跳到主页面内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2014年6月21日;11:115。
内政部:10.1186/1742-2094-11-115。

格列美脲降低巨噬细胞CD14表达和细胞因子分泌

隶属关系
免费PMC文章

格列美脲降低巨噬细胞CD14表达和细胞因子分泌

维多利亚英厄姆等等。 神经炎学杂志. .
免费PMC文章

摘要

背景:阿尔茨海默病(阿尔茨海默病)患者大脑内的蛋白质沉积(微胶质瘤)与阿尔茨海默病(阿尔茨海默病)相关。由于激活的小胶质细胞分泌的细胞因子被认为与这些神经退行性疾病的发病机制有关,因此抑制细胞因子产生的化合物已被确定为潜在的治疗靶点。CD14是一种糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白,是受体复合体的一部分,它介导小胶质细胞对朊病毒病(PrP82-146)、AD(淀粉样蛋白-β(aβ)42)和PD(α-突触核蛋白(αSN))中积累的肽的反应。由于使用格列美脲(一种用于治疗糖尿病的磺脲类药物)治疗后,细胞会释放出一些GPI锚定蛋白,因此研究了格列美脲对培养巨噬细胞CD14表达和细胞因子生成的影响。

方法:用格列美脲或磷脂酰肌醇(PI)-磷脂酶C(PLC)处理原264细胞和小胶质细胞,用ELISA和免疫印迹法分析细胞受体的表达。然后用Aβ42、αSN、PrP82-146或脂多糖(LPS)孵育细胞,测定Toll样受体(TLR)-4、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-1和IL-6的含量。

结果:格列美脲从264个原始细胞和小胶质细胞中释放出CD14。使用格列美脲预处理可显著降低RAW 264和与LPS、Aβ42、αSN和PrP82-146培养的小胶质细胞分泌TNF、IL-1和IL-6。格列美脲还降低了LPS、Aβ42、αSN和PrP82-146诱导的TLR-4转位到与细胞活化相关的膜筏中。用PI磷脂酶C(PLC)消化264个原始细胞后,也观察到格列美脲的这些作用。此外,格列美脲的作用被GPI-PLC的药理抑制所阻断。细胞因子的产生依赖于CD14;CD14基因敲除小鼠的小胶质细胞减少,并被CD14抗血清阻断。

结论:raw264和小胶质细胞对Aβ1-42、αSN、PrP82-146和LPS的反应依赖于CD14的表达。格列美脲通过激活GPI-PLC诱导细胞分泌CD14,从而减少对Aβ42、αSN、PrP82-146和LPS的细胞因子生成。这些结果表明格列美脲是一种新型的抗炎药,可以改变神经退行性疾病的进展。

