跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2014年7月；34(14):2611-23.
doi:10.1128/MCB.01121-13。

Caveolin-1调节神经干细胞糖皮质激素受体的基因组作用

梅兰妮·佩弗, 乌玛·R·钱德兰, 苏米亚·卢特拉, 丹妮拉·沃龙特, 费鲁西奥·加尔比亚蒂, 迈克尔·加拉贝迪安, 保拉·莫纳根, 唐纳德·德弗兰科

Caveolin-1调节神经干细胞糖皮质激素受体的基因组作用

梅兰妮·佩弗等。 分子细胞生物学. 2014年7月.

摘要

虽然糖皮质激素（GC）在临床上被用于治疗许多疾病，但由于延迟的不良后果，尤其是对大脑发育的影响，其在新生儿和产前的使用越来越受到争议。这种改变可能反映了GC对神经祖细胞/干细胞（NPSC）功能的影响。我们之前证明，脂筏蛋白小窝蛋白-1（Cav-1）是通过血浆膜结合糖皮质激素受体（GRs）在胚胎小鼠NPSC中快速GC信号传导所必需的。我们在这里表明，NPSC中的基因组GR信号需要Cav-1。Cav-1的缺失会影响许多GR靶基因（例如，血清和糖皮质激素调节激酶1基因）的转录反应，这些基因可能介导GC的抗增殖作用。野生型C57或Cav-1缺陷型NPSC的微阵列分析确定了约100个受GC处理差异调节的基因。Cav-1基因敲除的NPSC中激素反应性的这些变化与GC调节的GR在丝氨酸211处磷酸化的丢失有关，而与丝氨酸226处的磷酸化无关。在Cav-1基因敲除的NPSC中，总GR向Fkbp-5、RhoJ和Sgk-1等靶基因调控区的染色质募集以及p211-GR向Sgk-1的募集受到抑制。因此，Cav-1是NPSC中GR的多功能调节器，影响受体的快速和基因组作用，以影响细胞增殖。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
Dex对NPSC的抗增殖作用需要Cav-1。（A） 用Dex或载体（乙醇[EtOH]）处理C57或Cav-1 KO NPSC 24小时，并在治疗的最后一小时内用BrdU脉冲处理。免疫细胞化学检测BrdU阳性细胞核（粉红色）。DAPI染色（蓝色）显示细胞核。（B） 计算每个生物复制的三个独立盖玻片，以确定通过S期的细胞百分比（即BrdU阳性细胞核）。误差条代表平均值的标准误差（SEM；n个=三个生物重复）。P（P）<0.001（Tukey后验的单向方差分析）。
图2
图2
Dex对NPSC的抗增殖作用需要SGK-1。（A） 用Dex和/或SGK-1抑制剂GSK650394和适当的载体（乙醇[EtOH]或二甲基亚砜[DMSO]）处理C57或Cav-1 KO细胞24小时，并在最后一小时内用BrdU脉冲处理。进行免疫细胞化学检测BrdU阳性细胞核（粉红色）。DAPI染色（蓝色）显示细胞核。（B） 计算每个生物复制的三个独立盖玻片，以确定通过S期的细胞百分比（即BrdU阳性细胞核）。误差条代表SEM(n个＝3个生物重复）。P（P）<0.05（Tukey后验单因素方差分析）。（C） qRT-PCR分析Sgk-1号图纸mRNA表明显著诱导Sgk-1号图纸在C57但不是Cav-1 KO NPSC中进行4小时Dex治疗后发生（学生的t吨测试，P（P）< 0.01).
图3
图3
C57与Cav-1 KO NPSC中的一组基因受GR的差异调节。（A） 使用C57和Cav-1 KO NPSC中的Dex-responsive基因对20种NPSC培养物进行基因聚类（学生t吨测试；错误发现率<0.1）。在绘制热图之前，使用归一化的z分数表示数据。对于每个基因（行），z评分的计算方法是用所有样本的平均表达减去表达值（居中），再除以标准偏差（缩放）。（B-I）C57或Cav-1 KO NPSCs来自与微阵列分析无关的组织，用100 nM Dex处理4 h，并用qRT-PCR分析指示基因的mRNA表达。尽管所有显示的基因都对Dex有显著的诱导反应，但Cav-1 KO细胞的激活减弱。误差条代表SEM(n个= 6). *,P（P）< 0.05; **,P（P）<0.01（学生的t吨测试）。
图4
图4
