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临床试验
.2015年1月12日21:12-25。
电子收集2015。

圆锥角膜患者角膜上皮中赖氨酰氧化酶和胶原基因表达的减弱与疾病严重程度相对应

附属公司
临床试验

圆锥角膜患者角膜上皮中赖氨酰氧化酶和胶原基因表达的减弱与疾病严重程度相对应

罗悉特等。 摩尔-维斯. .

摘要

目的:圆锥角膜(KC)的特征是由于角膜变薄和结构异常导致进行性视力丧失。据推测,KC是由胶原水平失调和胶原纤维成熟酶赖氨酰氧化酶(LOX)引起的。此外,目前尚不清楚角膜上皮细胞解除调控的基因表达是否影响KC发病机制。我们研究了(i)KC角膜上皮中LOX、i型胶原(COL IA1)、IV型胶原(COL IVA1)、MMP9和IL6基因的表达,(ii)验证了它们在患者组织中的表达水平,以及(iii)与KC疾病严重程度相关的表达水平。本研究的主要目的是评估这些基因在KC进展中的重要性。

方法:我们分析了大量KC患者(90眼)角膜上皮清创中关键蛋白LOX、胶原蛋白(COL IA1和COL IVA1)、MMP9和IL6的基因表达水平,并将其与无KC的对照组患者(52眼)进行比较。我们测量了与对照组相比KC患者眼泪中的总LOX活性。我们还通过免疫组织化学(IHC)将接受角膜移植术的KC患者(27眼)与健康供体角膜(15眼)的主要组织中LOX和胶原蛋白的蛋白表达水平进行了关联。

结果:我们观察到KC角膜上皮中LOX转录水平显著降低,KC泪液中LOX活性与疾病严重程度相关。KC中胶原转录物也减少,而MMP9转录物水平上调,并与疾病严重程度相关。KC患者IL6中度升高。IHC显示,与健康供体角膜相比,KC患者角膜上皮中LOX和基底膜中IV型胶原的蛋白表达水平降低。

结论:数据表明,KC角膜的结构畸形可能取决于胶原蛋白和LOX的表达减少,以及角膜上皮细胞升高的MMP9。

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数字

图1
图1
KC患者角膜上皮细胞LOX mRNA表达水平降低。在52个对照组和90个KC样本的角膜上皮细胞中测量转录水平。LOX基因的相对表达(一个)对照组与KC上皮组;(B类)患者按KC临床分级分层(0级=对照)。
图2
图2
KC角膜上皮胶原基因表达减弱。从52个对照组和90个KC角膜上皮样品中测量COL IA1和COL IVA1的相对基因表达值。的相对基因表达(一个)对照组与KC组的COL IA1和COL IVA1;(B类)COL IA1和COL IVA1 mRNA水平按KC临床分级分层。C类:LOX(y轴)和COL IA1(x轴)相对基因表达水平的线性回归分析。每个圆代表一只眼睛。D类:LOX(y轴)和COL IVA1(x轴)相对基因表达水平的线性回归分析。每个圆圈代表单个的眼睛。E类:COLI A1(y轴)和COL IVA1(x轴)的相对基因表达水平的线性回归分析。每个圆圈代表一只眼睛。
图3
图3
在KC中MMP9和IL6基因表达升高,并在52个对照组和90个KC样品的角膜上皮中测量MMP9与IL6的mRNA水平。的相对表达式值(一个)对照组与KC组的MMP9和IL6;(B类)MMP9和IL6 mRNA水平按KC临床分级分层。
图4
图4
KC患者眼泪中的LOX活性降低。30份对照样品和62份KC样品眼泪中的LOX活性表示为相对荧光单位/ml(RFU/ml)(一个)对照组与KC(*:KC活性与对照组相比p=0.016);B类)KC临床分级不同。
图5
图5
KC角膜中LOX蛋白水平降低。代表性显微照片显示LOX染色(棕色),细胞核苏木精复染(蓝色)。如箭头所示,在上皮层中观察到染色。KC和对照角膜的三个独立代表性样品以40倍放大倍率呈现。比例尺:10µm。
图6
图6
免疫组织化学(IHC)实验的对照染色。IHC研究用对照染色载玻片的40倍放大显微照片;一个-C类:KC患者角膜;D类-F类:对照供体角膜。肌动蛋白染色(一个D类); 阴性对照,无一级抗体,仅二级抗体(B类E类); 苏木精伊红(H&E)染色(C类F类). 比例尺:10µm。
图7
图7
KC角膜中的胶原蛋白I蛋白水平降低。代表性的显微照片显示COL I(棕色)染色,细胞核用复染苏木精(蓝色)染色。在角膜基质中观察到染色,如箭头所示。KC和对照角膜的三个独立代表性样品以40倍放大倍率呈现。比例尺:10µm。
图8
图8
KC角膜中IV型胶原蛋白水平降低。代表性显微照片显示COL IV(棕色)染色,细胞核苏木精(蓝色)复染。如箭头所示,在基底膜和直接亚上皮中观察到染色。KC和对照角膜的三个独立代表性样品以40倍放大倍率呈现。比例尺:10µm。

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引用人

工具书类

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