数字

图1
图1
格列美脲从264个原始细胞中释放CD14。(一)用对照培养基(□)或格列美脲(■)处理一小时的原始264细胞中CD14的含量,如图所示。数值为平均值± 标准差,来自四次进行的三次实验,n = 12。(二)用对照培养基(□)或格列美脲(■)处理1小时后,原始264细胞上清液中CD14的含量。数值为平均值± 标准差,来自四次进行的三次实验,n = 12。(三)免疫印迹显示CD14,PrP含量C用对照培养基(i)或5μM格列美脲(ii)处理1小时的原始264细胞提取物中的CD55和小窝蛋白。(四)用对照培养基、5μM格列美脲或5μM格列美脲或5μM格列吡嗪处理1小时后,细胞(□)或上清液(■)中CD14的含量。数值为平均单位CD14 ± SD,从三次重复的实验中得出,n = 9。*细胞CD14明显少于对照细胞。**上清液CD14明显大于对照组上清液。(五)印迹显示经格列美脲浓度处理1小时的小胶质细胞上清液中CD14的含量。
图2
图2
格列美脲可减少与PrP82-146共孵育的264个原始细胞的细胞因子分泌。(一)用PrP82-146(●)、PrP82-146crambled(■)或PrP82-146和1μg/ml多粘菌素B(□)孵育的原始264细胞产生的TNF浓度。从1SD中取12次平均值,进行三次试验。(二)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并用PrP82-146培养的原始264细胞产生的TNF浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(三)使用格列美脲(0.3至5μM)处理1小时的原始264细胞的细胞CD14含量与添加50μM PrP82-146后的TNF生成量之间存在显著相关性,Pearson系数 = 0.858,P < 0.01。(四)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并用PrP82-146培养的原始264细胞产生的IL-1β浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(五)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并用PrP82-146培养的原始264细胞产生的IL-6浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。
图3
图3
格列美脲可减少与Aβ孵育的264个原始细胞的细胞因子分泌。(一)生264细胞与Aβ孵育产生的肿瘤坏死因子浓度1–42岁●(β)42–1岁(■)或Aβ1–42岁1μg/ml多粘菌素B(□)。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(二)用对照培养基(●)5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并与Aβ孵育的原始264细胞产生的TNF浓度1–42岁. 数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(三)用对照培养基(●)5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并与Aβ孵育的原始264细胞产生的IL-1β浓度1–42岁. 数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(四)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并与Aβ孵育的原始264细胞产生的IL-6浓度1–42岁. 从1SD中取12次平均值,进行三次试验。
图4
图4
格列美脲可减少与αSN孵育的264个原始细胞的细胞因子分泌。(一)用αSN(●)、βSN(■)或αSN和1μg/ml多粘菌素B(□)孵育的原264细胞产生的TNF浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(二)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并与αSN孵育的原始264细胞产生的TNF浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(三)用对照培养基(●)或5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并用αSN孵育的原始264细胞产生的IL-1β浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(四)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(□)预处理并与αSN孵育的原始264细胞产生的IL-6浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。
图5
图5
格列美脲减少与PrP82-146或Aβ孵育的小胶质细胞分泌细胞因子1–42岁. (一)用对照培养基(■)、5μM格列美脲(□)或5μM格列吡嗪(条纹棒)预处理1小时,并用50μM PrP82-146或50μM Aβ培养的小胶质细胞产生的TNF浓度1–42岁如图所示。数值为3次三次重复试验的平均值± SD,n = 9。*TNF显著低于与肽孵育的对照细胞。(二)用对照培养基(●)或5μM格列美脲预处理1小时(□),或用5μM格列美脲预处理1小时,用PBS(条纹条)清洗3次,并用50μM PrP82-146或50μM Aβ培养,产生的TNF浓度1–42岁如图所示。数值为3次三次重复试验的平均值± SD,n = 9。*TNF显著低于与肽孵育的对照细胞。
图6
图6
RAW264和小胶质细胞从格列美脲诱导的细胞因子生成抑制中恢复。(一)用对照培养基(□)或5μM格列美脲处理的264个原始细胞中CD14的含量,如图所示(■)。数值为两次三次试验的平均值± SD,n = 6。(二)用对照培养基(□)或5μM格列美脲预处理一段时间(■)并用50μM PrP82-146培养24小时后产生的TNF浓度。数值为两次三次试验的平均值± SD,n = 6。(三)用对照培养基(□)或5μM格列美脲处理的小胶质细胞中CD14的含量,如图所示(■)。数值为两次三次试验的平均值± SD,n = 6。(四)用浓度为146μg/ml的PRGLim培养基(■)培养24μμg/ml的对照细胞(□)培养24μM。数值为两次三次试验的平均值± SD,n = 6。
图7
图7
格列美脲减少脂多糖(LPS)诱导的细胞因子分泌。(一)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(■)预处理并与LPS孵育的原始264细胞产生的TNF浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(二)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(■)预处理并与LPS孵育的原始264细胞产生的IL-1β浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(三)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(■)预处理并与LPS孵育的原始264细胞产生的IL-6浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(四)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列吡嗪(■)预处理并与LPS孵育的小胶质细胞产生的TNF浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(五)用对照培养基(□)或格列美脲(如图所示)预处理并用10 ng/ml LPS培养的原始264细胞产生的TNF浓度。三次试验̴均为̴n。(六)用格列美脲(0.3至5μM)处理的原始264细胞的CD14含量与10 ng/ml LPS产生的TNF浓度之间存在显著相关性,Pearson系数 = 0.886。
图8
图8
PI-PLC消化减少了原264细胞的细胞因子分泌。(一)用对照培养基(□)或PI-PLC(■)预处理的原264细胞经50μM PrP82-146,Aβ孵育后产生的TNF浓度1–42岁α或SN。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。*TNF显著低于与肽孵育的对照细胞。(二)用对照培养基(□)或PI-PLC(■)预处理后,用50μM PrP82-146,Aβ孵育的原264细胞产生IL-1β的浓度1–42岁或αSN。数值为4次重复实验的平均值± SD,n = 8。*IL-1β明显低于肽孵育的对照细胞。(三)用对照培养基(□)或PI-PLC(■)预处理后,用50μM PrP82-146,Aβ孵育的原264细胞产生IL-6的浓度1–42岁或αSN。进行8次重复试验。*IL-6明显低于用肽孵育的对照细胞。*IL-6明显低于用肽孵育的对照细胞。
图9
图9
用PI-PLC消化的原264细胞对脂多糖(LPS)反应迟钝。(一)用对照培养基(●)、PI-PLC(○)或热灭活的PI-PLC(■)预处理并与LPS孵育的原264细胞产生的TNF浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(B) 用对照培养基(●)、PI-PLC(○)或热灭活的PI-PLC(■)预处理后与LPS孵育的原264细胞产生IL-1β的浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。(三)用对照培养基(●)、PI-PLC(○)或热灭活的PI-PLC(■)预处理后与LPS孵育的原264细胞产生IL-6的浓度。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。
图10
图10
格列美脲诱导的免疫抑制作用可被pCMPS逆转。(一)在对照培养基(□)或200μM pCMPS(■)存在下,用对照培养基或5μM格列美脲处理1小时的原始264细胞中CD14的含量。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。*CD14显著高于格列美脲治疗的细胞。(二)用浓度为50μM的格列美脲(p264μM)和50μM的格列美脲(p264μM)和50μM的格列美脲(p264m)培养基1–42岁或50μMαSN。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。*TNF显著低于与肽孵育的对照细胞。(三)用对照培养基(●)、5μM格列美脲(○)或5μM格列美脲和200μM pCMPS预处理的原始264细胞产生的TNF浓度()如图所示,用LPS孵育。从1SD中取12次平均值,进行三次试验。(四)用对照培养基(□)、5μM格列美脲(■)或5μM格列美脲和200μM pCMPS(条纹条)预处理的小胶质细胞产生的TNF浓度,并用50μM PrP82-146或50μM Aβ培养1–42岁. 数值为两次三次试验的平均值± SD,n = 6。*TNF显著低于与肽孵育的对照细胞。
图11
图11
CD14介导肽刺激的原始264细胞分泌细胞因子。(一)用抗CD14(■)、PrP抗血清预处理的原264细胞产生TNF的浓度C(□)或CD55(条纹条),与50μM PrP82-146,Aβ一起孵育1–42岁α或SN。数值为3次三次重复试验的平均值± SD,n = 9。*TNF明显低于与肽孵育的对照细胞。(二)CD14野生型(□)或CD14基因敲除(■)小鼠的小胶质细胞在PrP82-146或Aβ作用下产生的TNF浓度1–42岁. 数值为3次三次重复试验的平均值± SD,n = 9。*TNF明显低于与肽孵育的CD14野生型细胞。
图12
图12
PrP82-146导致Toll样受体(TLR)-4易位到筏中。(一)DRM中TLR-4的百分比来自经PrP82-146(●)或PrP82-146加扰(○)处理的原始264细胞。数值为3次三次重复试验的平均值± SD,n = 9。(二)用对照培养基(□)或50μM Aβ处理的原264细胞,得到DRMs中的%TLR-41–42岁,Aβ42–1岁,αSN或βSN,如图所示(■)。数值为3次三次重复试验的平均值± SD,n = 9。*TLR-4明显高于对照细胞。(三)RAW 264细胞与PrP82-146(○),Aβ孵育1–42岁(●)或αSN(□)(6至50μM)。PrP82-146细胞中TLR-4与肿瘤坏死因子(TNF)呈显著相关,Pearson系数 = 0.88,Aβ1–42岁皮尔逊系数 = 0.78,αSN皮尔逊系数 = 0.86。(四)脂多糖(LPS)孵育的264细胞筏板中TLR-4的百分比与肿瘤坏死因子(TNF)的产生有显著相关性,Pearson系数 = 0.887。
图13
图13
格列美脲可减少Toll样受体(TLR)-4的易位。(一)用对照培养基、5μM格列美脲或5μM格列吡嗪预处理并用对照培养基(□)或50μM PrP82-146(■)培养的原始264细胞筏中的%TLR-4。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。*TLR-4明显低于PrP82-146孵育的对照细胞。(二)用对照培养基、5μM格列美脲或5μM格列吡嗪预处理并用对照培养基(□)或50μM Aβ培养的原始264细胞筏中的%TLR-41–42岁(■). 数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。*TLR-4明显低于Aβ孵育的对照细胞1–42岁.(三)用对照培养基、5μM格列美脲或5μM格列吡嗪预处理并用对照培养基(□)或50μMαSN(■)培养的原始264细胞筏中的%TLR-4。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。*TLR-4明显低于αSN孵育的对照细胞。(四)用对照培养基、5μM格列美脲或5μM格列吡嗪(如图所示)预处理并用对照培养基(□)或10 ng/ml LPS(■)培养的原始264细胞筏中的%TLR-4。数值为4次三次实验的平均值± SD,n = 12。*TLR-4明显低于脂多糖(LPS)培养的对照细胞。

