The Increased Expression of Connexin and VEGF in Mouse Ovarian Tissue Vitrification by Follicle Stimulating Hormone

doi:10.1155/2015/397264

.2015:2015:397264.

doi:10.1155/2015/397264。 Epub 2015年10月11日。

卵泡刺激激素诱导小鼠卵巢组织玻璃化中连接蛋白和血管内皮生长因子表达的增加

兖州杨¹, 陈杰（音译）², 郝武¹, 贝秀英¹, 青昌¹, 马文治¹, 马惠明¹, 长春黑¹, 郑晓敏¹, 蔡玉芳¹, 赵成军¹, 贾瑜¹, 王燕蓉（Yanrong Wang）¹

附属机构

¹宁夏医科大学组织胚胎学系，宁夏生殖与遗传学教育部重点实验室，银川750004。
²内蒙古医科大学人体解剖学系，呼和浩特010010，中国。

采购管理信息： 26539488
PMCID公司： PMC4620037型
内政部： 10.1155/2015/397264

卵泡刺激激素诱导小鼠卵巢组织玻璃化中连接蛋白和血管内皮生长因子表达的增加

兖州杨等。生物识别识别. 2015.

.2015:2015:397264.

doi:10.1155/2015/397264。 Epub 2015年10月11日。

作者

兖州杨¹, 陈杰（音译）², 郝武¹, 贝秀英¹, 青昌¹, 马文治¹, 马惠明¹, 长春黑¹, 郑晓敏¹, 蔡玉芳¹, 赵成军¹, 贾瑜¹, 王燕蓉（Yanrong Wang）¹

附属机构

¹宁夏医科大学组织胚胎学系，宁夏生殖与遗传学教育部重点实验室，银川750004。
²内蒙古医科大学人体解剖学系，呼和浩特010010，中国。

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摘要

卵巢玻璃化冷冻过程中的冷冻损伤和卵巢移植过程中的缺血/再灌注导致卵巢滤泡损伤。适当的FSH在卵泡发育过程中起着重要的抗凋亡作用。因此，本研究在小鼠卵巢玻璃化冷冻保存过程中，向培养基中注入0.3 IU/mL FSH，以确定FSH在卵巢玻璃化和无血管移植中的作用。结果表明，Cx37、Cx43、凋亡分子caspase-3和血管生成分子VEGF的表达通过免疫组织化学、western blotting和实时荧光定量PCR证实，结果表明，FSH通过上调Cx37、Cx43、VEGF和VEGF受体2的表达，而下调caspase-3的表达，显著增加了玻璃化/热处理卵巢中形态正常卵泡的数量。此外，对玻璃化/加热后的卵巢进行移植，并对相关生育力进行分析，结果表明FSH给药组的生育力、新生血管生成和卵泡储备显著增加。综上所述，在卵巢玻璃化冷冻保存期间给予0.3 IU/mL FSH，可以通过上调Cx43、Cx37和VEGF/VEGFR2及其抗凋亡作用，维持卵巢玻璃化保存期间的卵巢存活，并增加无血管移植的血供。

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数字

图1
正常卵泡的定量。与CG和NG-FSH组相比，OG-FSH各组卵巢组织的形态结构保持完整，正常卵泡的百分比显著高于其他组(*P（P）*<0.05）（图1）。（a） –（e）HE染色结果。（a） CG（新鲜对照组）。（b） NG-FSH（卵巢玻璃化冷冻期间未使用FSH）。（c） OG-FSH（卵泡刺激素在卵巢玻璃化冷冻期间给药）。（d） EG-FSH（FSH在卵巢玻璃化冷冻的早期过程中给药）。（e） LG-FSH（FSH在卵巢玻璃化冷冻的后期给药）。PF表示原始卵泡；P表示初级卵泡；S表示次级卵泡（S）。（f）不同组正常卵巢卵泡的定量。不同的字母表示差异显著；相同的字母表示没有区别。

