Conditional steroidogenic cell-targeted deletion of TSPO unveils a crucial role in viability and hormone-dependent steroid formation

doi:10.1073/pnas.1502670112

.2015年6月9日；112（23）：7261-6。

doi:10.1073/pnas.1502670112。 Epub 2015年5月26日。

TSPO的条件性类固醇生成细胞靶向缺失揭示了其在生存能力和激素依赖性类固酮形成中的关键作用

锦江扇¹, 恩里科·坎皮奥利¹, 安德鲁·米德扎克¹, Martine Culty公司², 瓦西里奥斯·帕帕佐普洛斯^三

附属公司

¹加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学麦吉尔大学健康中心研究所H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学医学系，QC H4A 3J1；
²加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学麦吉尔大学健康中心研究所H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学医学系，QC H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学药理学和治疗学系，QC H3G 1Y6；
^三加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学麦吉尔大学健康中心研究所H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学医学系，QC H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学药理学和治疗学系，QC H3G 1Y6；加拿大QC H3G 1Y6蒙特利尔麦吉尔大学生物化学系vassilios.papadopoulos@mcgill.ca。

PMID： 26039990
预防性维修识别码：第5466704页
内政部： 10.1073/pnas.1502670112

TSPO的条件性类固醇生成细胞靶向缺失揭示了其在生存能力和激素依赖性类固酮形成中的关键作用

锦江扇等。美国国家科学院程序. 2015.

.2015年6月9日；112（23）：7261-6。

doi:10.1073/pnas.1502670112。 Epub 2015年5月26日。

作者

锦江扇¹, 恩里科·坎皮奥利¹, 安德鲁·米德扎克¹, Martine Culty公司², 瓦西里奥斯·帕帕佐普洛斯^三

附属公司

¹加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学麦吉尔大学健康中心研究所H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学医学系，QC H4A 3J1；
²加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学麦吉尔大学健康中心研究所H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学医学系，QC H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学药理学和治疗学系，QC H3G 1Y6；
^三加拿大魁北克省蒙特利尔市麦吉尔大学麦吉尔大学健康中心研究所H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学医学系，QC H4A 3J1；加拿大蒙特利尔麦吉尔大学药理学和治疗学系，QC H3G 1Y6；加拿大QC H3G 1Y6蒙特利尔麦吉尔大学生物化学系vassilios.papadopoulos@mcgill.ca。

PMID： 26039990
预防性维修识别码：项目经理4466704
内政部： 10.1073/第152607012页

摘要

转运蛋白（TSPO）是类固醇生成组织中线粒体胆固醇转运复合体的关键成员。为了评估TSPO的功能，我们制备了两株Cre介导的TSPO条件敲除（cKO）小鼠。首先，将性腺体细胞靶向Amhr2-Cre小鼠与Tspo杂交小鼠杂交，获得F1 Tspo Amhr2 cKO小鼠（Tspo（fl/fl）；Amhr2-Cre（/+））。通过对12.5天交配（dpc）胚胎进行基因分型，证实了4.4%cKO小鼠出乎意料的孟德尔比率。由于Amhr2-Cre在性腺中以12.5 dpc的速度表达，这些发现表明胚胎的植入前选择。对表达数据库的分析显示，2和8细胞合子中的Amhr2水平升高，表明桑椹胚期之前异位Tspo沉默，并表明胚胎死亡率升高，Tspo参与胚胎发育。为了避免这个问题，将以类固醇细胞为靶点的Nr5a1-Cre小鼠与Tspo-floxed小鼠杂交。所得Tspo（fl/fl）；Nr5a1-Cre（/+）小鼠以正常的孟德尔比例出生。Nr5a1驱动的Tspo-cKO小鼠肾上腺皮质和性腺中的Tspo水平显著降低。用人绒毛膜促性腺激素（hCG）治疗小鼠，尽管脂滴大量消耗，但仍导致循环睾酮水平升高。相反，Nr5a1-driven Tspo-cKO小鼠失去了对促肾上腺皮质激素（ACTH）产生皮质酮的能力。对ACTH依赖性类固醇生成很重要，Mc2r、Stard1和Cypa11a1水平未受影响，而Scarb1水平升高，并观察到脂滴积聚，表明胆固醇利用被阻断。还观察到TSPO在肾上腺髓质中的表达和肾上腺素生成的增加。总之，TSPO对植入前胚胎发育和ACTH刺激的类固醇生物合成是必要的。

关键词：抗苗勒氏激素受体Ⅱ型；敲除小鼠；核受体亚家族5组A成员1；类固醇生成；易位蛋白。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

