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.2015年6月1日；8(6):6334-44.

电子收集2015。

KDM6B通过激活SLUG诱导上皮-间质转化和增强肾透明细胞癌转移

李强¹, 侯烈军², 郭福鼎¹, 李英龙¹, 王江平¹, 彪乾¹, 孙建国^三, 王钦章¹

附属公司

附属公司

¹石河子大学医学院第一附属医院泌尿科，石河子832008。
²宁波大学医学院附属医院泌尿科，宁波，中国。
^三上海交通大学基础医学院生理与心理研究所，中国上海。

PMID： 26261509
预防性维修识别码：项目经理4525843

KDM6B通过激活SLUG诱导上皮-间质转化和增强肾透明细胞癌转移

李强等。国际临床实验病理学杂志. 2015.

.2015年6月1日；8（6）：6334-44。

电子收集2015。

作者

李强¹, 侯烈军², 郭福鼎¹, 李英龙¹, 王江平¹, 彪乾¹, 孙建国^三, 王钦章¹

附属公司

¹石河子大学医学院第一附属医院泌尿科，石河子832008。
²宁波大学医学院附属医院泌尿科，宁波，中国。
^三上海交通大学基础医学院生理与心理研究所，中国上海。

PMID： 26261509
预防性维修识别码：项目经理4525843

摘要

透明细胞肾细胞癌（ccRCC）是最常见的肾癌之一；上皮-间充质转化（EMT）与肿瘤侵袭转移相关。关于EMT的分子调控已有一些研究，但组蛋白去甲基化酶与EMT的关系尚不清楚。在这里，我们报道KDM6B在ccRCC中有高表达，并且与ccRCC预后不良呈正相关。KDM6B，也称为JMJD3，是一种组蛋白去甲基酶，可以从染色质中去除抑制性组蛋白H3K27me3标记，从而激活基因表达。我们发现敲除KDM6B可以在体外抑制ccRCC的肿瘤发生；此外，KDM6B可以通过激活主转录因子SLUG的表达诱导ccRCC细胞发生EMT。ChIP分析显示KDM6B通过去甲基组蛋白H3K27me3刺激SLUG表达。KDM6B的敲除在体外强烈抑制ccRCC细胞的侵袭，而KDM6B的过度表达则表现出相反的趋势。同时，我们对ccRCC组织的分析发现，KDM6B的表达与淋巴结转移显著相关。总之，我们的数据提供了一种调控肿瘤细胞侵袭和EMT的新的表观遗传学机制，并为ccRCC的诊断和预后提供了一个生物分子。

关键词：EMT；KDM6B；鼻涕虫；ccRCC。

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数字

图1
KDM6B在ccRCC中经常上调，与ccRCC预后不良呈正相关。应用A.qRT-PCR检测肾透明细胞癌（ccRCC）患者非肿瘤组织和肿瘤组织中KDM6B mRNA的表达。B.Western印迹用于测量KDM6B在非肿瘤组织和来自ccRCC的肿瘤组织中的蛋白表达。Western blot检测人肾上皮细胞系293和ccRCC细胞系Caki-2或ACHN之间的KDM6B蛋白水平。D.使用在线工具绘制Kaplan-Meier生存曲线。

图2
体外KDM6B敲除可抑制ccRCC肿瘤发生。A.Western blot分析证实了shRNA-介导的对Caki-2细胞KDM6B表达的干扰。B.采用CCK-8法绘制Caki-2细胞的生长曲线，细胞转染shKDM6B或SCR。C.由于KDM6B表达的干扰，单层培养中对病灶形成的典型抑制。

图3
KDM6B通过诱导SLUG促进EMT。A.KDM6B在Caki-2细胞中过度表达，qRT-PCR用于测量上皮和间充质标记物的mRNA水平。B.Western blot分析显示Caki-2/KDM6B细胞的上皮标记物显著减少，间充质标记物增加。采用C.qRT-PCR检测Caki-2/shKDM6B细胞上皮和间充质标记物的mRNA水平变化。D.在Caki-2/shKDM6B细胞中，western blot显示与Caki-2/KDM6B细胞相反的结果，上皮标记物增加，间充质标记物减少。

图4
KDM6B通过调节H3K27甲基化促进SLUG转录。用KDM6B shRNA#2转染A.Caki-2细胞。使用H3K27me3抗体进行ChIP分析。B.qRT-PCR用特异性引物进行SLUG、SNAI1、扭转或SIP-1号机组mRNA。数据表示进行es或dy.进行es的平均c引物为c。在Caki-2/shKDM6B细胞中重建抗RNAi KDM6B的表达，用H3K27me3抗体进行ChIP分析，然后用特异性引物进行qRT-PCRSLUG、SNAI1、扭转或SIP-1号机组mRNA。数据表示三个独立实验的平均值±SD。

图5
KDM6B促进肾透明细胞癌细胞侵袭。将KDM6B shRNA转染A.786-O细胞，72小时后进行体外侵袭试验。该图显示了每个场中入侵细胞的平均数量。进行了三个独立的实验，数据显示为SD的平均值（*P<0.05）。B.786-O细胞用KDM6B转染，然后在72小时后进行体外侵袭测定。展示了具有代表性的照片。进行了三个独立的实验，数据显示为SD的平均值（*P<0.05）。用shRNA转染C.Caki-2细胞，然后进行软琼脂集落形成试验。该图显示了每个字段的平均菌落数。进行了三个独立的实验，数据显示为SD的平均值（*P<0.05）。

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