图2
TUNEL检测不同组细胞凋亡。TUNEL结果显示，凋亡主要发生在原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中，而原始卵泡中凋亡较少。TUNEL结果表明，CG、OG-FSH、EG-FSH和LG-FSH组的卵巢凋亡率显著低于NG-FSH。*表明与其他组相比存在统计学上的显著差异。（a）重心。（b） NG-FSH公司。（c） OG-FSH公司。（d） EG-FSH.（EG-FSH）。（e） LG-FSH公司。（f）阴性对照。（g）凋亡细胞分析。PF表示原始卵泡；P表示初级卵泡；S表示次级卵泡（S）。

图3
凋亡标志物caspase-3的检测。（a） –（f）使用免疫组织化学法定位凋亡标记活性caspase-3。凋亡分子标记活性caspase-3主要定位于颗粒细胞和卵母细胞，特别是初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡。（a）重心。（b） NG-FSH公司。（c） OG-FSH公司。（d） EG-FSH.（EG-FSH）。（e） LG-FSH公司。（f）阴性对照。（g） Caspase-3蛋白表达。Caspase-3蛋白在CG、OG-FSH、EG-FSH，LG-FSH和NG-FSH组中的表达。不同的字母表示显著差异；相同的字母表示没有差异。

图4
检测Cx43表达。（a） –（f）不同组间卵巢细胞中Cx43的定位。（a）重心。（b） NG-FSH公司。（c） OG-FSH。（d） EG-FSH.（EG-FSH）。（e） LG-FSH公司。（f）阴性对照。（g） -（h）Cx43 mRNA和蛋白表达。（g） CG、OG-FSH、EG-FSH，LG-FSH和NG-FSH组中Cx43 mRNA的表达。（h） CG、OG-FSH、EG-FSH，LG-FSH和NG-FSH组中的Cx43蛋白表达。不同的字母表示显著差异；相同的字母表示没有差异。

图5
检测Cx37表达。（a） –（f）不同组间卵巢细胞中Cx37的定位。（a）重心。（b） NG-FSH公司。（c） OG-FSH公司。（d） EG-FSH.（EG-FSH）。（e） LG-FSH公司。（f）阴性对照。（g） CG、OG-FSH、EG-FSH，LG-FSH和NG-FSH组中Cx37 mRNA的表达。（h） CG、OG-FSH、EG-FSH，LG-FSH和NG-FSH组的Cx37蛋白表达。不同的字母表示显著差异；相同的字母表示没有差异。

图6
检测VEGF mRNA和VEGF及VEGFR2蛋白的表达。（a） VEGF mRNA表达结果。（b） VEGF蛋白表达结果。（c） VEGFR2蛋白表达结果。不同的字母表示显著差异；相同的字母表示没有差异。

图7
卵巢形态48 移植后h。CG和OG-FSH的卵巢形态保持完整，但NG-FSH卵巢形态显示卵泡稀少，卵巢基质分散。（a）重心。（b） NG-FSH公司。（c） OG-FSH公司。红色箭头表示卵巢移植物；蓝色箭头表示肾组织。

图8
使用血管灌注检测新生血管生成。绿色荧光表示新生血管生成（a）CG。（b） NG-FSH公司。（c） OG-FSH公司。（d） –（f）与NG-FSH组相比，CG和OG-FSH各组CD31的表达显著增加。（d）重心。（e） NG-FSH公司。（f） OG-FSH公司。（g） –（i）与NG-FSH组相比，CG和OG-FSH各组CD34的表达显著增加。（g）重心。（h） NG-FSH。（i） OG-FSH公司。红色箭头表示卵巢移植物；蓝色箭头表示肾组织。

图9
移植后发情周期的恢复。OG-FSH组移植后发情周期的恢复明显高于NG-FSH鼠表示OG-FSH组-□- 表示NG-FSH组。

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