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.2014年1月29日；9（1）：e87281。
doi:10.1371/journal.pone.0087281。 2014年电子收集。

PDGFRA ERK活性依赖性表面表达调控胶质瘤细胞增殖

陈东风 1, 多佐 2, 程銮 三, 刘敏（音） 1, 曼丽娜 1, 梁冉 2, 孙英玉 2, 安妮特·佩尔森 4, 伊丽莎白·英格鲁 4, 莱夫·萨尔福德 1, 埃里克·伦斯特罗姆 三, 范小龙 2, 张恩明（Enming Zhang） 三
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PDGFRA ERK活性依赖性表面表达调控胶质瘤细胞增殖

陈东风等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

PDGFRA信号增强是许多亚型胶质瘤的重要致病因素。在这种情况下，PDGFRA的细胞表面表达是胶质瘤微环境中配体感应的重要决定因素。然而，PDGFRA在神经胶质瘤细胞中的空间分布调控仍不明确。在这里，我们报道了胶质瘤中细胞表面PDGFRA的表达受到ERK依赖机制的负调控，导致胶质瘤细胞的增殖减少。从14例患者中分离出胶质瘤肿瘤组织及其相应的细胞系，并用单细胞成像和流式细胞术进行分析。在两种细胞系及其相应的肿瘤样本中，胶质瘤细胞的增殖与PDGFRA的表面表达程度相关。高水平的表面PDGFRA也与体内胶质瘤组织中微管蛋白的高表达相关。在胶质瘤细胞系中，经微管蛋白、肌动蛋白和动力蛋白抑制剂治疗后，表面PDGFRA下降。筛选一组小分子化合物后，确定MEK抑制剂U0126是表面PDGFRA表达的有效抑制剂。重要的是，U0126以可逆、剂量和时间依赖的方式抑制表面表达，而不影响PDGFRA的一般表达。U0126治疗导致PDGFRA与细胞内转运分子（如网格蛋白、RAB11和早期内体抗原-1）之间的共同定位降低，同时PDGFRA和高尔基池制造者Giantin、，此外，U0126治疗胶质瘤细胞诱导了ERK1/2磷酸化的初始抑制，随后ERK1/2的磷酸化上调，PDGFRA的表面表达降低。最后，U0126下调表面PDGFRA表达与胶质瘤细胞增殖减少一致。这些发现表明，PDGFRA的空间表达调控可能用于对抗胶质瘤。

