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.2015年7月;38(7):657-62。
doi:10.14348/molcells.2015.0083。 Epub 2015年6月17日。

Ucp2介导的胞吐作用需要阴离子转运或核苷酸结合

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Ucp2介导的胞吐作用需要阴离子转运或核苷酸结合

苏荷·李等。 分子细胞. 2015年7月.

勘误表in

摘要

快速有效地吞噬凋亡细胞是吞噬细胞去除多细胞生物中产生的大量凋亡细胞的基本特性。为此,吞噬细胞需要能够持续摄取凋亡细胞。最近有报道称,解偶联蛋白2(Ucp2)通过增加吞噬能力促进凋亡细胞的吞噬,从而使细胞持续摄取凋亡细胞。然而,Ucp2除了在耗散线粒体膜电位方面可能发挥的作用外,还有助于提高吞噬能力的功能尚未确定。在这里,我们报告了Ucp2的阴离子转移或核苷酸结合活性,以及它对线粒体膜电位的耗散,对于Ucp2介导的凋亡细胞的吞噬是必要的。为了研究这些特性,我们产生了影响Ucp2三种不同功能的Ucp2突变,即线粒体膜电位耗散、阴离子转移和嘌呤核苷酸结合。影响质子泄漏的Ucp2突变没有增强凋亡细胞的吞噬。尽管阴离子转移和核苷酸结合突变并不影响线粒体膜电位,但它们对Ucp2介导的吞噬作用具有显著的负效应。此外,我们的Ucp2突变都没有增加吞噬能力。我们得出的结论是,Ucp2对质子梯度的耗散并不是吞噬能力的唯一决定因素,并且Ucp2的阴离子转移或核苷酸结合对于Ucp2介导的凋亡细胞的吞噬也至关重要。

关键词:凋亡细胞;容量;吞没;膜电位;吞噬作用。

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数字

图1。
图1。
Ucp2促进凋亡细胞的吞噬。(A) 用Ucp2-FLAG转染293T细胞,裂解并分离成细胞质和线粒体部分。Erk2和Porin分别用于确认细胞溶质和线粒体部分。(B) 用Ucp2-FLAG转染LR73细胞,并用抗FLAG和抗AIF抗体染色。比例尺,20μm。转染Ucp2-FLAG的(C,D)LR73(C)或NIH/3T3(D)细胞用抗FLAG抗体和Mitotracker染色。箭头表示在所有四个面板中表达Ucp2-FLAG的相同细胞。比例尺,20μm。(E) Ucp2-FLAG在LR73细胞中表达,TMRE染色,流式细胞仪分析。TMRE的平均荧光强度归一化为对照。用所示质粒转染(F,G)LR73细胞,并与TAMRA染色的凋亡胸腺细胞(F)或2μm羧酸修饰红色荧光珠(G)孵育2h。用流式细胞仪分析细胞。NS,不显著;**P(P)< 0.01,***P(P)< 0.001.
图2。
图2。
Ucp2突变体的亚细胞定位。(A) 说明Ucp2突变位置的Ucp2示意图。大黑点,质子泄漏突变;开环,氯离子转运突变;小黑点,核苷酸结合突变。(B) 将所示质粒转染LR73细胞,进行裂解,并通过免疫印迹分析蛋白表达。免疫印迹法检测Ucp2和突变Ucp2蛋白的表达。β-actin作为负荷对照。FLAG印迹下的数字表示Ucp2蛋白的相对表达。(C) 表达所示蛋白的LR73细胞用抗FLAG和AIF抗体染色。比例尺,20μm。
图3。
图3。
Ucp2突变体对线粒体膜电位的影响。(A) 表达所示蛋白的LR73细胞用抗FLAG抗体和MitoTracker染色。箭头指向表达Ucp2 FLAG的细胞。比例尺,20μm。用所示质粒转染(B,C)LR73细胞,然后用TMRE染色。用流式细胞术测定TMRE的平均荧光强度,并与空载体转染的对照细胞进行比较。NS,不显著;***P(P)< 0.001.
图4。
图4。
阴离子转运突变体对胞外作用具有显性负效应。(A,B)表达Ucp2、Ucp2的质子泄漏突变的LR73细胞D28N型和Ucp2D212N型与凋亡胸腺细胞(A)或2μm羧酸修饰珠(B)孵育2h,并用流式细胞仪进行分析。用所示质粒转染(C,D)LR73细胞,并与凋亡胸腺细胞(C)或2μm羧酸修饰珠(D)孵育2 h。通过流式细胞术评估吞噬凋亡胸腺淋巴细胞(C)和珠(D。(E) 在LR73细胞中表达Ucp2和突变的Ucp2蛋白,然后将细胞与TAMRA染色的凋亡胸腺细胞孵育1h至5h。用流式细胞仪测量摄取凋亡细胞的细胞的TAMRA的平均荧光强度(MFI)。NS,不显著;*P(P)< 0.05,**P(P)< 0.01,***P(P)< 0.001.

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