化。

关键词：RNA-seq；定子5a/B；原代成纤维细胞；静止；雷帕霉素。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
雷帕霉素降低成纤维细胞增殖率。在正常培养条件下或在500 nM雷帕霉素存在下培养2DD成纤维细胞。监测细胞数量，并计算0小时、72小时、120小时、168小时和216小时（X轴）的群体倍增时间（Y轴）（红色条代表增殖性成纤维细胞，黑色条代表两组经雷帕霉素处理的成纤维细胞）。绘制了对照（红色）和雷帕霉素处理培养物（黑色）的种群加倍总数（Y轴）。数据表示单个生物复制，并重复2次（未显示数据），显示平行趋势。在雷帕霉素培养0h、72h、120h、168h和216h的细胞中免疫标记Ki67（C）。Ki67阳性（Ki67+）和Ki67阴性（Ki67-）细胞显示在面板左侧。Ki67为假绿色。染色质用H33342（蓝色）复染。显示了每个时间点计算的Ki67阳性（%Ki67+，Y轴）细胞百分比（X轴）。误差条表示单个计数的百分比单元格的SEM。比例尺=10μm。

**图2。**
雷帕霉素处理和静止诱导后的染色体重新定域。通过染色体涂片，在增殖（Pro，第一列）、静止（Qui，第二列）和雷帕霉素处理（Rap，第三列）2DD成纤维细胞中鉴定出18号染色体（顶行）、10号染色体（中行）和X号染色体（底行）。红色信号代表已识别的染色体；染色质用H33342（蓝色）反染。所有图像的比例尺=5μm。涂漆后，进行腐蚀分析，以确定染色体在核体积内的位置。核被分成5个同心的区域壳层，壳层1最外层，壳层5最内层。每个特定染色体的图形表示测量的%染色体信号除以每个外壳（Y轴）中的%H33342信号以归一化每个外壳（X轴）中DNA含量的比率。增殖定位由蓝色条表示，红色条表示静止，雷帕霉素处理为灰色。误差条=SEM。双尾Student不等方差检验用于证明染色体定位的显著差异。**表明增殖和静止测量值的p值均≤0.01。*表明只有雷帕霉素在染色体定位上有显著变化表明静态样品和雷帕霉素处理样品之间存在显著差异（p值≤0.01）。还进行了相关计算，以证明样本之间的染色体定位趋势是否相似或不同。18号染色体Pro与Qui R²=−0.83，专业vs.说唱R²=−0.99和Qui vs.Rap R²=0.87。染色体10 Pro vs.Qui R²=0.43，专业vs.说唱R²=0.64和Qui vs.Rap R²=0.95。X染色体：Pro vs.Qui R²=0.84，专业vs.说唱R²=0.98和Qui vs.Rap R²= 0.91.

**图3。**
散点图显示了静止诱导或雷帕霉素处理后的不同转录谱。比较静止和增殖成纤维细胞中转录物丰度的散点图。RNA-seq鉴定的增殖（X轴）和静止（Y轴）成纤维细胞的每个转录物的计数是对数基-2转换的，每个方块代表一个转录物。与增殖样本相比，静止成纤维细胞中的转录物增加或减少≥5倍，标记为红色（A）。灰色方块表示丰度不超过5倍的转录本。RNA-seq鉴定的增殖（X轴）和雷帕霉素处理（Y轴）成纤维细胞的每个转录物的计数是对数基-2转换的，每个方块代表一个转录物。灰色方块表示丰度不超过5倍的转录本。与增殖样本相比，雷帕霉素处理的成纤维细胞中的转录物增加或减少≥5倍，标记为蓝色（B）。面板A中的蓝色方块代表雷帕霉素处理的成纤维细胞中增加和减少≥5倍的转录物，面板B中的红色方块代表静止成纤维细胞增加和减少≤5倍的那些转录物。两个面板中的绿色方块表示在静止诱导和雷帕霉素治疗下，与增殖成纤维细胞相比，转录物增加或减少了≥5倍。红色或蓝色文本突出显示每个散点图中的特定基因。维恩图显示了与增殖成纤维细胞（C）相比，静止（红圈）或雷帕霉素处理（绿圈）成纤维细胞上调（左）或下调（右）的基因数量。重叠区域中的数字表明在静止和雷帕霉素处理的成纤维细胞中改变表达的基因数量。

