Novel hydroxybutyl chitosan nanoparticles for siRNA delivery targeting tissue factor inhibits proliferation and induces apoptosis in human vascular smooth muscle cells

doi:10.3892/mmr.2015.4461

.2015年12月；12(6):7957-62.

doi:10.3892/mmr.2015.4461。 Epub 2015年10月21日。

靶向组织因子的新型siRNA羟丁基壳聚糖纳米粒抑制人血管平滑肌细胞增殖并诱导其凋亡

康万¹, 李健¹, 李丹（Dan Li）¹, 葛俊华¹, 王云龙², 李学训^三, 郭永芳¹, 郭俊杰¹, 闵冷¹, 潘旺¹, 易安¹

附属公司

¹青岛大学附属医院心内科，中国山东青岛，266003。
²青岛大学附属医院痛风科，山东省代谢病重点实验室，青岛，山东266003，中国。
^三中国山东省烟台市青岛大学附属烟台玉皇顶医院心内科，266000。

PMID： 26497351
预防性维修识别码：项目经理4758285
内政部： 10.3892米/2015.4461

靶向组织因子的新型羟基丁基壳聚糖纳米颗粒抑制人血管平滑肌细胞增殖并诱导细胞凋亡

康万等。分子医学代表. 2015年12月.

.2015年12月；12(6):7957-62.

doi:10.3892/mmr.2015.4461。 Epub 2015年10月21日。

作者

康万¹, 李健¹, 李丹（Dan Li）¹, 葛俊华¹, 王云龙², 李学勋^三, 郭永芳¹, 郭俊杰¹, 闵冷¹, 潘旺¹, 易安¹

附属公司

¹青岛大学附属医院心内科，中国山东青岛，266003。
²青岛大学附属医院痛风科，山东省代谢病重点实验室，青岛，山东266003，中国。
^三中国山东省烟台市青岛大学附属烟台玉皇顶医院心内科，266000。

PMID： 26497351
预防性维修识别码：项目经理4758285
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摘要

壳聚糖是从虾和其他甲壳动物壳中分离出来的一种多糖，已被广泛研究用于DNA和siRNA的传递。尽管已经做出了大量努力来改进壳聚糖作为非病毒基因传递载体，但由于其在生理条件下的溶解度较差，其应用受到了严重限制。羟基丁基壳聚糖（HBC）是一种改性壳聚糖，可在中性条件下溶解。组织因子（TF）通过促进血栓形成和诱导血管平滑肌细胞迁移和增殖参与心血管疾病的发病机制。靶向TF是一种很有吸引力的心血管疾病治疗策略。在本研究中，研究了使用HBC将TF‑siRNAs转移到人脐静脉平滑肌细胞（HUVSMCs）中，并检测了TF敲低对细胞增殖和凋亡的影响。在三聚磷酸缓冲液的帮助下，通过混合HBC和siRNA溶液制备HBC/siRNA纳米颗粒。这些纳米粒子的转染效率为74±2.5%，这是在荧光显微镜下使用荧光标记的siRNA测定的。HBC/TF‑siRNA的传递导致HUVMSCs中细胞和可溶性TF蛋白的生成减少，这分别是使用western blotting和酶联免疫吸附试验进行测量的。如使用细胞计数试剂盒‑8分析评估的那样，TF敲除导致细胞增殖受到抑制，并通过Annexin V‑荧光素异硫氰酸盐染色测定细胞凋亡增加。这些发现表明，HBC可能是一种很有希望的siRNA载体，以TF为靶点的体内HBC/siRNA纳米粒递送可能是治疗心血管疾病的潜在选择，值得进一步研究。

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数字

图1
用HBC/siRNA纳米粒子转染HUVSMC。将绿色荧光染料FAM标记的siRNA与HBC溶液混合以制备HBC/siRNA纳米颗粒。这些纳米粒子用于转染HUVSMC，转染HBC/FAM-siRNA的细胞显示绿色荧光（顶面板）。正如转染后24小时荧光显微镜下观察到的那样，经干扰siRNA处理的细胞没有显示荧光（底图）。这种方法在HUVSMC中的转染效率高达~74%。人脐静脉平滑肌细胞；HBC，羟基丁基壳聚糖。放大倍数，×40。

图2
HBC/TF-siRNA转染后，HUVSMC中TF蛋白的生成受到抑制。（A）酶联免疫吸附试验结果表明，与打乱siRNA细胞相比，PDGF-BB诱导的HUVSMCs可溶性TF的生成在TF-siRNA细胞中显著减少。（B）细胞TF的代表性western blot显示，TF-siRNA，而非干扰siRNA转染，显著抑制PDGF-BB诱导的细胞TF蛋白表达。未转染细胞中TF的细胞水平被任意设置为100%。数据表示为平均值±标准偏差。^*P<0.05和^**与未转染细胞相比，P<0.01。TF，组织因子；人脐静脉平滑肌细胞；羟基丁基壳聚糖；血小板衍生生长因子；N、未感染；S-siRNA，经扰乱的siRNA转染；TF-siRNA，TF-siRNA-转染。

图3
TF敲除抑制HUVSMC的增殖。使用细胞计数试剂盒-8在HBC/siRNA转染48小时后评估细胞增殖。结果表明，转染TF-siRNA而非干扰siRNA可显著抑制HUVSMC增殖。数据表示为平均值±标准偏差。^*与未转染细胞相比，P<0.05。TF，组织因子；人脐静脉平滑肌细胞；羟基丁基壳聚糖；N、未感染；S-siRNA，干扰siRNA-转染；TF-siRNA，TF-siRNA-转染；外径，光密度。

图4
TF siRNA转染增强人脐静脉平滑肌细胞凋亡。转染72小时后，使用Annexin V-FITC染色和流式细胞仪分析检测细胞凋亡。与未转染细胞相比，TF-siRNA转染细胞的凋亡率明显较高。相比之下，打乱siRNA-转染细胞的凋亡水平与未转染细胞相似。流式细胞术在（A）非转染细胞中的代表性点图；（B）打乱siRNA-转染细胞和（C）TF-siRNA转染细胞）。（D）总结了细胞凋亡的数据。数据表示为平均值±标准偏差。^*与未转染细胞相比，P<0.05。TF，组织因子；N、未感染；S-siRNA，干扰siRNA-转染；TF-siRNA，TF-siRNA-转染；PI，碘化丙啶；异硫氰酸荧光素。

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[1] 八角茴香壳聚糖及其作为药用辅料的用途。1998年《药学研究》；15:1326–1331. doi:10.1023/A:1011929016601。-内政部-公共医学

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