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.2015年7月20日；6(20):18038-49.
doi:10.18632/目标3833。

Torin2靶向间变性甲状腺癌中失调的通路并抑制肿瘤生长和转移

萨米拉·萨多夫斯基 1, Myriem Boufraqech公司 1, 丽莎·张 1, 梅赫塔 2, 帕亚尔·卡普尔 3, 张亚琴 4, 李竹音 4, 沈敏（音） 4, 电子Kebebew 1
附属公司

Torin2靶向间变性甲状腺癌中失调的通路并抑制肿瘤生长和转移

萨米拉·萨多夫斯基等。 Oncotarget公司. .

摘要

间变性甲状腺癌（ATC）很少见，但它是人类最致命的恶性肿瘤之一，没有有效的治疗方法。迫切需要确定新的ATC治疗剂。我们使用3282种药物的化合物库对ATC细胞系进行了定量高通量筛选（qHTS）。qHTS确定了100种泛活性药物。qHTS数据的富集分析表明，靶向mTOR的药物是最活跃的药物类别之一，Torin2的疗效最高。我们发现mTOR在ATC中上调。用Torin2处理多个ATC细胞株显示出显著的剂量依赖性抑制细胞增殖，并伴有caspase依赖性凋亡和G1/S期阻滞。Torin2抑制细胞迁移，并抑制mTOR-pathway关键效应物（AKT、4E-BP1和70S6K）的磷酸化，以及卡介素和生存素的表达、细胞周期和凋亡调节因子。在我们的转移性ATC小鼠体内模型中，Torin2抑制肿瘤生长和转移，并显著延长总体生存期。我们的研究结果表明，Torin2是一种很有前途的ATC治疗药物，它可以有效地靶向人类ATC中上调的通路。

关键词：托林2；间变性甲状腺癌；mTOR；mTORC1抑制剂；定量高通量筛选。

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利益冲突声明

潜在利益冲突的披露

作者没有利益冲突需要披露。

数字

图1
图1。ATC细胞系的qHTS结果
答：。通过qHTS对三种ATC细胞系（8505c、SW1736和C643）进行药物疗效分析的热图，具有最大反应（抑制）。B。ATC细胞系中Torin2、多西他赛和阿霉素的剂量-反应曲线。Y轴显示抑制百分比，X轴显示药物浓度。
图2
图2。Torin2对ATC细胞增殖、caspase活性和细胞周期的影响
答：。Torin2抑制ATC细胞系中的细胞增殖。用在DMSO（对照载体）中稀释的Torin2（0至2.49μM）处理细胞6天。RFU：相对荧光单位*第页< 0.01, **第页< 0.001, ***第页< 0.0001.B。Torin2增加ATC细胞系中caspase 3/7的活性。使用增殖试验中使用的两种最低浓度的Torin2，在治疗48小时后对三个ATC细胞系进行Caspase-Glo 3/7分析（图2A，T1=0.05μM和T2=0.14μM）*第页< 0.05, **第页<0.005，ns=无显著性。C、。Torin2治疗24小时后进行细胞周期分析。T1=0.05μM和T2=0.14μM。D。Torin2对细胞凋亡相关蛋白的影响。以二甲基亚砜为对照，Torin2在T1=0.05μM和T2=0.14μM条件下处理ATC细胞48小时。图2D显示了C643细胞系的代表性图形及其相应的扫描图像。1:HIF-1α，2:Claspin，3:Survivin。E.在T1=0.05μM和T2=0.14μM下用Torin2治疗48小时后，对survivin进行Western blot分析。
图3
图3。Torin2对细胞迁移和EMT标记表达的影响
答：。Torin2抑制细胞迁移。使用跨阱室分析法测量在0.14μM条件下使用和不使用Torin2治疗48小时后的细胞迁移*第页< 0.05, **第页<0.005，ns=无显著性。y轴上的nb=单元数。B类治疗48小时后对上皮-间充质转化（EMT）标记物进行的Western blots分析未影响波形蛋白、CD44和N-钙粘蛋白水平。T1=0.05μM和T2=0.14μM。
图4
图4。Torin2对mTOR和mTOR相关蛋白表达和磷酸化的影响
答：。AKT、磷酸化AKT的Western blot分析Ser473系列，百万TOR序列2448（mTORC1站点）和总mTOR。在T1=0.05μM和T2=0.14μM条件下，用Torin2处理ATC细胞48小时。由于分子量较高，β-肌动蛋白被用作mTOR印迹的负荷控制。B。mTOR下游靶点的Western blot分析：T1=0.05μM和T2=0.14μM的ATC细胞中，经Torin2处理48小时后，磷酸-S6K（p-S6K）、总70S6K、磷酸-4E-BP1（p-4E-BP1）、总4E-BPl、磷酸化PRAS40（p-PRAS40）和总PRAS40。
图5
图5。Torin2对肿瘤生长和转移的影响体内
答：。和B。用Torin2预处理小鼠可减少转移和肿瘤生长。老鼠(n个=6）在8505c luc细胞经尾静脉植入肿瘤前，用Torin2 20 mg/kg或Captisol经口灌胃24小时。答：。A中的Y轴表示从注射肿瘤细胞当天和每周测量的每只小鼠荧光素酶活性的总变化。X轴显示植入后的一周，治疗时间表如下。肺肿瘤强度的结果，以每只小鼠的荧光素酶活性变化（%）（4周时第页<0.05，平均值±SEM）。B。细胞移植后4周，治疗组和对照组小鼠的代表性全鼠图像以及肺转移的代表性H&E切片。C、。和D。Torin2抑制生长和转移体内.老鼠(n个=12）通过尾静脉植入8505c luc细胞，并在转移建立后1周每天口服Torin2 20 mg/kg或Captisol。C、。Y轴表示在注射肿瘤细胞当天和每周（第4周，第页=0.05和第5周，第页=0.007，平均值±SEM）。D。对照组和治疗组小鼠肺转移和其他转移部位信号强度的代表性图像。E.公司。Torin2处理的小鼠与对照小鼠（20X）相比的代表性H&E图像。未经治疗的小鼠的IVS图像信号强度和相应的H&E骨转移的代表性示例如所示F.G.公司。Torin2治疗前后的Kaplan-Meier生存曲线(n个=每组6人）。Torin2治疗小鼠的中位生存期为42天，而对照小鼠的中位生存期为36天(第页=0.0025，Mantel-Cox对数秩检验）。
图6
图6。空中交通管制中Torin2目标失调
答：。良性甲状腺组织、甲状腺乳头状癌和ATC中磷酸-mTOR、mTOR和survivin染色的代表性图像。B。6个ATC组织（1个坏死组织）（=12个切片）、6个PTC组织（=12切片）与6个正常组织和6个良性组织（滤泡腺瘤）（=24个切片）的mTOR染色H评分图，第页=0.013（*），平均值±SEM。C、。细胞植入后4周，用磷酸化-4E-BP1染色显示的小鼠全肺转移的典型图像。survivin（Torin2组核染色减少）和HIF-1α染色的代表性图像。20-100X的图像。
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