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.2015年12月1:8:74。
doi:10.3389/fnmol.2015.00074。 电子收集2015。

内皮单核细胞激活多肽Ⅱ诱导自噬对EMAPⅡ联合雷帕霉素抑制人脑胶质母细胞瘤恶性生物学行为的作用

马骏（Jun Ma） 1, 范杰蒙 1, 帅丽 2, 刘立波 1, 李妮·赵 1, 刘云辉 2, 易虎 2, 李珍 2, 姚一龙 2, 卓西 2, 郝腾 2, 易学学 1
附属公司

内皮单核细胞激活多肽II诱导自噬有助于EMAP II和雷帕霉素联合抑制人胶质母细胞瘤的恶性生物学行为

马骏（Jun Ma）等。 前臼齿神经科学. .

摘要

本研究旨在探讨内皮-单核细胞激活肽II（EMAP II）对人胶质母细胞瘤（GBM）细胞和胶质母细胞癌干细胞（GSCs）的作用及其可能的机制。在本研究中，EMAP II抑制了人GBM细胞和GSC的细胞活力并降低了线粒体膜电位，而自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）阻断了这些作用。EMAP II处理后，这些细胞中形成自噬空泡，3-MA阻断了这种现象。此外，还观察到EMAP II引起的微管相关蛋白-1轻链-3（LC3）-II上调和自噬降解底物p62/SQSTM1下调。EMAP-II处理的细胞抑制了PI3K/Akt/mTOR信号通路，PI3K/A kt激动剂胰岛素样生长因子-1（IGF-1）阻断了EMAP II对LC3-II和p62/SQSTM1表达的影响。暴露于EMAP-II的细胞经历了线粒体自噬和内质网应激。此外，EMAP II和雷帕霉素联合使用在体外和体内对GBM细胞和GSC的增殖、迁移和侵袭的抑制作用比单独使用两者更显著。目前的研究表明，EMAP II在人GBM细胞和GSC中的细胞毒性是通过自噬诱导的，伴随着PI3K/Akt/mTOR信号通路、有丝分裂和ER应激的抑制。EMAP II与雷帕霉素联合应用在体内外均能抑制人GBM细胞和GSC的恶性生物学行为。

