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.2014年3月4日；9（3）：e90455。
doi:10.1371/journal.pone.0090455。 2014年电子收集。

Egfl7在视网膜血管发育过程中在动脉和静脉中的表达不同

洛克·普瓦索尼耶 1, 加列·维廉 1, Fabrice Soncin公司 1, 弗吉尼亚·马托 1
附属公司

Egfl7在视网膜血管发育过程中在动脉和静脉中的表达不同

洛克·普瓦索尼耶等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

中枢神经系统（CNS）的血管系统由血管内皮细胞和壁细胞组成，它们与神经胶质细胞和神经元密切相互作用。中枢神经系统血管化的发展是一个独特的过程，除了经典的血管生成因子外，还需要特定的调节因子的参与。在生理和病理血管生成过程中，egfl7基因主要在内皮细胞中检测到。Egfl7编码一种分泌蛋白，主要积聚在细胞外空间，控制血管弹性蛋白沉积或Notch通路。Egfl7是微小RNA miR126的宿主基因，其也在内皮细胞中表达，并在血管发育过程中发挥主要功能。虽然egfl7和miR126在发育过程中在内皮细胞中的表达得到了很好的描述，但它们在中枢神经系统血管系统建立过程中的表达模式仍然未知。通过分析小鼠视网膜血管化过程中egfl7和miR126的表达，我们观察到，虽然miR126在所有内皮细胞中都有表达，但egfl7最初在所有的内皮细胞中表达，然后逐渐局限于静脉及其邻近的毛细血管。视网膜动脉周围壁细胞的募集与动脉内皮细胞中egfl7的下调一致，表明这种募集可能与动脉中egfl 7表达的缺失有关。然而，当注射PDGFRβ阻断抗体阻止壁细胞募集时，egfl7的表达模式相似，这表明血管成熟不是视网膜动脉中egfl7下调的原因。

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数字

图1
图1。英语7视网膜血管发育过程中的表达。
A类:类表皮生长因子域7通过原位杂交（蓝色染色）检测2（P2）、5（P5）、9（P9）和14（P14）日龄小鼠幼崽平贴视网膜中的表达。B类：左侧面板：类表皮生长因子域7用原位杂交技术检测成人平贴视网膜的表达。右侧面板：左侧面板的放大倍数更高；类表皮生长因子域7原位杂交检测表达（上面板），同一视网膜区域的IV型胶原免疫染色（下面板）。C类：通过RT-qPCR进行相对定量类表皮生长因子域7九（P9）、十四（P14）日龄幼鼠和成年小鼠视网膜中的转录物。将水平标准化为P9视网膜的水平，任意设置为1。显示放大倍数。
图2
图2。特定英语7视网膜发育血管的表达模式。
A类：IV型胶原（Coll IV）联合免疫染色和类表皮生长因子域7在五（P5）和九（P9）日龄小鼠幼崽的扁平安装视网膜中进行原位杂交。a、 动脉；v、 静脉。B类：联合Islectin B4染色（中间面板）和类表皮生长因子域7原位杂交（左面板）位于P5视网膜发育血管的前缘。DAPI染色也显示在右侧面板中。*，Tip-cell。显示放大倍数。
图3
图3。miR126在视网膜血管中的表达。
A类:类表皮生长因子域7和miR126转录物通过原位杂交在9日龄小鼠幼崽（P9）的扁平安装视网膜上检测。B类：在2（P2）、5（P5）、9（P9）和14（P14）日龄小鼠幼崽的扁平安装视网膜中进行IV型胶原（Coll IV）联合免疫染色和miR126原位杂交。a、 动脉；v、 静脉。C类：在P5视网膜发育血管的前缘进行IV型胶原联合染色（中图）和miR126原位杂交（左图）。显示放大倍数。
图4
图4。miR126在成人视网膜中的表达。
左幅：通过原位杂交检测miR126在扁平安装的成人视网膜中的表达。右侧面板：左侧面板放大倍率更高；原位杂交检测miR126的表达（上面板）；同一视网膜区域的IV型胶原免疫染色（下面板）。显示放大倍数。
图5
图5。英语7以及miR126在HUVEC和HUAEC原代内皮细胞中的表达。
A类：通过RT-qPCR对静脉HUVEC和动脉HUAEC原代内皮细胞中EphrinB2和Dll4进行相对定量。将水平归一化为HUVEC任意设置为1的水平。B类：通过RT-qPCR对HUVEC和HUAEC原代内皮细胞中的COUP-TFII和EphB4进行相对定量。将水平归一化为HUVEC任意设置为1的水平。C类：通过RT-qPCR进行相对定量类表皮生长因子域7和miR126在HUVEC和HUAEC原代内皮细胞中表达。将水平归一化为HUVEC任意设置为1的水平。
图6
图6。OF1小鼠视网膜血管发育过程中的细胞募集。
A类：上面板：在P9水平安装的视网膜中进行NG2（周细胞）和SMA（平滑肌细胞）免疫染色；中下部面板：A、整个血管系统（isolectin B4）、周细胞（NG2）和平滑肌细胞（SMA）的视网膜联合免疫染色的高倍镜。B类：2日龄（P2）、5日龄（P5）、9日龄（P9）和14日龄（P14）小鼠幼鼠视网膜中内皮细胞（Isoectin B4，IsoB4）和平滑肌细胞（SMA）的共免疫染色。a、 动脉；v、 静脉。显示放大倍数。
图7
图7。英语7壁细胞缺陷性视网膜血管中的表达。
A类：用载体或针对PDGFRβ（αPDGFR？）的阻断抗体注射幼鼠的P9视网膜周细胞（NG2）和平滑肌细胞（SMA）的联合免疫检测。B类：用载体或针对PDGFRβ（αPDGFR？）的阻断抗体注射幼鼠的P9视网膜中内皮细胞（isolectin B4）、周细胞（NG2）和平滑肌细胞（SMA）的高倍联合免疫检测。C类：IV型胶原蛋白免疫染色显示注射载体或针对PDGFRβ（αPDGFR？）的阻断抗体的幼鼠P9视网膜的血管系统。天：IV型胶原（Coll IV）联合免疫染色和类表皮生长因子域7用载体或针对PDGFRβ（αPDGFR）的阻断抗体注射幼鼠的P9视网膜原位杂交。a、 动脉；v、 静脉。显示放大倍数。
图8
图8。壁细胞缺陷性视网膜血管中miR126的表达。
A类：通过原位杂交检测注射载体或PDGFRβ（αPDGFR）阻断抗体的幼鼠P9全视网膜中miR126的表达。B类：通过原位杂交在注射载体或针对PDGFRβ（αPDGFR？）的阻断抗体的幼鼠的P9全视网膜中检测到miR126表达的更高倍率。
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赠款和资金

这项工作得到了医学康复基金会（FRM Régionale ComitéNord-Pas de Calais 2009；VM）、癌症康复协会（ARC#5071；VM），北欧国家控制癌症委员会（VM）和北欧癌症协会（VM）的支持。LP由ARC博士生奖学金资助。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。