Epigenetic reprogramming of human lung cancer cells with the extract of bovine parthenogenetic oocytes

doi:10.1111/jcmm.12306

.2014年9月；18(9):1807-15.

doi:10.1111/jcmm.12306。 Epub 2014年5月30日。

牛孤雌生殖卵母细胞提取物对人肺癌细胞的表观遗传重编程

王振飞¹, 日诺道, 卢日·鲍, 烟花洞, 王海阳（Haiyang Wang）, 彭永汉, 岳永利, 于海泉

附属公司

PMID： 24889513
预防性维修识别码：下午419656
内政部： 10.1111/jcmm.12306

牛孤雌生殖卵母细胞提取物对人肺癌细胞的表观遗传重编程

王振飞等。细胞与分子医学杂志. 2014年9月.

.2014年9月；18(9):1807-15.

doi:10.1111/jcmm.12306。 Epub 2014年5月30日。

作者

王振飞¹, 日诺道, 卢日·鲍, 烟花洞, 王海阳（Haiyang Wang）, 彭永汉, 岳永利, 于海泉

附属

¹内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室，呼和浩特，中国。

PMID： 24889513
预防性维修识别码：下午419656
内政部： 10.1111/jcmm.12306

摘要

表观遗传学改变引起的肿瘤抑制基因沉默和原癌基因激活在肿瘤的发生和发展中起着重要作用。通过表观遗传调控重建肿瘤抑制基因和原癌基因表达之间的平衡是一种很有前途的癌症治疗策略。在本研究中，我们研究了卵母细胞提取物是否可以对癌细胞进行表观遗传学重组。将H460人肺癌细胞可逆渗透并与牛孤雌生殖卵母细胞提取物孵育。亚硫酸氢盐测序表明，牛孤雌生殖卵母细胞提取物在肿瘤抑制基因RUNX3和CDH1的启动子处诱导了显著的去甲基化，但在致癌多能性基因SOX2的启动子处未诱导去甲基化。染色质免疫沉淀显示，RUNX3和CDH1启动子处的组蛋白修饰被调节为转录激活状态，而SOX2启动子处的组蛋白修饰则被调节为转录抑制状态。相应地，牛孤雌生殖卵母细胞提取物逆转了RUNX3和CDH1的表观遗传沉默，并抑制了SOX2的表达。在功能水平上，H460细胞的增殖、凤尾鱼非依赖性生长、迁移和侵袭受到强烈抑制。这些结果表明，牛孤雌生殖卵母细胞提取物通过重塑启动子的表观遗传修饰，改变了癌细胞中抑癌基因和致癌基因的表达模式。牛孤雌生殖卵母细胞提取物可能提供一种有用的工具，用于对癌细胞进行表观遗传重编程，并用于剖析与肿瘤发生有关的表观遗传机制。

关键词：提取物；肺癌；致癌基因；孤雌生殖卵母细胞；重新编程；肿瘤抑制基因。

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数字

图1
用牛卵母细胞提取物处理H460细胞导致细胞去甲基化*运行NX3*和*CDH1型*发起人，但不是*SOX2标准*发起人。示意图表示CpG孤岛*运行NX3*和*CDH1型*亚硫酸氢盐序列的启动子和靶区*SOX2标准*发起人。开放的圈子(○) 表示未甲基化的CpG位点，闭合圆（•）表示甲基化的PpG位点。每个区域的甲基化水平表示为甲基化CpG位点的数量占未甲基化和甲基化Cp G位点总数的百分比。一与答：*P（P）*> 0.05; 一与b：*P（P）*< 0.05.