**图4。**
随着雷帕霉素治疗的作用，IL-6、IL-8和LIF的蛋白水平增加。ELISA分析用于确认雷帕霉素诱导的转录谱增加来自*白介素-6*和*白介素-8克*enes还导致分泌的细胞因子（A）水平增加。对来自增殖细胞（PRO）和5天雷帕霉素处理细胞（RAP）的三个生物复制培养基进行夹心ELISA，并测定IL-6和IL-8的浓度。显示了IL-6（*p=0.006）和IL-8（**p=0.038）的单尾Student t检验的p值。误差条显示了SEM。对来自增殖（PRO）和雷帕霉素处理（RAP）成纤维细胞的等量全细胞蛋白提取物进行LIF蛋白（20KDa）（B）的蛋白凝胶印迹。β-肌动蛋白印迹也被用作负荷控制。分子量（KDa）显示在印迹的右侧。

**图5。**
在对雷帕霉素反应上调的基因中增加STAT5A/（B）启动子占有率，但不增加NFACT2。使用CLOVER，雷帕霉素处理后增加表达的基因的启动子富集在STAT5A/B转录因子结合位点。此装订位置的位置重量矩阵/序列标志如（A）所示。左边的刻度表示每个核苷酸信息含量的对数基-2，底部的刻度表示这些核苷酸在结合位点中的位置。增殖（对照）和雷帕霉素处理（雷帕霉素）成纤维细胞（B）中磷酸化Y694-STAT5A/B（Y694P；红色）的免疫荧光。染色质用H33342（蓝色）复染。比例尺=10μm。使用ChIP分析比较增殖（Pro/蓝色）和雷帕霉素处理（Rap/橙色）样品（C）中STAT5A/B启动子的占有率。给出了分析的启动子（X轴）和报告的输入富集百分比（Y轴）。对于所有ChIP分析，误差条代表SEM，*表示单尾t检验的p值显著富集，≤0.05。ChIP分析STAT5A/B启动子在*SOCS1系列*增殖（Pro）和雷帕霉素处理（Rap）下的基因（D）。维恩图显示了雷帕霉素上调的基因数量（红色；421个基因），这些基因共享STAT5A/B（绿色；143个基因）和NFAT（紫色；345个基因）结合位点（E）。还对NFATC2启动子占用率进行了ChIP分析。比较增殖（Pro/蓝色）和雷帕霉素处理（Rap/橙色）样品。底部给出了分析的启动子和报告的输入富集百分比（F）。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

对雷帕霉素和血清剥夺反应的基因聚集在染色体上，并在局部染色质环境中进行重组。
Belak ZR、Pickering JA、Gillespie ZE、Audette G、Eramian M、Mitchell JA、Bridger JM、Kusalik A、Eskiw CH。 Belak ZR等人。生物化学细胞生物学。2020年4月；98(2):178-190. doi:10.1139/bcb-2019-0096。Epub 2019年9月3日。生物化学细胞生物学。2020 PMID：31479623
NFκB上调葡萄糖转运蛋白3对于雷帕霉素诱导的需氧糖酵解和肿瘤生长的过度活跃哺乳动物靶点至关重要。
查X，胡Z，季S，金F，蒋K，李C，赵P，涂Z，陈X，狄L，周H，张H。查X等。癌症快报。2015年4月1日；359(1):97-106. doi:10.1016/j.canlet.2015.01.001。Epub 2015年1月8日。癌症快报。2015 PMID：25578782
白细胞介素-2家族细胞因子刺激人类T细胞中Stat5转录因子Pro-Ser-Pro基序的磷酸化：抵抗多种丝氨酸激酶途径的抑制。
Nagy ZS、Wang Y、Erwin-Cohen RA、Aradi J、Monia B、Wang LH、Stepkowski SM、Rui H、Kirken RA。 Nagy ZS等人。白细胞生物学杂志。2002年10月；72(4):819-28. 白细胞生物学杂志。2002 PMID：12377952
同时抑制PI3K和mTORC1/mTORC2可通过下调外套细胞淋巴瘤中Mcl-1的表达，克服雷帕霉素诱导凋亡的抵抗。
Müller A、Zang C、Chumduri C、Dörken B、Daniel PT、Scholz CW。 Müller A等人。国际癌症杂志。2013年10月15日；133（8）：1813-24。doi:10.1002/ijc.28206。Epub 2013年6月15日。国际癌症杂志。2013 PMID：23580240
信号转导子和转录激活子5a/b：前列腺癌和乳腺癌的生物标记物和治疗靶点。
Koptyra M、Gupta S、Talati P、Nevalainen MT。 Koptyra M等人。国际生物化学与细胞生物学杂志。2011年10月；43（10）:1417-21。doi:10.1016/j.biocel.2011.06.007。Epub 2011年6月17日。国际生物化学与细胞生物学杂志。2011 PMID：21704724 免费PMC文章。审查。

