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.2016年4月;63(4):1063-73.
doi:10.1016/j.jvs.2014.09.067。 Epub 2014年11月6日。

用抗生素预处理心包补片不会改变体内补片的愈合

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用抗生素预处理心包补片不会改变体内补片的愈合

白化龙等。 血管外科杂志. 2016年4月.

摘要

背景:在外科植入假体材料之前,通常要进行抗生素预处理。我们之前的研究表明,植入动脉后,心包补片被巨噬细胞和动脉干细胞浸润。我们假设抗生素预处理会减少渗入斑块的细胞数量,从而可能影响早期新生内膜的形成。

方法:牛心包补片在植入Wistar大鼠肾下主动脉前用生理盐水、杆菌肽(500 U/mL)或头孢氨苄(10 mg/mL)预处理30分钟。在第7天或第30天取回贴片,并进行组织学和细胞浸润分析。用免疫荧光和免疫组织化学方法检测增殖、凋亡、血管细胞特性以及M1和M2巨噬细胞亚型的标记。用Western blot分析提取的蛋白质。

结果:第7天,用杆菌肽或头孢氨苄预处理的心包贴片显示出与对照贴片相似的新生内膜增厚(P=.55)和细胞浸润(P=.42)。经抗生素预处理的贴片显示出与对照贴片相似的增殖(P=0.09)和凋亡(P=0.84)。预处理贴片中新生内膜的细胞成分与对照贴片相似,有一层薄内皮层覆盖在一层薄平滑肌细胞上(P=.45),并且含有相似数量的CD34阳性(P=.26)和血管内皮生长因子受体2阳性(P=0.31)细胞。有趣的是,贴片体内的巨噬细胞较少(P=0.0003),内皮祖细胞减少(P=0.051)。在任何斑块内或周围均未发现M1巨噬细胞。贴片周围有M2巨噬细胞,对照贴片和抗生素预处理贴片周围的M2巨噬细胞数量无差异(P=0.24)。在第30天,对照贴片和经抗生素预处理的贴片之间的新生内膜厚度没有差异(P=.52)。

结论:用抗生素杆菌肽或头孢氨苄预处理牛心包补片对补片的早期愈合没有不利影响,与对照补片相比,新生内膜厚度、细胞浸润和M2巨噬细胞数量相似。这些结果表明,使用心包补片的补片血管成形术的宿主血管反应是适应性重塑(如动脉愈合)。