图2
用牛卵母细胞提取物处理改变了*运行NX3*,*CDH1型*和*SOX2标准*在H460细胞中。显示了对所示抑制（H3K27me3和H3K9me3）和激活（H3K9Ac和H3K4me3）组蛋白修饰的ChIP分析结果。误差条表示标准偏差（SD，n个= 3); **P（P）*< 0.05与未经处理和缓冲处理的细胞。

图3
用牛卵母细胞提取物处理可激活*运行NX3*和*CDH1型*，并抑制*SOX2标准*在两个mRNA上(A类)和蛋白质(B类)级别。处理细胞，将其返回培养6、24或48小时，然后进行实时PCR(A类)和蛋白质印迹(B类)分析。误差条代表SD(n个= 3); **P（P）*< 0.05与未经处理和缓冲处理的细胞***P（P）*< 0.01与未经处理和缓冲处理的细胞。Western blot检测到两种形式的CDH1。根据已发表的报告[33,34]，低分子量带（～105 kD）是成熟CDH1，而高分子量带是前体proCDH1。

图4
牛卵母细胞提取物处理不会影响H460细胞中小卫星MS32的α卫星和逆转录病毒长末端重复序列（LTR）的DNA甲基化水平。开放的圈子(○) 表示未甲基化的CpG位点，闭合圆（•）表示甲基化的PpG位点。每个区域的甲基化水平表示为甲基化CpG位点相对于非甲基化和甲基化Cp位点总数的百分比。一与答：*P（P）*> 0.05.

图5
牛卵母细胞提取物抑制增殖(A类)和非独立增长(B类)H460细胞。误差条代表SD(n个= 3); **P（P）*< 0.05与缓冲处理电池***P（P）*< 0.01与缓冲处理细胞；比例尺：100μm。

图6
用牛卵母细胞提取物处理可抑制H460细胞的迁移和基质胶入侵。误差条代表SD(n个= 3); **P（P）*< 0.05与缓冲处理电池***P（P）*< 0.01与缓冲处理细胞；比例尺：50μm。

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1. Roman-Gomez J、Jimenez-Velasco A、Agirre X等。LINE-1反转录转座元件的启动子低甲基化激活正/反义转录并标志着慢性髓系白血病的进展。致癌物。2005;24:7213–23.-公共医学
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[1] 黄玉伟，郭CT，斯通K，等。表观遗传学与化学预防概述。FEBS信函。2011;585:2129–36.-项目管理咨询公司-公共医学

[2] 黄玉伟，郭CT，斯通K，等。表观遗传学与化学预防概述。FEBS信函。2011;585:2129–36.-项目管理咨询公司-公共医学

[3] Sharma S，Kelly TK，Jones PA。癌症的表观遗传学。致癌。2010;31:27–36.-项目管理咨询公司-公共医学

[4] Sharma S，Kelly TK，Jones PA。癌症的表观遗传学。致癌。2010;31:27–36.-项目管理咨询公司-公共医学

[5] Yoo CB，Jones PA。癌症的表观遗传治疗：过去、现在和未来。Nat Rev药物发现。2006;5:37–50.-公共医学

[6] Yoo CB，Jones PA。癌症的表观遗传治疗：过去、现在和未来。Nat Rev药物发现。2006;5:37–50.-公共医学

[7] Roman-Gomez J、Jimenez-Velasco A、Agirre X等。LINE-1反转录转座元件的启动子低甲基化激活正/反义转录并标志着慢性髓系白血病的进展。致癌物。2005;24:7213–23.-公共医学

[8] Roman-Gomez J、Jimenez-Velasco A、Agirre X等。LINE-1反转录转座元件的启动子低甲基化激活正/反义转录并标志着慢性髓系白血病的进展。致癌物。2005;24:7213–23.-公共医学

[9] Hamm CA，Xie H，Costa FF等。用5-氮杂-2′-脱氧胞苷治疗后，大鼠软骨肉瘤细胞的整体去甲基化导致致瘤性增加。《公共科学图书馆·综合》。2009;4:e8340。-项目管理咨询公司-公共医学

[10] Hamm CA，Xie H，Costa FF等。用5-氮杂-2′-脱氧胞苷治疗后，大鼠软骨肉瘤细胞的整体去甲基化导致致瘤性增加。《公共科学图书馆·综合》。2009;4:e8340。-项目管理咨询公司-公共医学

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