查看所有类似文章

引用人

局灶性粘附激酶提供了一种可用于提高mTORC1抑制剂疗效的副作用。
Cuellar-Vite L、Weber-Bonk KL、Abdul-Karim FW、Booth CN、Keri RA。 Cuellar-Vite L等人。癌症（巴塞尔）。2022年7月11日；14(14):3374. doi:10.3390/cancers14143374。癌症（巴塞尔）。2022 PMID：35884439 免费PMC文章。
哈斯卡莓酚类亚类对原发性和永生性皮肤成纤维细胞的细胞应力传感有不同影响。
Zehfus LR、Gillespie ZE、Almendáriz-Palacios C、Low NH、Eskiw CH。 Zehfus LR等人。细胞。2021年10月3日；10(10):2643. doi:10.3390/cells10102643。细胞。2021 PMID：34685623 免费PMC文章。
衰老细胞中的mTOR活性和自噬，一种复杂的伙伴关系。
Cayo A、Segovia R、Venturini W、Moore-Carrasco R、Valenzuela C、Brown N。 Cayo A等人。国际分子科学杂志。2021年7月29日；22(15):8149. doi:10.3390/ijms22158149。国际分子科学杂志。2021 PMID：34360912 免费PMC文章。审查。
复制性衰老中的间期染色体：作为衰老生物标志物的染色体定位和衰老细胞中缺乏核电机驱动的染色体重新定位。
Mehta IS、Riyahi K、Pereira RT、Meaburn KJ、Figgit M、Kill IR、Eskiw CH、Bridger JM。 Mehta IS等人。前细胞发育生物学。2021年5月24日；9:640200. doi:10.3389/fcell.2021.640200。eCollection 2021年。前细胞发育生物学。2021 PMID：34113611 免费PMC文章。
通过化学让生活更美好：限制卡路里和限制卡路里模拟物作为促进健康和寿命的工具的最新进展。
Almendáriz-Palacios C、Mousseau DD、Eskiw CH、Gillespie ZE。 Almendáriz-Palacios C等人。国际分子科学杂志。2020年12月3日；21(23):9220. doi:10.3390/ijms21239220。国际分子科学杂志。2020 PMID：33287232 免费PMC文章。审查。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Choi J，Chen J，Schreiber SL，Clardy J.FKBP1 2-雷帕霉素复合物与人FRAP结合域相互作用的结构。科学1996；273:239-41; PMID:8662507；http://dx.doi.org/10.1126/science.273.5272.239-内政部-公共医学
1. Sabers CJ、Martin MM、Brunn GJ、Williams JM、Dumont FJ、Wiederrecht G、Abraham RT。哺乳动物细胞中FKBP12-Rapamycin复合物蛋白片段的分离。生物化学杂志1995；270(2):815-22; PMID:7822316；http://dx.doi.org/10.1074/jbc.270.2.815-内政部-公共医学
1. Brown EJ、Albers MW、Shin TB、Ichikawa K、Keith CT、Lane WS、Schreiber SL。一种被G1阻滞雷帕霉素受体复合物靶向的哺乳动物蛋白质。《科学》1994；369:756-8.-公共医学
1. Kapahi P，Chen D，Rogers AN，Katewa SD，Li PW，Thomas EL，Kockel L.使用TOR，少即是多：保守营养敏感TOR途径在衰老中的关键作用。Cell Metab 2010；11(6):453-65; PMID:20519118；http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2010.05.001-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
1. Andre C，Cota D.将营养感应与代谢同质化耦合：雷帕霉素复合物1通路哺乳动物靶点的作用。2012年营养学学会；71(4):502-10; PMID:22877732；http://dx.doi.org/10.1017/S0029665112000754-内政部-公共医学

