跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

政府意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https(https)://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年5月;3(1):46-53.
doi:10.15283/ijsc.2010.3.1.46。

分化海马神经干细胞的细胞周期退出时间

附属公司

分化海马神经干细胞的细胞周期退出时间

埃琳娜·雅尔维宁等。 国际J干细胞. 2010年5月.

摘要

神经干细胞有助于哺乳动物一生中特定位置的脑组织周转。干细胞分化与终末有丝分裂和细胞周期退出有关,但尚不清楚这些时间和信号是如何相互联系的。在这里,我们研究了成年哺乳动物细胞系海马干细胞分化过程中细胞周期退出特征与形态学变化的比较。我们的结果表明,细胞特异性基因通路诱导快速而稳健,只需一天,而细胞周期退出机制则较慢,需要几天才能完全执行。海马分化与表观遗传变化有关,如Ezh2下调和组蛋白甲基化。在培养基中,一小部分干细胞能够抵抗分化诱导的终末有丝分裂数周,并且可以通过重新添加有丝分裂生长因子恢复增殖。

关键词:细胞周期;分化;海马;神经干细胞。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
海马神经干细胞向星形胶质细胞系分化在体外A)对细胞RNA含量的分析表明,星形胶质细胞特异性基因GFAP mRNA的数量在分化开始一天后已经增加。在一个初始峰值和一些波动之后,信使核糖核酸含量稳定在稳态水平。误差条代表三倍之间的SEM。(B) 分化后,海马神经干细胞显示星形胶质细胞形态,GFAP免疫阳性。比例尺20μ米。
图2。
图2。
分化诱导的增殖和细胞周期变化。(A) 细胞数量在分化的前24至48小时内增加,并保持不变,直到减少,可能是由于凋亡。误差条代表三倍之间的SEM。细胞周期的发展可以用曲线(B)表示,该曲线表示每个细胞的DNA含量(Hoechst染色强度)绘制的细胞分布。代表细胞周期G1/G0期细胞的2N峰最初变得更大,但随后在第8天随着凋亡细胞核数量的增加而降低。代表G2期细胞的4N峰在分化过程中减少。到第8天,没有细胞达到4N峰值,表明细胞已经停止增殖。每种情况下分析25000至45000个细胞。(C) BrdU和Ki67对细胞增殖的分析表明,细胞在分化过程中增殖减少。分化8天后,BrdU+细胞的数量为2%。(D) Ki67阳性细胞数量减少,表明处于G0细胞周期期的细胞数量增加。分化8天和15天后,Ki67+细胞的数量分别为2%和1%。(C&D:分析了10000多个细胞/条件;误差条代表Cellomics显微镜视野之间的SEM)。
图3。
图3。
分化诱导的细胞周期信号和表观遗传学变化。(A) 使用从分化海马干细胞中提取的全RNA进行qRT-PCR分析表明,在11天的实验中,p21转录物增加,表明细胞中的细胞周期退出机制激活。(B) 抑制性多梳组蛋白Ezh2在分化过程中表达降低。误差条代表三倍之间的SEM。(C,D,E)DNA甲基化胞苷碱以及组蛋白3的赖氨酸27和赖氨酸4三甲基化的免疫染色强度。平均而言,2500个核的信号被量化/状态。误差条表示字段之间的SEM。
图4。
图4。
一小部分海马干细胞延迟了细胞周期的退出。(A) 对首次分化8天的细胞进行Ki67染色,然后再换回含有生长因子的FGF2培养基,这表明阳性群体从2%增加到8%。(B) 在8d分化和随后的培养基改变期间对细胞进行计数表明,细胞数量从600个/孔增加到3000个/孔。误差条表示三个重复井之间的SEM。(C) 含有能够抵抗末端分化的细胞的微孔的百分比。将每孔5、10、25或50个细胞置于48孔板中,以计算找到(至少)一个能够增殖的细胞所需的细胞数。在这些克隆密度中,当在最初的8天分化后重新引入含有FGF2的生长因子培养基时,大约0.375%至0.8%的最初接种的细胞能够恢复增殖。

类似文章

引用人

工具书类

    1. Basak O,Taylor V.成年哺乳动物大脑的干细胞及其生态位。细胞分子生命科学。2009;66:1057–1072.-公共医学
    1. Kriegstein A,Alvarez–Buylla A.胚胎和成人神经干细胞的胶质性质。《神经科学年鉴》。2009;32:149–184.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Ehninger D,Kempermann G。成年海马的神经发生。细胞组织研究2008;331:243–250.-公共医学
    1. Oya S、Yoshikawa G、Takai K、Tanaka JI、Higashiyama S、Saito N、Kirino T、Kawahara N。缺血损伤后,Notch信号的衰减促进神经祖细胞分化为海马CA1区的神经元。神经科学。2009;158:683–692.-公共医学
    1. Carlén M、Meletis K、Göritz C、Darsalia V、Evergren E、Tanigaki K、Amendola M、Barnabé-Heider F、Yeung MS、Naldini L、Honjo T、Kokaia Z、Shuempikov O、Cassidy RM、Lindvall O、Frisén J。前脑室管膜细胞具有Notch依赖性,在中风后生成神经母细胞和星形胶质细胞。自然神经科学。2009;12:259–267.-公共医学