跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2015年7月23日5:52291。
doi:10.1038/srep12291。

低氧诱导的自噬介导肺癌细胞对顺铂的耐药性

吴惠美 1, 自封江 1, 裴善鼎 1, 李杰邵 1, 刘荣宇 1
附属公司

低氧诱导的自噬介导肺癌细胞对顺铂的耐药性

吴惠美等。 科学代表. .

摘要

低氧普遍存在于实体肿瘤中，通过激发适应性反应（包括自噬）导致癌细胞化疗耐药。因此，我们试图评估自噬和缺氧的作用以及肺癌细胞对顺铂耐药的潜在机制。我们的研究表明，缺氧以Hif-1α和Hif-2α依赖的方式显著保护A549和SPC-A1细胞免受顺铂诱导的细胞死亡。此外，与常压相比，缺氧条件下顺铂诱导的细胞凋亡明显减少。然而，当3-MA或siRNA靶向ATG5抑制自噬时，这种减少有效减弱，这意味着自噬介导了缺氧条件下的顺铂抵抗。同时，我们还发现缺氧会显著增强顺铂诱导的自噬激活，同时抑制顺铂诱导BNIP3死亡途径，这是因为缺氧条件下的自吞噬过程更加有效。因此，我们认为自噬是顺铂在常氧和缺氧条件下孵育后的一种保护机制。然而，在常氧条件下，自噬激活“无法抵消顺铂诱导的应激，因此导致细胞死亡，而在缺氧条件下，自噬诱导增强，解决了顺铂诱导的应激，使细胞存活。总之，缺氧增强自噬诱导可降低肺癌细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。缺氧以Hif-1α和Hif-2α依赖性方式降低肺癌细胞对顺铂的化疗敏感性。
肺癌细胞系A549(A类)和SPC-A1(B类)在常压（21%O）下培养2)和缺氧（1%O2)不同浓度顺铂24小时的条件 在有或无Hif-1α或Hif-2αsiRNA的情况下培养h。在治疗结束时，用MTT评估细胞活力。(C类)A549细胞中Hif-1α或Hif-2αsiRNA的敲除效率。IC50用虚线表示。(D类)SPC-A1细胞中Hif-1α或Hif-2αsiRNA的敲除效率。(E类)收集不同时间点缺氧培养的细胞进行蛋白质提取，然后使用Hif-1α和Hif-2α抗体进行western blot。结果显示为平均值 ± 四个独立实验的SD*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001. 对斑点图像进行裁剪以进行比较。
图2
图2。缺氧阻断了顺铂诱导的肺癌细胞中促凋亡蛋白的亚细胞重新分布。
按指示处理A549和SPC-A1细胞，然后将细胞分为胞浆部分和线粒体部分。(A类)细胞溶质部分和线粒体部分的COX IV蛋白表达（通道1：常氧，通道2：缺氧）。(B类)Bax和Cyto C的总蛋白表达(C类)细胞溶质和线粒体中Bax和Cyto C的蛋白表达(D类)细胞质中Bax或Cyto C的表达与线粒体中Bax和Cyto C的表达之比。结果显示为平均值 ± 三个独立实验的SD**第页 < 0.01, ***第页 < 0.001. 对斑点图像进行裁剪以进行比较。
图3
图3。低氧抑制顺铂诱导的Bax移位和细胞C释放。
如上所述处理A549和SPC-A1细胞，然后在MitoTracker染色后用Bax或细胞C抗体对细胞进行免疫染色。(A类)Bax细胞定位。(B类)细胞C细胞定位。代表性图像来自三个独立的实验。绿色：Bax或Cyto C；红色：线粒体；蓝色：细胞核；比例尺：10 微米。
图4
图4。3-MA完全消除了缺氧对顺铂诱导的细胞凋亡的影响。
第549页(A类和C类)和SPC-A1(B类和D类)用或不用顺铂处理细胞12次 h，然后进行Annexin-V和PI染色和FACS分析。细胞表现为早期凋亡（Annexin-V+/PI公司−)已计算(C类和D类). (E类)western blot检测活化caspase-3和Rb的表达。(F类)活化的胱天蛋白酶-3的相对表达。(G公司)Rb的相对表达。用密度计对每条带进行定量。数据显示为平均值 ± 标准偏差*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001. 所有研究都代表了至少三个独立实验。对斑点图像进行裁剪以进行比较。
图5
图5。缺氧上调顺铂诱导的自噬体数量。
