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.2014年5月20日；9（5）：e97306。
doi:10.1371/journal.pone.0097306。 2014年电子收集。

胃癌中正常成纤维细胞诱导E-cadherin丢失并增加淋巴结转移

文旭 1, 胡新雷（Xinlei Hu） 2, 陈忠亭 三, 小平·郑 4, 张晨静 1, 王刚（Gang Wang） 1, 于晨 5, 周兴禄 1, 潇潇堂 1, 罗来生 1, 向旭 6, 潘文生 7
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胃癌中正常成纤维细胞诱导E-cadherin丢失并增加淋巴结转移

文旭等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

背景：肿瘤被认为是三维环境中的异质复合体，其中充满了病理生理和生物力学信号。细胞与肿瘤的相互作用引导肿瘤的发生和发展。在这里，我们评估了正常成纤维细胞对胃癌的作用。

方法/主要发现：通过在BGC-823胃癌细胞单层中共培养正常成纤维细胞，肿瘤细胞偶尔形成短的纺锤状形态特征，并显示出增强的增殖和侵袭潜能。此外，转化的肿瘤细胞显示肿瘤形成减少，淋巴和肠道转移潜能增加。相反，未转化的BGC-823细胞显示出原发性肿瘤形成和延迟肠道和淋巴结浸润。我们还观察到转化肿瘤细胞中E-cadherin的丢失和波形蛋白表达的上调，这表明转移的增加是由上皮-间充质转化引起的。

结论：总之，我们的数据表明，正常成纤维细胞在癌细胞中充分诱导上皮-间充质转化，从而导致转移。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。BGC-823细胞的形态学变化与上皮-间质转化有关。
图1.1。实验方案示意图。图1 .2.上清液细胞的来源。（A） GFP标记的BGC-823细胞（绿色）。（B） 与成纤维细胞共培养的BGC-823细胞（红色）。（C） BGC-823细胞在悬浮状态下生长成团块并呈圆形。（D） 共培养诱导TBGC。放大100倍。图1 第3条。相控显微镜下BGC-823细胞向TBGC的转化。（A–D）BGC-823细胞在密集的培养体系中可以形成集群，并将细胞脱落到悬浮液中。（E–H）悬浮肿瘤细胞的通过。图1 .4.pan-CK（红色）、E-钙粘蛋白（红色），波形蛋白（红）和N-cadherin（红色）的免疫荧光染色。用GFP（绿色）标记BGC-823细胞（上图）和TBGC（下图）。细胞核用DAPI（蓝色）染色。图1 .5.使用荧光定量RT-PCR分析基因表达谱的热图。颜色的深度表示相对的基因表达。图1 .6.蛋白质的蛋白质印迹。图1 .7.用Western blot分析测定蛋白质表达的条形图。横线表示使用IOD测量的相对表达水平。垂直线表示标准差异**p<0.01。
图2
图2。TBGC的增殖、侵袭和迁移。
图2.1：。增殖试验的线图。垂直线表示标准差异**p<0.01。图2 .2.划痕试验的线图。垂直线表示标准差异**p<0.01。图2 .3.在相控显微镜下对BGC-823细胞（上图）和TBGC（下图）进行划痕分析。（A–D，E–H）从最初到72小时的时间。图2 .4.侵入和迁移分析的方框图。BGC-823细胞和TGBCs之间的差异显著（p<0.01）。图2 .5.最上面的两张照片显示了Matrigel的侵入性改良transwell分析结果。（A）BGC和（B）TBGC跨井侵入分析的代表性图像。图中显示了侵入变速箱嵌件底部的单元。底部2张照片是（C）BGC和（D）TBGC的跨井迁移测定的代表性图像。图中显示了迁移到跨接套管嵌件底部的单元。
图3
图3。TBGCs表现出顺铂耐药性。
图3 .1.顺铂抑制试验的20小时线图**p<0.01。图3 .2.5-FU抑制试验的二十小时线图。图3 .3.流式细胞术用于评估不同浓度顺铂（20，40µM）暴露24小时后BGC和TBGC细胞的凋亡。细胞用Annexin V-FITC（凋亡标记物）和碘化丙啶（死亡细胞标记物）染色。图3 .4.顺铂诱导BGC-823细胞和TBGCs凋亡的条形图。流式细胞术显示凋亡细胞百分比的条形图**与二甲基亚砜（DMSO）对照孔中的细胞相比，p<0.01。
图4
图4。静脉注射组TBGCs表现出体内淋巴结倾向。
图4 .1.接受尾静脉注射的不同组淋巴结转移的累积风险。图4 .2.静脉注射组器官的HE染色（10周时）。在两组的肠道和BGC组的肺部均观察到阳性。未发现明显的肝或肾转移。图4 .3.接受尾静脉注射组第2周肿瘤细胞的荧光追踪。如黄色箭头所示，用绿色荧光标记肿瘤细胞。细胞核用DAPI（蓝色）染色。放大100倍。图4 .4.在每个时间点接受尾静脉注射组淋巴结中E-cadherin和β-catenin的免疫组织化学染色。放大200倍。图4 .5.在每个时间点接受尾静脉注射的组的淋巴结中E-钙粘蛋白和β-catenin的相对表达水平的条形图**p<0.01*p<0.05。
图5
图5。在我们的皮下肿瘤发生模型中，TBGCs显示肿瘤形成率低，但淋巴结转移能力高。
图5.1。BGC和TBGC组在每个时间点的一般肿瘤发生观察。图5 .2.不同肿瘤发生组淋巴结转移的累积风险。图5 .3.肿瘤发生组第2周肿瘤细胞的荧光示踪。肿瘤细胞用绿色荧光标记，并用黄色箭头表示。细胞核用DAPI（蓝色）染色。图5 .4.肿瘤发生组各时间点淋巴结E-cadherin和β-catenin免疫组化染色。放大200倍。图5 .5.各时间点肿瘤发生组淋巴结中E-cadherin和β-catenin相对表达的条形图**p<0.01*p<0.05。NA：BGC组无淋巴结转移。
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参考文献

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出版物类型

赠款和资金

这项研究得到了国家卫生重点专项基金的资助(网址：http://program.most.gov.cn; No.200802112），国家科学基金委员会(http://www.nsfc.gov.cn; 一般项目No.81372302 No.81272120），卫生部基金(网址：http://program.most.gov.cn; No.2007A093），浙江省重点项目(http://www.zjkjt.gov.cn; 编号：2013C030445 2009C030125）。浙江省自然科学基金(http://www.zjnsf.gov.cn; 编号Y2080001、Y12H160121、Z2080514）和中医局基金(网址：http://wst.zj.gov.cn; 编号：2007ZA019）。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。