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.2015年6月11日；10（6）：e0127943。
doi:10.1371/journal.pone.0127943。 电子收集2015。

RET信号通路中DNA-PK参与的蛋白质组学鉴定

莱尔·J·伯丁 1, 玛丽·施卢特曼·伯丁 2, 林利·莫兰 2, 布拉德·福格尔 三, 丽莎·莫尔 2, 詹妮弗·詹姆斯 三, Richard H Turnage公司 1, 艾伦·J·塔克特 2
附属公司

RET信号通路中DNA-PK参与的蛋白质组学鉴定

莱尔·J·伯丁等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

转染过程中重组（RET）原癌基因的组成性激活导致MEN2A甲状腺髓样癌（MTC）的发生。RET突变和MEN2A的发展具有相对明确的基因型/表型关系，这是不寻常的，因为单个基因的活性可以推动转移性疾病的进展。尽管知道MEN2A的致癌基因，但与大多数神经嵴起源的肿瘤一样，MTC在很大程度上仍然对化疗耐药。SK-N-MC细胞系模型中RET的组成性激活降低了细胞对化疗的敏感性。为了确定与观察到的RET诱导的化学耐药性有关的机制的组成部分，我们对具有组成活性RET信号通路的细胞中的组蛋白和相关蛋白进行了蛋白质组学筛选。蛋白质组学方法将DNA损伤反应蛋白DNA-PKcs确定为RET信号通路的靶点。活性DNA-PKcs在丝氨酸2056位点磷酸化，定位于染色质，在我们的模型中升高。用RET抑制剂RPI-1治疗后，RET细胞和人甲状腺髓样癌细胞系中的s2056磷酸化显著降低。此外，抑制DNA-PKcs活性可降低两种细胞系中观察到的耐药性。重要的是，我们发现活化的DNA-PKcs在甲状腺髓样肿瘤样本中升高，并且其表达与甲状腺肿瘤中RET的表达相关。这些结果强调了RET信号可能启动细胞对DNA损伤快速反应的一种机制，并提示DNA-PKcs是MTC的另一个靶点。

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数字

图1
图1。RET亚型表达增加会增加化疗抵抗力。
A） RET细胞系的Western blot分析显示，RET 9或RET 51亚型仅在过度表达的细胞系中表达和磷酸化，而在对照EV细胞中没有。B） RET表达导致细胞对阿霉素治疗（DOX）产生耐药性*p≤0.01，误差条=标准差。
图2
图2。在RET 9和RET 51细胞中，s2056处DNA-PKcs的磷酸化升高。
A） Western blot分析显示RET9和RET51细胞裂解液中磷酸化-s2056（ps2056）（460 Kda）升高。总DNA-PKcs用作负荷控制。B） 对细胞进行免疫细胞化学染色，将其置于培养箱载玻片中，并进行ps2056（红色）和Dapi（蓝色）的复染。C） ICC显示，与EV相比，位于RET 9和RET 51细胞细胞核中的ps2056显著增加。*p≤0.05，误差条=s.d。
图3
图3。RET抑制减少DNA-PKcs的磷酸化。
将EV、RET 9和RET 51细胞用RET抑制剂RPI-1处理24小时，然后采集细胞并进行western blot分析。根据Image J分析，RPI-1治疗显著降低了s2056位点DNA-PKcs的磷酸化。GAPDH被用作负载控制**p≤0.005，误差棒=标准差。
图4
图4。抑制DNA-PKcs可降低RET 9和RET 51细胞的耐药性。
用DNA-PKcs抑制剂Nu7441（NU）单独或阿霉素（DOX）处理EV、RET 9和RET 51细胞。EV增殖设定为100，绘制9和51的EV百分比。NU增加了RET 9和51细胞对DOX的敏感性*p≤0.05，**p≤0.01，error bars=s.d.B）DNA-PKcs靶基因AKT的Western blot分析显示，NU处理后AKT磷酸化降低，表明DNA-PKcs活性受到抑制。
图5
图5。抑制RET可降低DNA-PKcs s2056的磷酸化，阻断DNA-PKcss活性可增加化疗敏感性。
A） 在分离细胞核之前，用RPI-1（5μM）处理TT细胞以抑制RET 24小时。Western blot分析表明，RET抑制降低DNA-PKcs s2056磷酸化。总DNA-PKcs和Lamin B1用作负荷控制。B） 用Nu7441（NU）（1μM）抑制DNA-PKcs处理的TT细胞比单独使用DOX处理的细胞活力下降更大*p≤0.05，误差线=标准差。
图6
图6。DNA-PKcs ps2056存在于人类甲状腺髓样癌中，并与RET信号相关。
对含有正常和MTC样本的组织微阵列进行磷-s2056（ps2056）和磷-RET（pRET）的免疫组织化学分析。每个组织样本的ps2056水平得分为0（无信号）、1（弱）、2（中等）、3（高）。图片代表3分*正常与肿瘤ps2056的卡氏检验p≤0.01，正常与肿瘤+ps2056+RET的卡氏检验p≤0.01。
图7
图7。在MTC中观察到活性RET信号通路的成分，并与DNA-PKcs相关。
MTC阵列样品磷酸化ERK 1/2和磷酸化AKT的免疫组织化学显示，MTC中存在活性RET信号通路的这两种成分，类似于ps2056 DNA-PKcs的染色。显示了整个组织阵列样本的10x图像。
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引用人

  • 甲状腺髓样癌预后分子标记物的研究现状。
    Oczko Wojciechowska M、Czarnecka A、Gawlik T、Jarzab B、Krajewska J。 Oczko-Ojciechowska M等人。 Endocr连接。2020年12月；9（12）：R251-R263。doi:10.1530/EC-20-0374。 Endocr连接。2020 PMID：33112827 免费PMC文章。 审查。
  • DNA PKcs控制T淋巴细胞中钙调神经磷酸酶介导的IL-2产生。
    Kim Wiese A、Schluterman Burdine M、Turnage RH、Tackett AJ、Burdine LJ。 Kim Wiese A等人。 公共科学图书馆一号。2017年7月27日；12（7）：e0181608。doi:10.1371/journal.pone.0181608。2017年电子收集。 公共科学图书馆一号。2017 PMID：28750002 免费PMC文章。

工具书类

    1. Pacini F、Castagna MG、Cipri C、Schlumberger M（2010）甲状腺髓样癌。临床肿瘤学（放射科）22（6）：475–85。2016年10月10日/j.clon.2010.05.002-内政部-公共医学
    1. Phay JE，Shah MH（2010年），癌症中靶向RET受体酪氨酸激酶激活。临床癌症研究16（24）：5936–41。10.1158/1078-0432.CCR-09-0786-内政部-公共医学
    1. Carter MT、Yome JL、Marcil MN、Martin CA、Vanhorne JB、Mulligan LM（2001）RET原癌基因剪接变体的保存及其对RET亚型功能的影响。细胞遗传学细胞遗传学95（3-4）：169-76。-公共医学
    1. Hansford JR、Mulligan LM（2000）《2型多内分泌肿瘤和RET：从肿瘤到神经发生》。医学遗传学杂志37（11）：817–27。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Mologni L（2011）RET激酶抑制剂用于靶向癌症治疗的研究。《现代医学化学》18（2）：162-75。-公共医学

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