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数字

图1
图1
心包补丁的组织学,第7天。A)植入主动脉后第7天,心包补片的代表性低倍显微照片(40倍),对照组(左面板)或抗生素预处理组(中面板和右面板)。A、 外膜;P、 补丁;五十、 流明;N、 新生内膜;比例尺表示1 mm。B)植入主动脉后第7天,心包补片的代表性高倍显微照片(400x),对照组(左面板)或抗生素预处理组(中面板和右面板);上面一行显示新生内膜,下面一行显示下层斑块。箭头,新生内膜;P、 补丁;比例尺表示100μm。C)新生内膜厚度条形图;p=0.55,方差分析。D)外膜厚度条形图,第页=0.65,方差分析。E)贴片细胞数条形图,第页=0.42,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。F)外膜细胞数条形图,第页=0.96,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。
图2
图2
心包补片的增殖和凋亡,第7天。A)第7天心包补片的免疫组织化学分析,对照组(左柱)或抗生素预处理组(中柱和右柱);上排显示斑块,下排显示外膜。PCNA分析;黄色箭头表示有代表性的阳性细胞。P、 补丁;A、 外膜;比例尺表示20μm(放大1000倍)。B)斑块增殖指数条形图;第页=0.094,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。C)外膜增殖指数条形图;第页=0.321,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。D)第7天心包补片的免疫组织化学分析,对照组(左柱)或抗生素预处理组(中柱和右柱);上排显示斑块,下排显示外膜。裂解半胱天冬酶-3的分析;黄色箭头表示有代表性的阳性细胞。P、 补丁;A、 外膜;比例尺表示20μm(放大1000倍)。E)贴片中细胞凋亡指数的条形图;第页=0.842,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。F)外膜细胞凋亡指数条形图;第页=0.586,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。
图3
图3
第7天心包补片新生内膜浸润细胞分析。A)心包补片的免疫组织化学分析,第7天,低倍图像,补片或对照(第一列)或抗生素预处理(第二列和第三列);分析:第一行,CD31;第二行,α-actin。P、 补丁;N、 新生内膜;五十、 流明;比例尺表示500μm;n=3-5。B)第7天高倍图像心包补丁的免疫组织化学分析,对照组(上排)或抗生素预处理组(中排和下排);分析:第一列,CD31;第二列,α-actin,第三列,CD34,第四列,VEGFR2。五十、 流明;P、 补丁;比例尺表示100μm。C)新生内膜平均平滑肌细胞(SMC)密度(积分光密度/面积)条形图;第页=0.243,方差分析,n=3-5。D)新生内膜CD34阳性细胞平均数条形图;第页=0.257,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。E)新生内膜中VEGFR2阳性细胞平均数条形图;第页=0.309,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。
图4
图4
分析第7天渗入心包补丁的细胞。A)心包补片的免疫荧光,第7天,对照组(左柱)或抗生素预处理组(中柱和右柱)。上排显示CD34(绿色)、VEGFR2(红色)、DAPI(蓝色),黄色箭头显示CD34和VEGFR2反应性共存的细胞。下一行显示CD68(绿色)和DAPI(蓝色),黄色箭头显示CD68阳性细胞。背景自体荧光显示胶原蛋白。P、 补丁;比例尺表示50μm。B)斑块中计数的所有细胞中CD34-VEGFR2双阳性细胞百分比条形图,第页=0.051,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。C)斑块中计数的所有细胞中CD68阳性细胞百分比条形图,第页=0.0003,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。D)外膜免疫荧光,第7天,对照组(左柱)或抗生素预处理组(中柱和右柱)。上排显示CD34(绿色)、VEGFR2(红色)、DAPI(蓝色),黄色箭头显示细胞同时定位CD34和VEGFR2反应性。下一行显示CD68(绿色)和DAPI(蓝色),黄色箭头显示CD68阳性细胞。A、 外膜。E)外膜中计数的所有细胞中CD34-VEGFR2双阳性细胞百分比条形图,第页=0.06,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。F)外膜中计数的所有细胞中CD68阳性细胞百分比条形图,第页<0.0001,方差分析;每个补丁的4个高功率场的平均值;n=3-5。G)典型的Western blot显示斑块中CD34、VEGFR2、CD68和GAPDH的表达;左车道,控制;中间巷,杆菌肽;右车道,头孢氨苄(n=2)。
图5
图5
巨噬细胞亚型浸润心包斑块的分析,第7天。A)左侧显示第7天心包补片的免疫荧光,补片(上排)或外膜(下排)。贴片可以是对照组(左栏),也可以是用抗生素预处理过的(中栏和右栏)。CD68(红色)、iNOS(绿色)、DAPI(蓝色)的分析。P、 补丁;A、 外膜。比例尺表示100μm。右侧面板是一个条形图,显示CD68/iNOS双阳性细胞与斑块和外膜中CD68阳性细胞总数的百分比。B)左侧显示第7天心包补片的免疫荧光,补片(上排)或外膜(下排)。贴片可以是对照组(左栏),也可以是用抗生素预处理过的(中栏和右栏)。分析CD68(红色)、TGM2(绿色)、DAPI(蓝色)。P、 补丁;A、 外膜。比例尺表示100μm,黄色箭头表示双阳性细胞。右侧面板是一个条形图,显示CD68/TGM2双阳性细胞与斑块和外膜中CD68阳性细胞总数的百分比(ANOVA,p=0.2353)。C)左面板显示第7天心包补片TGM2的免疫组化,无论是对照组(左柱)还是抗生素预处理组(中柱和右柱)。P、 补丁;A、 外膜。比例尺表示100μm,黄色箭头表示阳性单元格。右侧面板是一个条形图,显示斑块和外膜中TGM2阳性细胞的百分比(ANOVA,p=0.3761)。D)左侧显示第7天心包补片的免疫荧光,补片(上排)或外膜(下排)。贴片可以是对照组(左栏),也可以是用抗生素预处理过的(中栏和右栏)。CD68(红色)、IL-10(绿色)、DAPI(蓝色)分析。P、 补丁;A、 外膜。比例尺表示100μm,黄色箭头表示双阳性细胞。右侧面板是一个条形图,显示CD68和IL-10双重阳性细胞与斑块和外膜中CD68阳性细胞总数的百分比(ANOVA,p=0.3740)。

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