第549页(A类，上部）和SPC-A1(C类，lower）细胞用顺铂治疗12 分别在常氧和缺氧条件下h。将MDC加载到细胞中并在37 15°C min，然后使用共焦激光扫描（400×）进行可视化。计算含有MDC标记空泡的A549或SPC-A1细胞的比率，并显示在(B类和D类). 放大后的代表性空泡显示在左上角。数据显示为平均值 ± 标准偏差*第页 < 0.05.
图6
图6。缺氧促进了顺铂诱导的肺癌细胞中LC3的积累。
用GFP标记的LC3转染A549和SPC-A1细胞。24天后 h转染，细胞在常氧或缺氧条件下培养12小时，有无顺铂 h.3-MA用于抑制自噬。图像由共焦激光扫描显微镜拍摄。(A类,C类)典型图像显示细胞质中有点状GFP-LC3。A549中含有GFP-LC3点的细胞百分比(B类)和SPC-A1(D类)计数细胞，每组100个细胞。白色箭头表示GFP-LC3点。结果显示为平均值 ± 标准偏差*第页 < 0.05.
图7
图7。在用顺铂处理的肺癌细胞中，缺氧诱导了更多的自噬液泡。
第549页(A类和B类)和SPC-A1(C类和D类)用顺铂处理细胞12次 h常氧或缺氧。电镜显示A549和SPC-A1细胞的超微结构。红色箭头表示细胞质中的自噬空泡。放大倍数：10000×。分析A549中每个细胞自噬泡的数量(B类)和SPC-A1(D类)单元格。每组检测20个细胞。数据显示为平均值 ± 标准偏差*第页 < 0.05.
图8
图8。缺氧增强顺铂诱导肺癌细胞中Beclin-1、p-Beclin-1、LC3-II丰度和p62降解。
(A类,B类)A549和SPC-A1细胞在常氧或缺氧条件下孵育12小时，有或没有顺铂 h.提取蛋白质并使用Beclin-1、p-Beclin-1、p62和LC3抗体进行western blot(A类). (B类——E类)通过检测密度法定量Beclin-1、p-Beclin-1、p62和LC3-II的相对表达。数据显示为平均值 ± 标准偏差**第页 < 0.01, ***第页 < 0.001. 所有研究都是三个独立实验的代表。对斑点图像进行裁剪以进行比较。
图9
图9。缺氧抑制肺癌细胞中顺铂诱导的BNIP3死亡途径。
(A类,B类)A549和SPC-A1细胞在常氧或缺氧条件下培养12小时 h加或不加顺铂。提取蛋白质并使用Hif-1α、Hif-2α、BNIP3和BNIP3L抗体进行western blot(A类). (B类——E类)通过检测密度法定量Hif-1α、Hif-2α、BNIP3和BNIP3L的相对表达。数据显示为平均值 ± 标准偏差*p < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001. 所有研究都是三个独立实验的代表。对斑点图像进行裁剪以进行比较。
图10
图10。肺癌细胞对缺氧条件下顺铂诱导的细胞死亡敏感性较低的示意图。
顺铂诱导的自噬激活是在常氧和缺氧条件下对抗顺铂诱导的细胞死亡的保护机制，并且可能存在一定的自噬激活阈值。在常氧条件下，自噬激活无法超过阈值来抵消顺铂诱导的应激，导致p62降解降低，BNIP3和BNIP3L丰度增加，导致细胞凋亡激活和细胞死亡。然而，在缺氧条件下，自噬诱导增强，从而解决了应激，导致更多p62降解，BNIP3和BNIP3L丰度降低，凋亡激活降低，使细胞得以存活。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Parkin D.M.、Bray F.、Ferlay J.和Pisani P.全球癌症统计，2002年。CA癌症临床杂志。55, 74–108 (2005).-公共医学
    1. Sui X.等人。自噬和化疗耐药：一个有希望的癌症治疗靶点。细胞死亡疾病。4，e838–849（2013）。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Belani C.P.化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌：近期随机试验。临床肺癌。3补遗1，S5-9（2002）。-公共医学
    1. Suehisa H.&Toyooka S.辅助化疗治疗完全切除的非小细胞肺癌。冈山医学学报。63223-230（2009年）。-公共医学
    1. 刘毅等。顺铂诱导HeLa细胞凋亡及其机制。华中科技大学医学科学杂志。28, 197–199 (2008).-公共医学

出版物类型