Organotypic brain slice cultures as a model to study angiogenesis of brain vessels

doi:10.3389/fcell.2015.00052

.2015年9月2:3:52。

doi:10.3389/fcell.2015.00052。 2015年电子收集。

器官型脑片培养作为研究脑血管新生的模型

比安卡·赫特尔·施米德¹, 凯瑟琳·尼克瓦勒¹, 克里斯蒂安·汉佩尔¹

附属公司

PMID： 26389117
预防性维修识别码：项目经理4557061
内政部： 10.3389/fcell.2015.00052电话：

器官型脑片培养作为研究脑血管新生的模型

比安卡·赫特尔·施米德等。前电池开发生物. 2015.

.2015年9月2:3:52。

doi:10.3389/fcell.2015.00052。 2015年电子收集。

作者

比安卡·赫特尔·施米德¹, 凯瑟琳·尼克瓦勒¹, 克里斯蒂安·亨佩尔¹

附属

¹奥地利因斯布鲁克医科大学精神病和心理治疗系精神病和实验性阿尔茨海默病研究实验室。

PMID： 26389117
预防性维修识别码：项目经理4557061
内政部： 10.3389/fc电话：2015.00052

摘要

脑血管是大脑中向神经元传递能量和基质的最重要结构。脑血管由内皮细胞、周细胞和星形胶质细胞之间的复杂相互作用组成，控制底物进入大脑。脑血管损伤和血管损伤是不同神经退行性疾病（如阿尔茨海默病）的常见病理学表现。为了研究脑血管重塑，需要开发简单的三维体外系统。小鼠的器官型脑切片为探索复杂三维结构中脑血管的血管生成作用提供了有力的工具。在这里，我们表明，器官型脑片可以从出生后和成年小鼠脑的110μm厚切片中培养。对血管进行层粘连蛋白和IV型胶原的免疫组织化学染色。共染色是一种合适的方法，可以显示这些血管中的脑内皮细胞与周细胞和星形胶质细胞的相互作用。不同的外源刺激，如成纤维细胞生长因子-2或血管内皮生长因子分别诱导血管生成或再生长。过热或酸中毒会降低器官型切片中的血管密度。总之，器官型脑片显示出强大的血管网络，可用于在三维体外系统中研究脑血管的重塑和血管生成。

关键词：毛细管；器官型切片；周细胞；血管；血管；可控震源。

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数字

图1
**产后器官型可控震源血管系统概述**从出生后10天的野生型小鼠制备振动切片（110μm），培养2周，在多聚甲醛中固定，并使用显色DAB底物对IV型胶原进行染色**（A）**或荧光Alexa-488（B、C）.面板**（C）**显示了高倍共焦显微图像。A中的比例尺=1500μm（A），17微米**（B）**，12微米**（C）**.

图2
**出生后器官型切片血管新生**取出生后10天的小鼠大脑皮层切片，在不含（Co）或含100 ng/ml VEGF或FGF-2的情况下培养2周，然后固定并染色层粘连蛋白**（A、D）**或IV型胶原**（B、C）**一些切片在切割后立即在42°C或pH 6.0下培养过夜，然后在没有任何生长因子的情况下培养2周。血管密度在6×6网格中量化**（C）**.采用单向方差分析和随后的Fisher LSD进行统计分析*事后的，事后的*测试。数值以平均值±SEM表示；括号中的值给出了分析的切片数。^*第页< 0.05;^***第页< 0.001. A中的比例尺=90μm（A–C）.

图3
**成人器官型可控震源中血管的再生**从成年（6个月大）野生型小鼠制备振动切片。整个大脑都被刀割破了。然后将切片在不含或含100 ng/ml VEGF的情况下孵育4周。然后对切片进行后固定，并使用显色底物DAB对层粘连蛋白进行染色。穿过切口的船只数量（中的箭头**A、 B类**)以每200μm距离的交叉点计算**（C）**统计分析由一名非配对人员进行T型-用等方差检验。数值以平均值±SEM表示；括号中的值给出了分析的切片数。^***第页< 0.001. A中的比例尺=40μm（A，B）.

图4
**成人器官型可控震源中的周细胞**从成年小鼠中制备弧菌切片（110μm），孵育2周，然后后固定并染色PDGFRβ**（A，B）**，IV型胶原蛋白**（D）**或α-平滑肌肌动蛋白**（E）**.切片提取物进行Western Blot，并染色PDGFRβ**（C）**显示了约80–100 kDa的单波段。作为对照，分析培养的脑毛细血管内皮细胞（BCEC）或出生后切片的提取物。通过肌动蛋白染色进行负荷控制**（C）**.面板切片**（A，B）**使用发色底物DAB和面板切片进行染色**（D–F）**荧光（Alexa-488代表IV型胶原，绿色，Alexa-548代表α-平滑肌肉肌动蛋白，红色）。面板**（F）**显示了合并的图片。面板**（D、E）**均为高倍共聚焦显微照片。比例尺，A=15μm（A，B），7微米**（D–F）**.

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