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.2015年10月27日；6（33）：34658-68。
doi:10.18632/目标5778。

Wnt激活的β-catenin和YAP蛋白增强结肠癌细胞中RNase MRP非编码RNA成分的表达

金珠公园 1, Sunjoo Jeong先生 1
附属公司

Wnt激活的β-连环蛋白和YAP蛋白增强结肠癌细胞RNase MRP非编码RNA成分的表达

金珠公园等。 Oncotarget公司. .

摘要

RMRP是线粒体RNA加工内核糖核酸酶的RNA成分，是在线粒体和核糖体RNA加工中起作用的RNase-MRP复合体的非编码RNA（ncRNA）部分。尽管RMRP基因的各种突变与发育缺陷和发病机制有关，但其与癌症病因学的相关性尚不明确。在这里，我们检测了RMRP的表达，发现在结直肠癌和乳腺癌患者组织中显著增加。因此，我们测试了致癌信号通路Wnt/β-catenin和Hippo/YAP通路是否与癌细胞中RMRP的增强表达有关，因为RMRP基因上游区域预测的β-caterin/TCF和YAP/TBX5元件。正如预期的那样，Wnt信号激活通过β-catenin和YAP转录因子显著诱导RMRP转录。更重要的是，YAP蛋白与RMRP基因（Pol III启动子）转录起始位点附近的近端位点以及β-连环蛋白和TBX5蛋白相关，对RMRP转录至关重要。我们认为Wnt和Hippo信号通路的相互作用可以通过肿瘤细胞中的β-catenin/YAP/TBX5转录复合物调节靶基因的编码或非编码。

关键词：河马信号；RMRP；Wnt信号；YAP；β-连环蛋白。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突

作者声明在这项工作中没有已知的利益冲突。

数字

图1
图1。提升的表达风险管理建议肿瘤组织和癌细胞中的水平
答：。RT-PCR分析风险管理建议各种细胞系中的水平：Beas-2B（非恶性肺上皮细胞）；HEK293（胚胎肾细胞）、HEK293T（含有SV40病毒DNA的HEK293细胞）；SW480和HT-29（大肠腺癌细胞）；HCT116（大肠癌细胞）；H1299（肺上皮、非小细胞癌细胞）和HeLa（宫颈癌细胞）。B。相对风险管理建议qRT-PCR检测不同细胞系中的水平(n个= 3).C、。RT-PCR分析风险管理建议大肠肿瘤患者组织中的表达水平。条形图显示肿瘤组织与正常组织的相对水平。P： 患者，N：正常组织，T：肿瘤组织。D。RT-PCR分析风险管理建议乳腺肿瘤患者组织中的表达水平。条形图表示肿瘤组织与正常组织中的相对RNA水平。P： 病人，N：正常组织，T：肿瘤组织。E.公司。之间的相关性风险管理建议乳腺癌患者正常组织和肿瘤组织中β-catenin mRNA水平。T/N比值：肿瘤组织RNA水平/正常组织RNA水平。
图2
图2。Wnt/β-连环蛋白/TCF4诱导的风险管理建议表达
答：。Northern印迹分析风险管理建议myc-β-catenin和/或FLAG-TCF4过度表达后HEK293细胞中的水平。*代表异常风险管理建议条带（比正常大小长约50 bp）。条形图显示风险管理建议三个独立实验的水平。给出了平均值和标准差(*第页< 0.01).B。乳腺癌标本Axin-2 mRNA表达水平的RT-PCR分析答：。.C、。染色质免疫沉淀（ChIP）分析风险管理建议在HEK293细胞中转染FLAG-β-catenin后使用抗FLAG抗体启动子。三种假定TBE（TCF结合元件）上游的FLAG-β-catenin相对占有率与IgG的比较风险管理建议基因显示。条形图显示了ChIP分析的qPCR分析(n个= 3).D。Northern印迹分析风险管理建议Wnt3a处理不同时间（0、0.5、1、2和4小时）后HEK293细胞中的水平。5S rRNA作为对照。E.公司。的表达式Axin-2通过RT-PCR实验从D。.
图3
图3。的增强表达式风险管理建议通过Hippo/YAP途径
答：。RT-PCR分析风险管理建议转染FLAG-TAZ和FLAG-YAP后Beas-2B细胞的表达水平。条形图显示了上述凝胶的密度计扫描。B。Western blot分析Wnt3a处理不同时间（0、0.5、1、2和4小时）后HEK293细胞中YAP蛋白水平和磷酸化状态。RT-PCR分析表明YAP靶基因CTGF公司mRNA表达水平。C、。Wnt3a处理HEK293后（0、0.5、1和3小时）低和高细胞密度下YAP蛋白水平和磷酸化状态的Western blot分析。YAP靶基因的RT-PCR分析CTGF公司mRNA也显示出来。D。Northern印迹分析RMRP公司样本的表达水平C、。还检测到.5S rRNA作为对照。还显示了上述凝胶的密度计扫描。E.公司。Northern印迹分析风险管理建议Wnt3a或对照培养基（1hr）处理HEK293细胞后用si-β-catenin和si-YAP沉默的水平。条形图表示上述凝胶的密度计扫描。RT-PCR分析表明样品的沉默效率。
图4
图4。β-catenin/YAP/TBX5转录复合物的染色质结合风险管理建议发起人
答：。Northern印迹分析风险管理建议在HEK293细胞中转染FLAG-β-catenin、FLAG-YAP和FLAG-TBX5后的水平。条形图表示上述凝胶的密度计扫描。RT-PCR分析显示DNA转染效率。B。图中显示了三个TBE（TCF绑定元素）、三个TB5（TBX5绑定位置）和TATA框风险管理建议发起人。箭头表示转录起始点。C、。利用结肠癌SW480细胞中的抗β-catenin和抗YAP抗体进行ChIP分析。IgG用作阴性对照。qPCR分析通过图表显示β-catenin或YAP与三个TBX5结合位点（TB5-1、-2和-3）的结合。D。上述ChIP和qPCR分析至TATA盒RMRP公司发起人。
图5
图5。细胞质增加风险管理建议Wnt3a处理后的水平
答：。荧光原位杂交（FISH）数据的定量，如图S4B所示。HeLa细胞用风险管理建议探针与细胞质细胞百分比风险管理建议从染色细胞中计数(n个= 65).B。细胞分馏分析风险管理建议.核和细胞质水平风险管理建议Wnt3a处理后分离的HeLa细胞。图形表示上述凝胶的密度计扫描。C、。线粒体DNA（mtDNA）的PCR分析。制备线粒体部分并纯化线粒体DNA。检测线粒体16S rRNA基因以测定线粒体DNA的数量。核DNA（nDNA）污染也由GAPDH公司β-catenin基因。在HeLa细胞中进行Wnt3a处理3小时。
图6
图6。Wnt增强型风险管理建议表达
答：。如果没有Wnt活化风险管理建议表示为。β-连环蛋白和YAP蛋白在Wnt OFF状态下由于细胞质中的降解而较低。B。Wnt激活后，β-catenin和YAP蛋白水平增加并转移到细胞核。β-catenin和YAP与风险管理建议启动子与DNA结合蛋白TCF和TBX5结合，导致风险管理建议.
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