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。2016年2月；13(2):1097-104.
doi:10.3892/mmr.2015.4659。 Epub 2015年12月8日。

异茶碱B通过靶向PI3K/AKT/β-catenin信号抑制ECA-109人食管癌细胞的粘附和侵袭

吉城坦泰 1, 姚张（音） 2, Heng Zhao先生 1
附属公司

异叶黄素B通过靶向PI3K/AKT/β-catenin信号抑制ECA-109人食管癌细胞的粘附和侵袭

吉城坦泰等。 分子医学代表。 2016年2月。

摘要

本研究旨在检测异叶黄素B（HB）对ECA-109人食管癌细胞粘附和侵袭的影响，并探讨其可能的作用机制。采用细胞计数试剂盒8测定细胞活力。用HB（0、10、25和50µM）处理ECA-109细胞24小时后，测定细胞粘附和侵袭。使用蛋白质印迹分析测量磷酸化（p-）ATK和p-磷酸肌醇3-激酶（PI3K）的水平以及β-连环蛋白的蛋白水平。采用逆转录定量聚合酶链反应和western blot分析分别检测E-cadherin、vimentin、snail、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9的mRNA和蛋白表达水平。HB（10、25和50µM）以剂量依赖性方式显著抑制ECA-109人食管癌细胞的粘附和侵袭。p-ATK、p-PI3K和β-catenin的表达水平显著降低。HB处理的ECA-109细胞E-cadherin表达增强，而snail、vimentin、MMP 2和MMP 9的表达水平显著降低。此外，HB抑制了PI3K激活肽诱导的ECA-109细胞的粘附和侵袭，并调节了蛋白质的表达水平。这些结果表明，HB通过介导PI3K/AKT/β-catenin通路和调节粘附和侵袭相关基因的表达水平，有效抑制了人食管癌细胞的粘附和侵袭。

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数字

图1
图1
HB对ECA-109人食管癌细胞增殖的影响。用不同剂量的HB（0、5、10、25、50、100和200）处理细胞µM） 持续12、24和48小时，并进行细胞计数试剂盒8分析以确定增殖情况。数据表示为平均值±标准偏差（n=3）。*P<0.05和**P<0.01与0µM、 12小时；ΔP<0.05和ΔΔP<0.01 vs 0µM、 24小时；$P<0.05 vs 0µM、 48小时。HB，异叶黄素B。
图2
图2
HB对ECA-109人食管癌细胞粘附和侵袭的影响。（A和B）用不同浓度的HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 24h后，用Giemsa染色法测定细胞粘附力。（C和D）用不同浓度的HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 持续24小时，并使用Transwell分析测定细胞侵袭。数据表示为平均值±标准偏差（n=3），*P<0.05和**与对照组相比，P<0.01。放大倍数，×200。HB，异叶黄素B。
图3
图3
HB对ECA-109细胞ATK和PI3K磷酸化的影响。（A和B）用HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 持续6 h，并使用针对所示AKT和p-AKT蛋白的抗体进行蛋白印迹分析。（C和D）用HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 持续6 h，并使用针对所示PI3K和p-PI3K蛋白以及（E和F）β-catenin的抗体进行western blot分析。检测GAPDH作为样品加载的对照。数据表示为平均值±标准偏差（n=6）。*P<0.05和**P<0.01。HB，异叶黄素B；PI3K，磷脂酰肌醇3-激酶；p-磷酸化。
图4
图4
HB对蜗牛、E-cadherin和vimentin表达水平的影响。（A–C）用不同剂量的HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 持续12小时，并进行逆转录定量聚合酶链反应用于mRNA检测。（D和E）用不同剂量的HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 24小时后，使用针对蜗牛、E-cadherin和vimentin蛋白的抗体进行蛋白质印迹分析。还检测到GAPDH作为样品装载的控制。数据表示为平均值±标准偏差（n=6）。*P<0.05和**与对照组相比，P<0.01。HB，异叶黄素B。
图5
图5
HB对MMP-2和MMP-9表达水平的影响。（A） 用HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 持续12 h，采用逆转录定量聚合酶链反应检测MMP 2和MMP 9的mRNA表达水平。（B和C）用HB（0、10、25和50）处理细胞µM） 24小时后，用MMP 2和MMP 9蛋白抗体进行western blot分析。还检测到GAPDH作为样品装载的控制。数据表示为平均值±标准偏差（n=6）。*P<0.05和**与对照组相比P＜0.01。HB，异叶黄素B；基质金属蛋白酶。
图6
图6
HB对PI3K活化肽预处理的ECA-109细胞粘附和侵袭的影响。（A和B）细胞用740Y-P预处理3 h，然后用HB（25µM） 用Giemsa染色法测定细胞粘附力。（C和D）使用Transwell分析测定细胞侵袭。数据表示为平均值±标准偏差（n=3）。*P<0.05和**与对照组相比，P<0.01；##与740Y-P相比，P<0.01。放大倍数，×200。HB，异叶黄素B；PI3K，磷脂酰肌醇3-激酶。
图7
图7
HB对用PI3K激活肽预处理的ECA-109细胞中蛋白质水平的影响。（A–C）细胞用740Y-P预处理3 h，然后用HB（25µM） 6 h后，用western blot分析测定p-AKT、AKT和β-catenin的表达水平。（D–F）细胞用740Y-P预处理3 h，然后用HB（25µM） 用western blot分析测定蜗牛、E-cadherin、波形蛋白、MMP2和MMP9的表达水平。GAPDH也被检测作为样品加载的对照。数据表示为平均值±标准偏差（n=3）。*P<0.05和**与对照组相比，P<0.01；##P<0.01，vs.740Y-P.HB，异叶黄素B；PI3K，磷脂酰肌醇3-激酶；基质金属蛋白酶；p-磷酸化。
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