NextBio分析揭示了Dex在胚胎小鼠NPSC培养物中调节的基因子集。（A） Venn图比较了NextBio中用于进行荟萃分析的14项研究中的GC调节基因列表。第1组中包含的基因来自研究ID编号3至8和12至14（表1），并且来自离我们小鼠胚胎NPSC最远的细胞类型（第3组）。组2中包含的基因来自研究ID编号9至11（表1），来源于与我们的小鼠胚胎NPSC密切相关的细胞类型（即大鼠神经祖细胞或小鼠少突胶质祖细胞）。（B至D）来自独立于微阵列中使用的组织的C57 KO NPSC用100 nM Dex处理4小时，并诱导Gjb6公司（B） ，第二阶段（C） 、和Gbx2（D） 用qRT-PCR分析mRNA。误差条代表SEM(n个= 6). *,P（P）< 0.05; ***,P（P）<0.001（学生的t吨测试）。
图5
图5
在细胞核中检测不到Cav-1蛋白，Cav-1的缺失也不会影响GR蛋白或mRNA的表达。（A） 用100 nM Dex或EtOH载体处理1 h的C57和Cav-1 KO NPSC制备的细胞质和核组分进行Western blot分析，以检测GR、Cav-1和细胞质（GAPDH）或核（层粘连蛋白B1）蛋白标记。在C57 NPSC裂解物的核组分和Cav-1 KO细胞的细胞质或核组分中均未检测到Cav-1。所示的斑点是三个独立实验的代表。（B） qRT-PCR分析表明C57和Cav-1 KO细胞GR mRNA表达无差异(n个=5）。（C和D）Western blot分析也表明，用100 nM Dex或EtOH载体处理4 h的C57和Cav-1 KO细胞之间的GR蛋白（相对于GAPDH）表达没有差异(n个= 4). 误差条代表SEM。
图6
图6
在Cav-1 KO NPSCs中，S211而不是S226处的GR磷酸化被改变。（A） 用100 nM Dex或EtOH载体处理来自C57和Cav-1 KO NPSC的全细胞裂解物1小时，用针对GR或非免疫小鼠IgG的BuGR-2小鼠单克隆抗体进行免疫沉淀，然后进行Western blot分析，以检测总GR或磷酸-S211或磷酸S-226 GR亚型。星号显示在使用非免疫IgG下拉后在所有车道上检测到的非特异性带。输入通道（星形）中的高分子带的身份未知，但在抗GR抗体免疫沉淀物中未检测到。箭头指示了在C57中可检测到但在Cav-1 KO NPSC裂解物中未检测到的Dex-诱导磷酸化-S211亚型。S226的GR磷酸化在C57和Cav-1 KO裂解物中相似。该印迹是三个生物学独立实验的代表。使用总GR（B到D）或磷酸-S211（E）抗体的ChIP实验表明，在100 nM Dex的1.5小时治疗后，GR对靶基因的招募减弱。使用qRT-PCR分析DNA，并在比较Dex和EtOH的富集度之前，显示相对于总浓度和IgG阴性对照的最终值(n个=3个C57和n个=5（对于Cav-1 KO细胞）。误差条代表SEM。*，P（P）< 0.05; **,P（P）<0.01（学生的t吨测试）。
图7
图7
Cav-1介导的对GR基因组作用的影响模型。如右图所示，先前的工作表明GR与Sgk-1（52）的启动子结合，Sgk-1是一个GR靶点，与GC在神经祖细胞中的抗增殖作用有关（19）。本研究的新发现被矩形包围。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. George AA，Schiltz RL，Hager GL.2009年。糖皮质激素受体对染色质中反应元件的动态访问。国际生物化学杂志。细胞生物学。41:214–224. 2016年10月10日/j.bicel.2008.09.019-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Rhen T，日本奇德洛夫斯基。糖皮质激素的抗炎作用：旧药物的新机制。北英格兰。《医学杂志》353:1711-1723。10.1056/NEJMra050541-内政部-公共医学
    1. 美国奥委会。2011年，ACOG委员会第475号意见：产前皮质类固醇治疗促进胎儿成熟。障碍物。妇科。117:422–424. 10.1097/AOG.0b013e31820eee00-内政部-公共医学
    1. Miller WL，Witchel旧金山。2013.先天性肾上腺增生症的产前治疗：风险大于收益。Am.J.Obset.美国律师协会。妇科。208:354–359. 2016年10月10日/j.ajog.2012.10.885-内政部-公共医学
    1. 克罗瑟CA、道尔LW、哈斯拉姆RR、希勒JE、哈丁JE、罗宾逊JS。2007年。重复使用产前皮质类固醇后2岁时的结果。北英格兰。《医学杂志》357:1179–1189。10.1056/NEJMoa071152-内政部-公共医学

出版物类型

MeSH术语

关联数据