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.2014年11月;9(11):2607-23.
doi:10.1038/nprot.2014.179。 Epub 2014年10月9日。

脂肪酰化蛋白中棕榈酰化的单细胞原位成像

附属公司

脂肪酰化蛋白中棕榈酰化的单细胞原位成像

鑫鑫高等。 Nat协议. 2014年11月.

摘要

解剖脂肪酰化蛋白的亚细胞分布是理解调节蛋白在细胞内运动和功能的分子机制的关键。本协议描述了如何使用点击化学、邻近连接和荧光显微镜对感兴趣的脂肪酰化蛋白中的棕榈酰化进行单细胞成像。该方案中的初始步骤涉及优化条件,以(i)将棕榈酸的炔基类似物代谢结合到细胞蛋白中,结合点击化学,和(ii)使用自动荧光显微镜用一级抗体检测感兴趣的特定蛋白,然后(iii)感兴趣的目标脂肪酰化蛋白(例如Wnt、Sonic Hedgehog或H-Ras)的棕榈酰化成像。此外,我们概述了利用亚细胞器和/或总蛋白组棕榈酰化对特定脂肪酰化蛋白进行成像的策略,并讨论了根据实验设计需要给予的特殊考虑。可点击脂肪酸与邻近连接的应用可能在脂肪酰化细胞生物学的研究中有很好的应用前景。整个方案需要~3周才能完成。

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引用人

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