**图1。**
繁殖方案和观察到的异常孟德尔比率*Tspo公司*-缺陷小鼠（Cre^+/负极;*Tspo公司*^{飞行/飞行}). (A类)繁殖方案：WT、Cre-阳性和Cre-阴性*Tspo公司*生成同花小鼠并进行交配以生成*Tspo公司*组织特异性HE小鼠，预计占后代的25%。第二轮杂交HE小鼠和WT小鼠*Tspo公司*同花小鼠预计产生25%*Tspo公司*组织特异性HO小鼠。(B类)孟德尔比率*Amhr2号机组*-克雷×*Tspo公司*来自180只小鼠的同花小鼠。将观察值（蓝色条）与男性和女性的理论值（红色条）进行比较。χ²-测试****P（P）*< 0.001; n.s.，不重要；n个=180。(C类)胚胎在12.5 dpc时的形态和一个子宫在12.5 dpc时被切除。(D类)来自两个子宫的22个代表性胚胎的基因分型(顶部)PCR显示哪些胚胎呈Cre阳性。(底部)PCR显示WT、HE或HOTspo公司floxed基因型。罕见的Cre阳性病例*Tspo公司*同卵胚胎（红色箭头）和Cre阳性*Tspo公司*显示WT胚胎（蓝色箭头）。(E类)48个胚胎的孟德尔和性别比率条形图，显示预期比率（红色条）和实验结果（蓝色条）。χ²-测试****P（P）*< 0.001;n个= 48. (F类)的表达式配置文件*Amhr2号机组*植入前小鼠胚胎发育中的基因。Affymetrix读数的散点图*Amhr2号机组*利用探针1457021×aat对每个着床前发育阶段：卵母细胞、1细胞、2细胞、8细胞和胚泡显示基因。利用平台Affymetrix小鼠表达430B阵列从GSE1749中检索Affymotrix数据。n个= 4.

**图2。**
有条件减少*Tspo公司*WT、HE和HO小鼠的mRNA水平和TSPO蛋白表达。(A类和B类)实时PCRTspo公司TSPO蛋白在小鼠睾丸中的mRNA表达和共聚焦免疫荧光图像(A类和B类)，男性肾上腺(C类和D类)和卵巢(E类和F类). 箭头指向Leydig细胞（Lc）。C、皮层；M、髓质。T、卵泡膜细胞；G、颗粒细胞。β-肌动蛋白(*Actb公司*)该基因用于实时PCR数据的归一化。在共焦显微镜图像中，红色表示抗TSPO免疫反应，蓝色表示DAPI染色。[比例尺：100μm(A类,B类,E类、和F类); 50微米(C类和D类).] 学生的t吨测试***P（P）*< 0.01; ****P（P）*< 0.001.

**图3。**
WT、HE和HO的循环睾酮和皮质酮水平*Tspo公司*cKO小鼠接受和不接受hCG或ACTH治疗。(A类)基础和hCG处理的WT、HE和HO小鼠的血浆睾酮水平。与对照组相比，未发现显著差异。曼·惠特尼U型测试，*P（P）*> 0.05;n个=每组14–20只动物。(B类)基础和ACTH治疗的WT、HE和HO小鼠的血浆皮质酮水平。曼·惠特尼U型测试**P（P）*< 0.05, ***P（P）*< 0.01;n个=每组10–13只动物。下图显示了WT、HE和HO小鼠的基础和ACTH诱导的皮质酮水平。

**图4。**
的影响*Tspo公司*类固醇生成基因和酯化胆固醇mRNA水平缺乏。(A类和B类)mRNA表达的实时PCR星星,*Cyp11a1细胞*,*Mc2r公司*、和*疤痕1*在睾丸中(A类)和肾上腺(B类). β-肌动蛋白mRNA(*Actb公司*)用于归一化。学生的t吨测试**P（P）*< 0.01. (C类)WT、HE和HO小鼠睾丸的油红O染色。HO小鼠中性脂质的油红O染色显著降低。Lc，Leydig细胞。（比例尺：200μm）(D类和E类)WT、HE和HO小鼠肾上腺油红O染色。使用image-Pro Plus软件在如所示的图像上创建的蒙面图像中突出显示，中性脂质染色的积累显著增加D类.C，皮质。（比例尺：200μm）

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中的注释

TSPO在生存能力和类固醇生成中的关键作用是一个误解。评论：TSPO的条件性类固醇生成细胞靶向性缺失揭示了其在生存能力和激素依赖性类固酮形成中的关键作用。
Selvaraj V、Tu LN、Stocco DM。 Selvaraj V等人。前内分泌（洛桑）。2016年7月18日；7:91. doi:10.3389/fendo.2016.0091。电子收集2016。前内分泌（洛桑）。2016 PMID：27489176 免费PMC文章。没有可用的摘要。

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