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.2014年2月;69(2):404-15.
doi:10.1093/jac/dkt348。 Epub 2013年9月10日。

短双链RNA LTR异染色化对人外周血单个核细胞HIV-1C病毒产生的长期抑制作用

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短双链RNA LTR异染色化对人外周血单个核细胞HIV-1C病毒产生的长期抑制作用

阿南·辛格等。 J抗菌化学家. 2014年2月.

摘要

目标:整合HIV-1C前病毒保守的5'长末端重复序列(LTR)启动子中的一个区域被确定为短双链RNA(dsRNA)的有效靶向区域,以引起异染色质化,从而导致人类宿主细胞中病毒转录、复制和随后的生产性感染的长期下降。

方法:将小干扰RNA(siRNA)转染到含有整合的LTR萤光素酶报告基因构建体的siHa细胞中,并筛选诱导转录基因沉默(TGS)的效率。TGS通过双重荧光素酶分析和实时PCR进行评估。还研究了靶区的染色质修饰。然后检查有效siRNA在感染HIV-1C病毒的TZM-bl细胞和人类外周血单个核细胞(PBMC)中的效力。用ELISA法测定病毒Gag-p24抗原水平。

结果:一种HIV-1C LTR-特异性siRNA显著降低荧光素酶活性及其mRNA表达,但对HIV-1B LTR没有这种影响。这种siRNA介导的TGS是由组蛋白甲基化诱导的,导致靶LTR区域异染色化。同样的siRNA在单次转染后的3周或更长时间内也显著抑制了感染各种HIV-1C临床分离株的TZM-bl细胞和人PBMC中的病毒复制,即使是目标区域不匹配的菌株。

结论:我们已经确定了一种有效的dsRNA,通过在靶C-LTR区域进行可遗传的表观遗传修饰,可在体外和体外长期抑制HIV-1C病毒的产生。这种dsRNA在HIV-1C感染方面具有很好的治疗潜力,这一分支导致了全球一半以上的艾滋病病例。

关键词:HIV-1;RNAi;表观遗传学;小干扰RNA;转录基因沉默。

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