跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2014年7月；21(7):1132-41.
doi:10.1038/cdd.2014.30。 Epub 2014年3月14日。

磷脂酶D1调节α-突触核蛋白聚集体的自噬通量和清除

E-J Bae公司 1, H-J李 2, Y-H张 三, S迈克尔 4, E马萨利亚 4, D S最小值 三, S-J李 1
附属公司

磷脂酶D1调节α-突触核蛋白聚集体的自噬通量和清除

E-J Bae公司等。 细胞死亡差异. 2014年7月.

摘要

许多神经退行性疾病，如阿尔茨海默病和帕金森病，其特征是聚集蛋白的异常积累。这些疾病的大脑也显示自噬小泡在神经元细胞质中积聚，表明自噬过程受损。由于自噬涉及从头生成膜和囊泡融合，因此需要对脂质分子进行广泛的改变。然而，信号脂质修饰酶在自噬中的作用及其在神经退行性疾病中的作用尚不清楚。使用特异性抑制剂，我们发现磷脂酶D1（PLD1）活性的丧失导致微管相关蛋白轻链3（LC3）、p62和多泛素化蛋白的积累，这些迹象表明自噬通量出现故障。荧光和电子显微镜分析表明，自噬体与溶酶体的融合受损，导致自噬小体积聚。在自噬通量受损的细胞内，α-突触核蛋白聚集在自噬体中。使用小干扰RNA敲低PLD1表达也会导致自噬通量受损和自噬体中α-突触核蛋白聚集体的积累。PLD1的过度表达挽救了α-突触核蛋白积累引起的神经毒性；然而，活性缺陷突变体PLD1-KRM的表达降低了救援效果。最后，我们证明，路易体痴呆（DLB）患者脑组织中PLD活性和表达水平均降低，而同一组织样本中α-突触核蛋白和p62的数量增加。总之，这些结果表明，PLD活性不足，因此膜内磷脂成分的变化，可能是路易体疾病中自噬过程和蛋白质积累受损的重要原因。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
通过药物抑制PLD1抑制自噬流量。(一)通过药物抑制PLD1改变PLD1活性。用0、5、10和20处理分化的SH-SY5Y细胞 μPLD1抑制剂M 2天。N个=3, *P（P）<0.05. (b条)自噬底物的积累。分化的SH-SY5Y细胞用20 μM的PLD1抑制剂2天。LC3-II、p62和多泛素化蛋白的水平用标准化β-肌动蛋白。N个=3, *P（P）<0.05. (c（c）)用PLD1抑制剂和Baf A1共同处理。在用50 24小时Baf A1的nM h.用标准化LC3-II和p62水平β-肌动蛋白。N个=3, *P（P）<0.05. (d日)通过抑制PLD1积累AP。用tfLC3转染分化后的SH-SY5Y细胞，并用上述PLD1抑制剂孵育。使用ImageJ软件分析荧光图像。共分析了三个独立实验中的300个细胞（每个实验100个细胞）。比例尺：20 μ米*P（P）<0.05. (电子)用PLD1抑制剂处理的细胞中积累的AP的EM。N个=3（每个实验20个细胞）*P（P）<0.05
图2
图2
抑制PLD1对α-同核蛋白聚集体。(一)PLD1抑制诱导的α-突触核蛋白。分化的SH-SY5Y细胞过度表达人类α-synuclein用20 μM的PLD1抑制剂2天。的级别α-synuclein用标准化β-肌动蛋白。HM，高分子物种；M、 单体尺寸。N个=3, *P（P）<0.05. (b条)α-AP中的突触核蛋白积累。分化的SH-SY5Y细胞与人共转染α-synuclein和tfLC3，并与PLD1抑制剂孵育。细胞用40 μ免疫荧光染色前的洋地黄素M。共分析了三个独立实验中的300个细胞（每个实验100个细胞）。比例尺：20 μ米*P（P）<0.05. (c（c）)免疫金EMα-经PLD1抑制剂处理的细胞中AP的突触核蛋白。N个＝3（每个实验15个细胞）*P（P）<0.05. (d日)细胞毒性分析。控制细胞和过度表达人类的细胞α-共核蛋白培养1天，用二甲基亚砜或PLD1抑制剂处理2天。N个=3, *P（P）<0.05,#P（P）<0.05
图3
图3
PLD1抑制剂诱导的α-初级皮层神经元的突触核蛋白。(一和b条)PLD1抑制剂对大鼠初级皮层神经元自噬底物的积累。初级皮层神经元用10 μPLD1抑制剂M 2天。LC3-II、p62和多泛素化蛋白的水平用β-肌动蛋白。N个=3, *P（P）<0.05, **P（P）<0.01。(c（c）)PLD1抑制诱导α-原代大鼠皮层神经元的突触核蛋白。的级别α-synuclein用标准化β-肌动蛋白，NS，非特异性带，N个=3, **P（P）<0.01
图4
图4
抑制自噬通量和α-PLD1 RNAi在AP中的同核蛋白积累。(一)PLD1 RNAi对自噬底物积累的影响。分化的SH-SY5Y细胞过度表达人类α-用对照、PLD1 siRNA或PLD2 siRNA转染突触核蛋白β-肌动蛋白。N个=3, *P（P）<0.05. (b条)α-PLD1 RNAi合成核蛋白。的级别α-synuclein用标准化β-肌动蛋白。N个=3, **P（P）<0.01。(c（c）)存款α-PLD1 RNAi检测AP中的同核蛋白。分化SH-SY5Y细胞过表达人α-用tfLC3和PLD1 siRNA共同转染突触核蛋白。用40 μ免疫荧光染色前的洋地黄素M。共分析了三个独立实验中的300个细胞（每个实验100个细胞）。比例尺：20 μ米*P（P）<0.05, **P（P）<0.01。(d日)免疫金-EMα-PLD1敲除后AP中的突触核蛋白。N个=3（每个实验15个细胞）*P（P）<0.05
图5
图5
MG132诱导的逆转α-PLD1过表达引起的突触核蛋白积累和细胞毒性。(一和b条)人类过度表达的细胞α-用野生型PLD1或PLD1 KRM（催化失活突变体）转染synuclein。的级别α-同核蛋白(一)和第62页(b条)Triton中的不溶部分用标准化β-肌动蛋白。中的左右面板(一)来自同一种凝胶。(c（c）)使用自动细胞计数器分析细胞活力。N个=3, *P（P）<0.05
图6
图6
DLB脑样本中PLD1和自噬底物的水平。(一和b条)相关活动(一)和级别(b条)PLD1在对照组和DLB患者大脑中的表达。N个=每组7人*P（P）<0.05, **P（P）<0.01。(c（c）和d日)p62的相对水平(c（c）)和α-同核蛋白(d日)在对照组和DLB患者的大脑中。N个=7, *P（P）<0.05
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. 谢Z，克林斯基DJ。自噬体形成：核心机制和适应。自然细胞生物学。2007;9:1102–1109.-公共医学
    1. Jeong H，Then F，Melia TJ，Jr，Mazzulli Jr，Cui L，Savas JN，等。乙酰化作用靶向突变的亨廷顿蛋白，使其降解为自噬体。单元格。2009;137:60-72。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Levine B，Kroemer G.自噬在疾病发病机制中的作用。单元格。2008;132:27–42.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Harris H，Rubinsztein DC。控制自噬作为神经退行性疾病的治疗。Nat Rev Neurol公司。2012;8:108–117.-公共医学
    1. 水岛N、莱文B、克尔沃AM、克林斯基DJ。自噬通过细胞自我控制与疾病作斗争。自然。2008;451:1069–1075.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型