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数字

图1
图1。人原发性胶质瘤细胞PDGFRA表面表达与细胞增殖的关系。
A.用FACS测定8例胶质母细胞瘤和6例II级星形细胞瘤胶质瘤细胞系中PDGFRA的表面强度。根据PDGFRA表面表达水平将胶质瘤细胞系分为三个亚组。该数据表示来自三个独立的FACS实验的具有表面PDGFRA表达的细胞百分比的平均值±SD。B、 与A相同，但评估EGFR表面表达。C.使用TIRFM检测PDGFRA的表面表达。典型图像显示PDGFRA簇在单个胶质瘤细胞中的表面表达。D.在三组细胞系中总结了TIRFM中评估的PDGFRA簇的平均值*p<0.05，***p<0.001（方差分析，F检验，n = 14). E.5天内胶质瘤细胞增殖情况在体外根据PDGFRA表面表达的程度绘制培养图*p<0.05，**p<0.01（方差分析，F检验，n = 14). F、 与E相同，但根据EGFR表面表达的程度绘制增殖曲线。在PDGFRA表面高表达的胶质瘤细胞中检测到更多的BrdU阳性细胞**p<0.01（学生的t吨-测试，n = 8，来自#1、#2、#3和#5的胶质瘤细胞系在>70%组，#11、#12、#13和#14在<30%组。）。
图2
图2。胶质瘤样本中PDGFRA的高密度表面表达与高细胞增殖率相关体内试验。
A.左面板：胶质瘤样本中PDGFRA免疫组化染色的典型共焦图像，对应于PDGFRA低表面表达的细胞系，如图1A所示。右侧面板：强度分布沿中间图像中的白点线，从左侧图片中的方框放大。B、与A相同，但胶质瘤样本的切片对应于高表面PDGFRA的细胞系。C.细胞表面平均PDGFRA荧光强度（I）之比的描述表面)细胞溶质（I细胞溶质). PDGFRA荧光的表面积由钙粘蛋白染色确定，钙粘蛋白是一种质膜标记物。D.PDGFRA表面高表达（#2、#3和#5）或低表达（#12、#13和#14）的胶质瘤组织中PDGFRA表达的平均比率。对于每个患者的组织，选择14个细胞进行比率定量分析，n = 6，***p<0.001（方差分析，F检验）。E.在PDGFRA表面低表达和高表达的组织中检测到整个细胞中PDGFRA的平均荧光强度。不另说明。：学生无意义t吨-测试。使用D中每个组织中的19个细胞进行分析。F.所示胶质瘤样本中Ki-67免疫染色的典型共焦图像。G.在E.n条件下Ki67阳性细胞的平均百分比 = 3.**p<0.01（方差分析，F检验）。
图3
图3。PDGFRA的表面表达受细胞骨架系统控制。
A.高（n）的胶质瘤组织切片中微管蛋白免疫染色的典型共焦图像 = 3，组织#2、#3和#5）或低（n = 组织#12、#13和#14）表面PDGFRA表达。B.典型的FACS直方图描述了药物抑制剂VBT（500 nM）、LB（500 nM）和Dyn（40µM）对细胞系#1、#2和#3中表面PDGFRA表达的影响。C.VBT治疗后，通过PDGFRA强度（MFI，左）和PDGFRA阳性细胞百分比（右）测量的表面PDGFRA表达的时间依赖性下降（n = 3，使用与B相同的细胞系。p＜0.001，Studentt吨-测试）。D.LB治疗后，表面PDGFRA表达的强度（左）和百分比（右）增加。E.表面PDGFRA-阳性细胞的百分比没有显著变化，但在dynasore治疗后，表层PDGFRA强度降低。（n个） = 3，使用与B中相同的细胞系，MFI p<0.001，t吨-测试）。F.dynasore治疗后CD71表面表达增加（n = 3，使用与B中相同的细胞系，p<0.001，t吨-测试）。
图4
图4。MEK抑制剂U0126下调PDGFRA表面表达。
A.根据抑制剂下调胶质瘤细胞PDGFRA表面表达的能力筛选抑制剂。B.MEK抑制剂U0126降低FACS检测到的2号细胞PDGFRA表面表达。C.典型的共焦图像显示，在2号细胞系中，经或未经U0126处理的PDGFRA表达。D.胶质瘤细胞系#2中经U0126治疗或未经U0136治疗的细胞系表面和胞浆PDGFRA表达的平均比率。每组使用18个细胞进行分析，***p<0.001，t吨-测试。E.用FACS在9个细胞系（#1-7、#9和#14细胞系，p<0.001，t吨-测试）。F.U0126对胶质瘤细胞PDGFRA表面表达的剂量依赖性影响。数据显示为平均值±SD.G。U0126对三个指示细胞系PDGFRA表达的可逆时间依赖性效应。如在细胞系#2中分析的，U0126在mRNA和蛋白质水平上对PDGFRA表达没有显著影响。ΔCt由PDGFRA的平均Ct值减去GAPDH的平均Ct值计算得出。数据由3代细胞中5个重复的平均±SEM表示。western blot是三个独立重复的代表。这些实验是用细胞系#2进行的。
图5
图5。U0126诱导PDGFRA表面表达下调与ERK活性的正反馈一致。
A.表示U0126治疗后不同时间点ERK活性的免疫印迹。该印迹具有代表性，来自3个独立实验。B.代表0.5或18游离A549细胞后ERK活性的免疫印迹。所有实验均在细胞系#1、#2和#3中进行。
