Suppression of mTOR pathway and induction of autophagy-dependent cell death by cabergoline

doi:10.18632/oncotarget.5744

.2015年11月17日；6（36）：39329-41。

doi:10.18632/目标5744。

卡麦角林抑制mTOR通路并诱导自噬依赖性细胞死亡

邵建林¹, 致根冷², 余杭国², 林才², 于才¹, 李宁¹, 韩冰尚¹, 魏东乐^三, 赵卫国¹, 吴哲宝¹

附属机构

¹上海交通大学医学院瑞金医院神经外科，上海200025。
²温州医科大学第一附属医院神经外科，温州325000，中国。
^三中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所-上海交通大学医学院，上海200025，中国。

采购管理信息： 26513171
PMCID公司： PMC4770775型
内政部： 10.18632/目标5744

卡麦角林抑制mTOR通路并诱导自噬依赖性细胞死亡

邵建林等。 Oncotarget公司. 2015.

.2015年11月17日；6（36）：39329-41。

doi:10.18632/目标5744。

作者

邵建林¹, 致根冷², 余杭国², 林才², 蔡宇¹, 李宁¹, 韩冰尚¹, 魏东乐^三, 赵卫国¹, 吴哲宝¹

附属机构

¹上海交通大学医学院瑞金医院神经外科，上海200025。
²温州医科大学第一附属医院神经外科，温州325000，中国。
^三中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所-上海交通大学医学院，上海200025，中国。

采购管理信息： 26513171
PMCID公司： PMC4770775型
内政部： 10.18632/目标5744

摘要

卡麦角林（CAB）是治疗泌乳素瘤的一线药物，能有效抑制泌乳素高分泌，缩小肿瘤大小，恢复性腺功能。然而，CAB介导的肿瘤收缩机制尚不清楚。在这里，我们报告了一种新的CAB细胞毒性机制。CAB通过抑制mTOR通路在早期诱导大鼠垂体瘤MMQ和GH3细胞自噬体的形成，导致LC3-I向LC3-II的转化率升高，GFP-LC3聚集，并增加自噬体形成。有趣的是，CAB治疗增加了溶酶体酸化，并导致自溶体内的蛋白水解降解受损。这阻断了自噬通量，导致p62聚集和未消化的自溶体的积累。敲除ATG7、ATG5或Becn1可显著挽救CAB介导的MMQ细胞死亡（p<0.05）。CAB诱导的自噬和自噬流量的阻断参与体内抗肿瘤作用。总之，我们的研究提供了证据，证明CAB同时诱导自噬并抑制自噬流量，导致自噬依赖性细胞死亡。这些发现阐明了CAB作用的新机制。

关键词：自噬细胞死亡；自噬通量；自噬；卡麦角林；催乳素瘤。

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利益冲突声明

利益冲突

没有披露潜在的利益冲突。

数字

**图1。CAB诱导凋亡和非凋亡细胞死亡**
**A–B类。**通过MTS分析测定细胞存活率。**C、。**用CAB处理MMQ和GH3细胞，通过Annexin V-FTIC和PI双重染色进行凋亡检测。**D–E类。**如图所示，用CAB处理MMQ和GH3细胞，并使用抗胱天蛋白酶-3、PARP和GAPDH的抗体通过蛋白质印迹分析总蛋白。**F、。**在不同浓度的Z-VAD-FMK存在或不存在的情况下，用CAB处理MMQ和GH3细胞48小时，并用MTS测定细胞存活率。**G.公司。**放大的透射电子显微镜（TEM）图像；boxes显示，经CAB处理48小时的MMQ细胞出现自噬空泡，细胞死亡形态伴随着细胞质中大规模自噬的空泡，没有染色质凝集。