类似物品

查看所有类似文章

引用人7 文章

查看所有“引用人”文章

工具书类

    1. Schlachetzki JC,Hull M.阿尔茨海默病中的小胶质细胞激活。《阿尔茨海默病研究》2009;6(6):554–563-公共医疗
    1. Stalder M,Phinney A,Probst A,Sommer B,Staufenbiel M,Jucker M.APP23转基因小鼠脑中小胶质细胞与淀粉样斑块的关系。美国病理学杂志。1999年:第154页-项目管理咨询公司-公共医疗
    1. Zhang W,Wang T,Pei Z,Miller DS,Wu X,Block ML,Wilson B,Zhang W,Zhou Y,Hong J-S,Zhang J.聚集α-突触核蛋白激活小胶质细胞:导致帕金森病疾病进展的过程。FASEB J.2005;19(6):533–542-公共医疗
    1. 康姆斯CK,卡尔洛JC,Kao SC,兰德瑞斯GE。β-淀粉样蛋白刺激小胶质细胞和单核细胞导致TNFalpha依赖的诱导型一氧化氮合酶表达和神经元凋亡。神经学杂志。2001;21(4):1179–1188-项目管理咨询公司-公共医疗
    1. Klegeris A,Walker DG,McGeer PL.阿尔茨海默病β淀粉样肽与人类单核细胞系THP-1的相互作用导致肿瘤坏死因子α的蛋白激酶C依赖性分泌。《大脑》(1997年第1期)-公共医疗

出版物类型

网格术语

反馈