Cardiac telocytes and fibroblasts in primary culture: different morphologies and immunophenotypes

doi:10.1371/journal.pone.0115991

.2015年2月18日；10（2）：e0115991。

doi:10.1371/journal.pone.0115991。 2015年电子收集。

原代培养的心脏末端细胞和成纤维细胞：不同形态和免疫表型

易化贝¹, 周秋莲², 四一赋², 吕东超², 陈平（Ping Chen）², 陈元元², 王飞（音译）^三, 肖俊杰⁴

附属公司

¹上海大学生命科学学院生命科学实验中心和创新药物研究中心再生与衰老实验室，上海200444；上海大学生命科学学院生物能源作物上海重点实验室，上海200444，中国。
²上海大学生命科学学院生命科学实验中心和创新药物研究中心再生与衰老实验室，上海200444，中国。
^三同济大学医学院同济医院消化病研究所消化内科，上海200065。
⁴上海大学生命科学学院生命科学实验中心和创新药物研究中心再生与衰老实验室，上海200444；上海大学生命科学学院生物能源作物上海重点实验室，上海200444；同济大学医学院同济医院消化病研究所消化内科，上海200065。

PMID： 25693182
预防性维修识别码： PMC4333820型
内政部： 10.1371/journal.pone.0115991

原代培养的心脏末端细胞和成纤维细胞：不同形态和免疫表型

易化贝等。公共科学图书馆一号. 2015.

.2015年2月18日；10（2）：e0115991。

doi:10.1371/journal.pone.0115991。 2015年电子收集。

作者

易化贝¹, 周秋莲², 四一赋², 吕东超², 陈平（Ping Chen）², 陈元元², 王飞（音译）^三, 肖俊杰⁴

附属公司

¹上海大学生命科学学院生命科学实验中心和创新药物研究中心再生与衰老实验室，上海200444；上海大学生命科学学院生物能源作物上海重点实验室，上海200444，中国。
²上海大学生命科学学院生命科学实验中心和创新药物研究中心再生与衰老实验室，上海200444，中国。
^三同济大学医学院同济医院消化病研究所消化内科，上海200065。
⁴上海大学生命科学学院生命科学实验中心和创新药物研究中心再生与衰老实验室，上海200444；上海大学生命科学学院生物能源作物上海重点实验室，上海200444；同济大学医学院同济医院消化病研究所消化内科，上海200065。

PMID： 25693182
预防性维修识别码： PMC4333820型
内政部： 10.1371/journal.pone.0115991

摘要

端粒细胞（TC）是一种特殊类型的间质细胞，具有很长的延长，称为端足。以前已经在心脏的不同解剖结构中发现了TC，并且也从体外心脏组织中分离和培养了TC。TCs和成纤维细胞都位于心脏的间质空间，具有不同的形态和功能。然而，除了显微镜观察外，鉴别心脏TCs和成纤维细胞的可靠方法尚不清楚。在本研究中，我们从心脏组织中分离和培养了心脏TCs和成纤维细胞，并在原代培养中观察了它们的不同形态特征和免疫表型。从形态学上看，TC具有细长的串珠状末端足类，远离细胞体，而成纤维细胞的细胞突起是短的、厚的和锥形的。此外，心脏TCs的CD34/c-kit、CD34/vimentin和CD34/PDGFR-β阳性，而成纤维细胞仅vimentin及PDGFR-β阳性。此外，TCs与周细胞也不同，TCs为CD34阳性和α-SMA弱阳性，周细胞为CD34阴性但α-SMA阳性。除此之外，我们还发现心脏TCs对间充质标记物CD29呈同质阳性，但对造血标记物CD45呈阴性，这表明TCs可能是心脏间充质细胞的来源。TCs和成纤维细胞在形态特征和免疫表型上的差异将为区分心脏TCs与成纤维细胞提供更有力的证据。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

**图1。光镜显示，在原代培养后48小时、72小时和96小时，心脏组织的原代培养中的心脏终末细胞（TCs，A-F）和成纤维细胞（FB，G-L）。**
箭头所示为初代培养中典型的末端足类，长而细。原稿放大200倍；比例尺=50μm。

**图2。光镜下可见具有典型形态特征的端粒细胞（TC）。**
**（A）**一种具有小细胞体和极薄且长的末端足（Tp）的TC。**（B）**和**（C）**具有显著念珠状外观的TC：足细胞-足细胞交替（插图中放大）。**（D-F）**显示出更多具有典型形态特征的TC。原稿放大200倍；比例尺=50μm。

**图3。对原代培养的心脏末梢细胞（TCs）和成纤维细胞（FB）的CD34/c-kit、CD34/vimentin和CD34/PDGFR-β进行双重免疫荧光染色。**
荧光倒置显微镜显示TCs阳性**（A）**CD34（绿色）和**（B）**c-kit（红色），而FB为阴性**（J）**CD34（绿色）和**（K）**c-kit（红色）。c-kit和CD34（黄色）的共定标在TC中意义重大**（C）**，但在FB中不存在**（左）**.TC对**（D）**CD34（绿色）和**（E）**波形蛋白（红色）。FB为负值**（百万）**CD34（绿色），但阳性**（N）**波形蛋白（红色）。波形蛋白和CD34（黄色）的共定标在TC中显著**（F）**，而在FBs中不存在**（O）**.TC对**（G）**CD34（绿色）和**（H）**PDGFR-β（红色）。FB为负值**（P）**CD34（绿色），但阳性**（Q）**PDGFR-β（红色）。PDGFR-β和CD34（黄色）在TCs中的共放大作用显著**（一）**，但在FB中不存在**（右）**.细胞核用DAPI（蓝色）复染。原稿放大200倍；比例尺=50μm。BF，亮场。

**图4。原代培养心肌细胞（TCs）和周细胞CD34/α-SMA和CD34/PDGFR-β的双重免疫荧光染色。**
荧光倒置显微镜显示TCs阳性**（A）**CD34（绿色），相对弱阳性**（B）**α-SMA（红色），而周细胞对**（G）**CD34（绿色）但强阳性**（H）**PDGFR-β（红色）。α-SMA和CD34（黄色）在TC中的共定标作用极其微弱**（C）**，而周细胞中不存在**（一）**.TC对**（D）**CD34（绿色）和**（E）**PDGFR-β（红色），周细胞阴性**（J）**CD34（绿色），但阳性**（K）**PDGFR-β（红色）。TCs中PDGFR-β和CD34（黄色）的共表达显著**（F）**周细胞中缺失**（左）**用DAPI（蓝色）对细胞核进行复染。原稿放大200倍；比例尺=50μm。BF，亮场。

**图5。心脏终末细胞（TC）和骨髓源性间充质干细胞（BMSC）的细胞表面标记物。**
收集的细胞如A和D所示。流式细胞术分析表明，心脏TC的间充质标记物CD29（B）作为BMSC（E）均呈阳性，而造血标记物CD45（C）作为BMSCF则呈阴性。包含未标记的单元格（黑色）控件以进行比较。FSC：前向散射；SSC，侧面散射。

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这项工作得到了国家自然科学基金（81200169）、上海市教委创新计划（13YZ014）、上海市委高校青年教师基金（2012年，肖军）的资助，上海大学创新基金（sdcx2012038至肖军）和上海市教委支持的高校教师产学研一体化项目（2014年至肖军。

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[9] Rusu MC、Jianu AM、Mirancea N、Didilescu AC、Ménoiu VS等（2012），气管上皮细胞。细胞分子医学杂志16:401–405。10.1111/j.1582-4934.2011.01465.x号-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

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