出版物类型

行动

MeSH术语

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

物质

行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动
行动

赠款和资金

加拿大卫生研究院/加拿大

LinkOut-更多资源

[1] Choi J，Chen J，Schreiber SL，Clardy J.FKBP1 2-雷帕霉素复合物与人FRAP结合域相互作用的结构。科学1996；273:239-41; PMID:8662507；http://dx.doi.org/10.1126/science.273.5272.239-内政部-公共医学

[2] Choi J，Chen J，Schreiber SL，Clardy J.FKBP1 2-雷帕霉素复合物与人FRAP结合域相互作用的结构。科学1996；273:239-41; PMID:8662507；http://dx.doi.org/10.1126/science.273.5272.239-内政部-公共医学

[3] Sabers CJ、Martin MM、Brunn GJ、Williams JM、Dumont FJ、Wiederrecht G、Abraham RT。哺乳动物细胞中FKBP12-Rapamycin复合物蛋白片段的分离。生物化学杂志1995；270(2):815-22; PMID:7822316；http://dx.doi.org/10.1074/jbc.270.2.815-内政部-公共医学

[4] Sabers CJ、Martin MM、Brunn GJ、Williams JM、Dumont FJ、Wiederrecht G、Abraham RT。哺乳动物细胞中FKBP12-Rapamycin复合物蛋白片段的分离。生物化学杂志1995；270(2):815-22; PMID:7822316；http://dx.doi.org/10.1074/jbc.270.2.815-内政部-公共医学

[5] Brown EJ、Albers MW、Shin TB、Ichikawa K、Keith CT、Lane WS、Schreiber SL。一种被G1阻滞雷帕霉素受体复合物靶向的哺乳动物蛋白质。《科学》1994；369:756-8.-公共医学

[6] Brown EJ、Albers MW、Shin TB、Ichikawa K、Keith CT、Lane WS、Schreiber SL。一种被G1阻滞雷帕霉素受体复合物靶向的哺乳动物蛋白质。《科学》1994；369:756-8.-公共医学

[7] Kapahi P，Chen D，Rogers AN，Katewa SD，Li PW，Thomas EL，Kockel L.使用TOR，少即是多：保守营养敏感TOR途径在衰老中的关键作用。Cell Metab 2010；11(6):453-65; PMID:20519118；http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2010.05.001-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Kapahi P，Chen D，Rogers AN，Katewa SD，Li PW，Thomas EL，Kockel L.使用TOR，少即是多：保守营养敏感TOR途径在衰老中的关键作用。Cell Metab 2010；11(6):453-65; PMID:20519118；http://dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2010.05.001-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[9] Andre C，Cota D.将营养感应与代谢同质化耦合：雷帕霉素复合物1通路哺乳动物靶点的作用。2012年营养学学会；71(4):502-10; PMID:22877732；http://dx.doi.org/10.1017/S0029665112000754-内政部-公共医学

[10] Andre C，Cota D.将营养感应与代谢同质化耦合：雷帕霉素复合物1通路哺乳动物靶点的作用。2012年营养学学会；71(4):502-10; PMID:22877732；http://dx.doi.org/10.1017/S0029665112000754-内政部-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

你的RSS订阅源

雷帕霉素降低成纤维细胞增殖而不引起静止，并诱导STAT5A/B介导的细胞因子产生

附属公司

雷帕霉素降低成纤维细胞增殖而不引起静止，并诱导STAT5A/B介导的细胞因子产生

作者

附属公司

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

其他

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

其他