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.2014年7月10日；9（7）：e102408。
doi:10.1371/journal.pone.0102408。 2014年电子收集。

自噬在内皮细胞对电离辐射反应中的重要作用

迪米特拉·卡拉米达 1, 伊利亚斯五世卡拉古尼斯 1, 亚历山德拉·贾特罗马诺拉基 2, 迈克尔·库库拉基斯 1
附属公司

自噬在内皮细胞对电离辐射反应中的重要作用

迪米特拉·卡拉米达等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

目标：血管损伤是放射治疗副作用的重要因素。本研究的目的是深入了解内皮细胞自噬反应的放射生物学。

方法和材料：在辐射后4天和8天，将人脐血管内皮细胞（HUVEC）暴露于2 Gy电离辐射（IR）下，并使用共焦显微镜和western blot分析进行研究。还研究了自噬通量在HUVEC放射敏感性中的作用。

结果：IR诱导LC3A（+）、LC3B（+）和p62细胞质空泡的积累，而在溶酶体标记物（LAMP2a和CathepsinD）双重免疫染色中，自噬体流量受到明显抑制。然而，诱导的自噬相关蛋白（ATF4、HIF1α、HIF2α、Beclin1）排除了辐射对自噬起始蛋白表达的最终抑制作用。HUVEC暴露于SMER28（一种mTOR诱导的自噬诱导剂）后，proLC3和LC3A，B-I蛋白表达增强，自噬通量加快。用SMER28对HUVEC进行预处理，可防止IR诱导的自噬通量受阻，并具有抗辐射性。用siRNAs抑制LC3A/LC3B蛋白导致放射增敏。

结论：目前的数据为针对自噬途径制定新的放射防护政策提供了依据。

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利益冲突声明

竞争利益：提交人声明不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。HUVEC共焦免疫荧光显微镜图像LC3A（绿色）/LC3B（红色）（图1a）、LC3A、LAMP2a（红色）、LC3B、CathepsinD（绿色）和p62（红色）。
共刻度显示为黄色斑点。图1a：LC3A（核周定位）和LC3B（细胞质定位）的自噬体染色。辐射诱导LC3A和LC3B自噬体在辐射后4天和8天的积累（1a2,1a3）。图1b1和1c1显示了LC3A与LAMP2a以及LC3B与CathepsinD的明显共定位程度。照射后4天和8天，缺乏共定位，这表明自噬通量受到抑制（1b2、1b3、1c2、1c3）。图1d显示了p62在对照细胞中的细胞质差和核密度高（1d1）；照射后第4天和第8天（1d2,3），细胞质中p62明显富集。上述免疫染色的荧光强度图示如图1e所示。图1f显示了HUVEC颗粒部分的蛋白质印迹分析。
图2
图2。Beclin 1（绿色）、ATF4（绿色）和HIF2α（红色）的HUVEC共焦图像（图2a）。
Beclin 1在照射后4天和8天明显积累（2a2，2a3）。辐照后4天和8天ATF4（箭头）的强烈核定位如图面板2b所示，而HIF2α也在HUVEC的细胞质和细胞核（箭头）中诱导（图面板2c）。上述免疫染色的荧光强度图示如图1d所示。图1e显示了HUVEC颗粒部分的蛋白质印迹分析。
图3
图3。暴露于SMER28 2天前后的HUVEC共焦图像LC3A（绿色）/LC3B（红色）（图3a1,2）、LC3A、LAMP2a（红色）、LC3B、CathepsinD（绿色）（图5a5,6）和p62（红色）。
共线性化显示为黄色结构。SMER28诱导LC3A/LC3B表达并与溶酶体标记共定位，而p62细胞质含量降低。上述免疫染色的荧光强度图示如图3b所示。图3c显示了HUVEC蛋白上清液或颗粒的蛋白质印迹图像。
图4
图4。HUVEC培养细胞暴露于2 Gy IR后的共焦图像，有无SMER28预培养2天（图4a）。
LC3A（绿色）/LC3B（红色）（图3a-1,2）、LC3A（绿色）/LAMP2a（红色）（图3a3,4）、LC3B（红色）/CathepsinD（绿色）（图3a5,6）和p62（红色）（图3a7,8）。共线性化显示为黄色结构。上清液和颗粒蛋白组分的蛋白质印迹图像如图4b所示。
图5
图5。LC3A/LC3B的共焦显微镜，与相关LC3 siRNA孵育后LC3A（图5a2）和LC3B（图5a）的特异性抑制。
辐射剂量和响应曲线证实，当在辐射前实现LC3A/LC3B表达抑制时，曲线向右移动，而当用无毒剂量的mTO非依赖性自噬诱导剂SMER28预培养细胞时，曲线向右移（图5b）。在不同SMER28浓度下暴露1-3天后，HUVEC细胞的存活曲线证实了25µM的无毒作用（图5c）。比较最低点细胞群的辐射剂量和恢复曲线（8第个天）与指数增长开始（12第个当细胞预先与SMER28孵育时，显示出增强的恢复潜力（图5d）。
图6
图6。γη2áX免疫染色后的共焦显微镜显示，对照组（6a1，6a3）和受照射细胞（6a2，6a4）的细胞核内有红色病灶，用SMER28预孵育有（6a3，6a2）和没有（6a4，6a1）的细胞核中有红色病灶（图6a）。
细胞核内γH2AX焦点的计算机计算。统计显著性是指与对照细胞的比较（图6b）。
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    1. Baker DG、Krochak RJ（1989）《微血管系统对辐射的反应：综述》。癌症投资7:287–294。-公共医学
    1. Belka C、Budach W、Kortmann RD、Bamberg M（2001）辐射诱导的中枢神经系统毒性-分子和细胞机制。英国癌症杂志85:1233-1239。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Koukourakis MI（2012）《辐射损伤和辐射防护剂：分子医学时代的新概念》。英国广播杂志85:313–330。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Xie Z，Klonsky DJ（2007），自噬体形成：核心机制和适应。《自然细胞生物学》9:1102–1109。-公共医学

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赠款和资金

该研究由“训练和终身学习-ARISTEIA项目”资助，编号520，ESPA 2007-2013，GGET决定编号12605/26.09.2012。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。