关键词：EMAP II；内质网应激；PI3K/Akt/mTOR；自噬；有丝分裂；雷帕霉素。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
内皮-单核细胞激活肽II（EMAP II）对人GBM细胞和GSC的影响。（A）EMAP II研究时间表。（B）用0.005 nM、0.05 nM、0.5 nM和5 nM EMAP II处理0.5、1、2、3和6 h后，EMAP II对U87、U118和GSC细胞活力的影响。（C）用0.05 nM EMAP-II处理0.5 h后，EMAP II、3-MA和Z-VAD对U87、U118和GSC细胞活力的影响。（D）流式细胞术JC-1染色显示EMAP II、3-MA和Z-VAD对U87、U118和GSC基质金属蛋白酶的影响。数值表示平均值±SD(n个=5，每个）。∗∗P（P）与对照组相比<0.01，##P（P）与EMAP II组相比<0.01。
图2
图2
EMAP II和3-MA对人GBM细胞和GSC超微结构变化的影响。（A）EMAP II和3-MA对U87、U118和GSC超微结构变化的影响。箭头显示自噬液泡。（B）LC3和LysoTracker Red在U87、U118和GSCs中的共定位。定量了LC3和LysoTracker Red的相对平均光密度，以及LC3和LysoTracker Red的共同定位。图片分别放大(n个=4，每个）。比例尺=20μm。∗∗P（P）与对照组相比<0.01，##P（P）与EMAP II组相比<0.01。
图3
图3
EMAP II对人GBM细胞和GSC中LC3和p62/SQSTM1表达和分布的影响。（A）Western blot分析检测0.005 nM、0.05 nM、0.5 nM和5 nM EMAP II处理后，U87、U118和GSC中LC3-II/LC3-I的表达水平。显示了LC3-II/LC3-I的相对集成密度值（IDV）。（B）用0.05 nM EMAP II处理0.5、1、2、3和6 h，以及用3-MA预处理EMAP II后，进行Western blot分析，检测LC3-II/LC3-I和p62/SQSTM1在U87、U118和GSC中的表达。数值表示平均值±SD(n个=5，每个）。∗∗P（P）与对照组相比<0.01，##P（P）与EMAP II组相比<0.01。（C）用EMAP II单独或EMAP II加3-MA治疗后，观察到U87、U118和GSC中LC3上调和p62/SQSTM1下调。比例尺=20μm。
图4
图4
EMAP II对人GBM细胞和GSC中mTOR、PI3K和Akt表达的影响Western blot分析评估p-PI3K/PI3K、p-PI3K/GAPDH的表达率（A）p-Akt/Akt、p-Akt/GAPDH（B）、p-mTOR/mTOR和p-mTOR/GAPDH（C）在U87、U118和GSC中，用EMAP II处理0.5、1、2、3和6小时。值表示平均值±SD(n个=5，每个）。∗∗P（P）与对照组相比<0.01。
图5
图5
EMAP II和IGF-1对人GBM细胞和GSC中LC3和p62/SQSTM1表达的影响。（A）Western blot分析EMAP II、IGF-1及其联合治疗后，U87、U118和GSC中LC3-II/LC3-I和p62/SQSTM1的表达水平。显示了LC3-II/LC3-I和p62/SQSTM1的IDV。数值表示平均值±SD(n个=5，每个）。∗∗P（P）与对照组相比<0.01，##P（P）与EMAP II组相比<0.01。（B）LC3和p62/SQSTM1在U87、U118和GSC中的分布和表达。比例尺=20μm。
图6
图6
EMAP II诱导人GBM细胞和GSC的有丝分裂。（A）用EMAP II和EMAP II与3-MA联合处理细胞后，LC3和MitoTracker在U87、U118和GSC中的共定位。（B）LC3与MitoTracker共定位的定量分析。图片分别放大(n个=4，每个）。比例尺=20μm。U87中TOMM20和TIMM23表达的Western blot分析（C），U118型（D）和GSC（E）用EMAP II和EMAP II与3-MA联合处理细胞后。数值表示平均值±SD(n个=5，每个）。∗∗P（P）与对照组相比<0.01，##P（P）与EMAP II组相比<0.01。
图7
图7
EMAP II和牛磺脱氧胆酸（TUDC）对人GBM细胞和GSC中UPR相关蛋白表达的影响.U87中GRP78、p-eIF2α、eIF2β和CHOP表达的Western blot分析（A），U118型（B） ，和GSC（C）用EMAP II、TUDC及其联合治疗后。数值表示平均值±SD(n个=5，每个）。∗P（P）<0.05和∗∗P（P）与对照组相比<0.01，##P（P）与EMAP II组相比<0.01。
图8
图8
EMAP II和雷帕霉素对人GBM细胞和GSC的细胞增殖、迁移和侵袭的影响。（A）通过CCK8分析评估U87、U118和GSC的细胞增殖。（B）伤口愈合实验检测U87和U118细胞的迁移。（C）通过跨阱法测量U87、U118和GSC的细胞迁移。（D）通过穿孔法检测U87、U118和GSC的细胞侵袭性。数值表示平均值±SD(n个=5，每个）。∗∗P（P）与对照组相比<0.01；#P（P）与EMAP II组相比<0.05；ΔP（P）与雷帕霉素组相比<0.05。
图9
图9
这个体内EMAPⅡ与雷帕霉素的研究.老鼠的代表性图像（A）和肿瘤（B）从异种移植小鼠中获得，治疗或不治疗18周。（C）裸鼠肿瘤生长曲线。（D）裸鼠肿瘤重量。∗∗P（P）与对照组相比<0.01，#P（P）与EMAP-II组相比<0.05，ΔP（P）与雷帕霉素组相比<0.05。
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