图6
图6。经U0126治疗18天后，PDGFRA偏离细胞内转运系统
A.U0126治疗后细胞系#2中PDGFRA和小窝蛋白的免疫染色图像。插入的大图片是小方框的放大。箭头表示共同定位的集群。B.在与A相同的条件下检测到的平均PDGFRA与小窝蛋白共定位（每个治疗组12个细胞，**p<0.01，t吨-测试）。C.使用或不使用U0126处理对#2细胞系中的PDGFRA和氯氰菊酯进行免疫染色。箭头表示同位化的簇。D.在与C中相同的条件下检测到的对网格蛋白的平均PDGFRA共定位（每个处理中有12个细胞，**p<0.01，t吨-测试）。E.FACS数据显示，U0126联合VBT治疗后，PDGFRA在胶质瘤细胞系#2、#3和#5（n = 3，p<0.001，t吨-测试）。F.LB对U0126诱导的与E（n）相同细胞系PDGFRA表面表达减少无影响 = 3，p>0.05，t吨-测试）。G.在与F（n）相同的细胞系中通过dynasore处理对抗U0126对PDGFRA表面表达的影响 = 3，p<0.001，t吨-测试）。
图7
图7。U0126处理减少了PDGFRA在回收系统中的滞留。
A.样本#2胶质瘤组织中PDGFRA和Rab11染色的典型共焦图像。B.与A中的情况相同，但检测到EEA-1。C.对#2细胞系进行PDGFRA和Rab11免疫染色，是否进行U0126处理。箭头表示同位化的簇。D.在C中检测到的PDGFRA与Rab11共定位的平均值（每种情况下18个细胞，***p<0.001，t吨-测试）。E.U0126处理前后#2细胞株PDGFRA和EEA-1的免疫染色。箭头表示共同定位的集群。F.在与E相同的条件下PDGFRA共同定位到EEA-1的平均值（每个条件下28个细胞，**p<0.01，t吨-测试）。G.与E中相同，但检测到Giantin。三个分开的图像（右），顶部、中部和底部分别表示Giantin、PDGFRA和，是左图中框的放大。H.与G组相同条件下PDGFRA共定位于Giantin的平均值（每种条件下42个细胞。**p<0.01，t吨-测试）。
图8
图8。U0126治疗后胶质瘤细胞增殖下调。
A.FACS分析显示，经或不经U0126治疗后，BrdU阳性胶质瘤细胞表面PDGFRA表达低或高。B.在与A相同的条件下对BrdU阳性细胞进行统计分析。数据来自三个独立实验（***p<0.001 ANOVA，F-test）。C.代表性直方图显示U0126治疗对2号细胞系PDGF刺激的胶质瘤细胞生长的抑制。D.在C.n所述条件下分析的BrdU阳性细胞的平均百分比 = 3（细胞系#2、#3和#5），***p<0.001（F-test）。
图9
图9。一个纸箱展示了胶质瘤细胞中表面PDGFRA通过ERK信号通路与细胞增殖的关联。
即使在没有急性配体刺激的情况下，PDGFRA也是组成性的，但在神经胶质瘤细胞中缓慢运输。在这个贩运过程中，PDGFRA以囊泡形式沿着细胞骨架公路运输。通过ERK活性检测PDGFRA的内吞和再循环程度。高ERK活性可能导致变化，导致内吞作用增强，但循环减少，高尔基体中富含PDGFRA。因此，表面PDGFRA的表达被下调。这个过程会抑制配体刺激。
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    1. Dunn GP、Rinne ML、Wykosky J、Genovese G、Quayle SN等（2012），胶质母细胞瘤分子和细胞基础的新见解。基因开发26:756–784。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Stupp R、Mason WP、van den Bent MJ、Weller M、Fisher B等（2005年），胶质母细胞瘤放射治疗加伴随和辅助替莫唑胺。《新英格兰医学杂志》352:987-996。-公共医学
    1. Huse JT，Holland EC（2010）靶向脑癌：恶性胶质瘤和髓母细胞瘤的分子病理学进展。Nat Rev Cancer杂志10:319–331。-公共医学
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出版物类型

赠款和资金

本研究得到了国家自然科学基金（81072080）、中国科学技术部国际合作项目（2012DFA30470）和汉斯·劳斯慈善基金会的支持。该研究还得到了瑞典研究委员会（项目12234）对E.R.的资助，即临床研究资助（ALF）。EZ的职位获得了欧盟综合项目BetaBat和SRC合作拨款以及瑞典战略研究EXODIAB的资助。这项工作是使用由Knut和Alice Wallenberg基金会资助的成像设备完成的。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。