**图2。CAB抑制AKT/mTOR通路**
**答：。**用识别p-mTOR（Ser 2448）、mTOR、p-4EBP1（Thr37/46）、4EBP1、p-p70s6k（Thr389）和p70s6mk的抗体对CAB处理的GH3和MMQ细胞裂解物进行印迹。使用小鼠抗GAPDH抗体作为负载对照。印迹是三个独立实验的代表。B。用或不用雷帕霉素处理CAB的MMQ细胞中p-mTOR、p-4EBP1和GAPDH的免疫印迹分析。**C、。**MMQ细胞在有或无雷帕霉素（100 nM）的情况下用CAB处理24小时，细胞存活率由MTS测定。

**图3。CAB诱导自噬**
**答：。**在不同时间点进行CAB治疗前后GH3和MMQ细胞LC3-I和LC3-II的免疫印迹分析。B。共聚焦显微镜观察到，24小时CAB治疗诱导GH3-GFP-LC3（左面板）和MMQ-GFP-LC3（右面板）细胞中膜相关脂质LC3-II的间断分布。比例尺代表10μm。直方图显示了计数50个细胞（平均值±标准偏差）的多个实验的LC3点。**C、。**经过或不经过24小时CAB处理的GH3和MMQ细胞的电子显微照片。CAB处理细胞的放大图像（底部）表明存在自溶体（右）。直方图显示了计数50个细胞（平均值±标准偏差）的多次实验的自溶体结构。

**图4。CAB阻断自噬通量**
**答：。**在不同时间点进行或不进行CAB处理的MMQ（左图）或GH3（右图）细胞中p62的免疫印迹。B。分析在不同时间点进行或不进行CAB治疗的MMQ（左面板）或GH3（右面板）细胞的p62 mRNA水平。

**图5。CAB损伤自体溶酶体内的溶酶体降解**
**答：。**CAB处理的MMQ（GFP-LC3）细胞用Lysotracker染色。比例尺：5μm。B。在CAB治疗24小时后，用1μM溶菌素传感器绿加载细胞，并用共焦显微镜检查。比例尺：20μm。**C、。**用流式细胞术分析B的样品。D。用DMSO、CAB、BafA1或CAB+BafA1处理的MMQ细胞用1μM赖氨酸传感器Green加载24小时，并通过流式细胞术进行分析。**E.公司。**用DMSO、CAB、BafA1或CAB+BafA1处理的MMQ细胞在24小时内检测细胞增殖。**F、。**用DMSO、CAB、BafA1或CAB+BafA1处理6 h和24 h的MMQ细胞中PARP的免疫印迹分析***第页< 0.001.

**图6。沉默自噬关键基因可挽救CAB诱导的细胞死亡**
**A–D。**在用CAB或DMSO处理之前，用对照（Ctrl）或ATG7 siRNA转染MMQ细胞三天，然后对LC3、p62、PARP和β-微管蛋白进行免疫印迹分析（A）直方图显示在电子显微镜（B）、细胞增殖测定（C）和膜联蛋白-V/PI染色测定（D）中看到的自溶体的平均数量。**E–F。**在用CAB或DMSO处理MMQ细胞之前，用对照（Ctrl）或ATG5或Becn1 siRNA转染MMQ细胞三天，然后进行细胞增殖试验。培养结束时，细胞存活率由CellTiter-Glo测定^®发光细胞活性测定和细胞存活率计算。结果报告为在四个重复中进行的三个独立实验的平均值±SD**第页< 0.01, ***第页< 0.001.

**图7。CAB对MMQ细胞的生长抑制作用体内**
**A–C。**CAB治疗抑制了体内MMQ细胞的肿瘤生长。裸鼠异种移植瘤的代表性图像如图7A所示，肿瘤重量和肿瘤生长曲线分别如图7B和7C所示(n个= 5).D。免疫印迹分析显示肿瘤样本中存在p-4EBP1、p62、LC3和β-微管蛋白。蛋白质代表五种肿瘤组织的平均值。

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[7] Wu ZB、Yu CJ、Su ZP、诸葛QC、Wu JS、Zheng WM。溴隐亭治疗累及海绵窦的侵袭性巨大泌乳素瘤：长期随访结果。神经外科杂志，2006年；104:54–61.-公共医学

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