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.2015年11月3日;6(34):36126-38。
doi:10.18632/目标5304。

植入脱细胞肾细胞外基质支架的有效生物工程方法

附属公司

脱细胞肾细胞外基质支架植入的有效生物工程方法

永冠等。 Oncotarget公司. .

摘要

终末期肾病(ESRD)是一种肾脏功能的渐进性丧失,其发病率和死亡率都很高。可移植器官很难获得,并且具有高的受体免疫排斥风险。我们打算建立一种更有效、更快的方法来对肾脏支架进行去细胞化和再细胞化,以进行移植和再生。我们用0.5%十二烷基硫酸钠(SDS)使大鼠肾脏脱细胞,同时保留细胞外基质(ECM)3D结构、完整的血管树和生化成分,从而成功制作了肾脏支架。我们用小鼠胚胎干细胞(ES)对肾脏支架进行了细胞培养,然后在肾小球、血管和管状结构中增殖。体内植入后,这些重新细胞化的支架很容易再灌注,能够耐受血压并产生尿液,不会出现血液泄漏。我们的方法可以成功地使大鼠肾脏去细胞化和再细胞化,以生产功能性肾脏ECM支架。这些支架保持其基本成分,保持完整的血管系统,并显示出肾脏再生的前景。

关键词:去细胞化;肾再生;细胞再矿化;脚手架;组织工程。

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利益冲突声明

利益冲突

没有。

数字

图1
图1。大鼠肾脏脱细胞
A和B,在A开始时进行脱细胞的肾脏的大体外观。和结束B。脱细胞过程。肾皮质切片苏木精和伊红染色C、。以及之后D。SDS脱细胞显示支架内没有任何细胞成分,肾小球和管状结构的结构完整。脱细胞肾的透射电镜图像显示细胞成分缺失,基底膜完整性保持。E.公司。正常肾脏;F、。去细胞肾支架。
图2
图2。大鼠肾支架的荧光造影
荧光血管造影表明血管树通过其层次结构得到了很好的表示。以0.5 ml/min的速度灌注对比剂。A–D。显示时间为0秒、30秒、60秒、90秒的图像。
图3
图3。ECM蛋白的定位
尸体大鼠肾脏切片(A&C)和脱细胞支架(B&D)的免疫组织化学染色显示IV型胶原(A&B)和纤维连接蛋白(C&D)分布。
图4
图4。DNA和胶原蛋白含量的定量分析
尸体和去细胞大鼠肾组织中DNA和总胶原蛋白的生化定量显示,灌注去细胞后DNA含量减少,胶原蛋白保存。数据显示为平均值±标准差。统计显著性(第页<0.05)由学生的t吨测试。
图5
图5。DC肾支架中细胞因子的定量检测
DC肾中HGF、TGF-b和VEGF的水平与自然肾无差异。数据显示为平均值±标准差。统计显著性(第页<0.05)由学生的t吨测试。
图6
图6。mES细胞的荧光分析
A1、B1、C1显示OCT4、Nanog和sox2的表达。A2、B2、C2显示dapi染色。A3、B3、C3显示合并图片。
图7
图7。小鼠ES细胞对肾脏支架的再细胞化
接种小鼠ES细胞的肾支架的苏木精和伊红染色显示细胞均匀分布于肾小球、血管结构、肾小管周围毛细血管和肾小管。答:。显示了总体外观。B–D类。显示肾小球部分和E.公司。显示肾小管。
图8
图8。肾脏ECM支架的植入和移植
脚手架的外观A和B。B超显示的血流C–E类。(A) ,植入前脱细胞支架。(B) 拆下夹子后,血在整个支架内流动良好。在第2天、第1周和第2周获得植入肾支架的B超图像。
图9
图9。移植肾ECM支架的组织学检查
移植支架的苏木精和伊红染色显示强烈的炎性细胞浸润。肾小球结构清晰可见,可见炎性细胞浸润。一些血管结构被血栓阻塞或充满红细胞。
图10
图10。再生肾移植后功能检测
数据显示为平均值±s.d(在三组数据中,第页< 0.01). 统计显著性(第页<0.05)由学生的t吨测试。

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