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.2013年7月11日；8（7）：e68964。
doi:10.1371/journal.pone.0068964。 2013年印刷。

RING-box蛋白1在小鼠卵母细胞减数分裂成熟中的作用

林周（Lin Zhou） 1, 叶阳, 张娟娟, 郭雪江, 叶碧, 辛莉（Xin Li）, 张萍（Ping Zhang）, 张俊强, 林敏（Min Lin）, 周作敏, 沈蓉（音）, 郭西荣, 冉火, 秀凤玲, 嘉豪沙
附属公司

RING-box蛋白1在小鼠卵母细胞减数分裂成熟中的作用

林周（Lin Zhou）等。 公共科学图书馆一号. .

摘要

环盒蛋白-1（RBX1）是Skp1-cullin-F-box蛋白（SCF）E3泛素连接酶的重要组成部分，通过靶向不同底物进行降解，参与多种细胞过程。然而，RBX1在小鼠卵母细胞成熟中的生理功能尚不清楚。在这里，我们检测了RBX1在小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中的表达、定位和功能。免疫荧光分析表明，RBX1在成熟过程中表现出动态分布：它定位于纺锤体和浓缩染色体周围并随其迁移。用适当的siRNAs敲除Rbx1导致第一极体挤出率降低，大多数卵母细胞被阻滞在中期I。此外，Rbx1的下调导致Emi1的积累，Emi1是小鼠减数分裂成熟所必需的后发复合体/环体（APC/C）的抑制剂。此外，我们发现同源分离相关蛋白安全蛋白和细胞周期蛋白B1的表达明显增加，它们是APC/C E3连接酶的底物，需要被降解才能进行减数分裂。这些结果表明SCF（βTrCP）-EMI1-APC/C轴在小鼠卵母细胞减数分裂成熟中的重要作用。总之，我们为RBX1在小鼠卵母细胞减数分裂成熟中的不可或缺的作用提供了证据。

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数字

图1
图1。小鼠卵母细胞中存在RBX1。
A） Western blot图像显示了预测分子量为14kD的唯一条带，表明小鼠卵母细胞中存在RBX1。B） 免疫组织化学图像显示RBX1在卵母细胞中大量存在（a.10×，B.40×，c.阴性对照）。
图2
图2。小鼠卵母细胞减数分裂成熟过程中RBX1的亚细胞定位。
A） 共聚焦显微镜图像显示卵母细胞在GV（A）、GVBD+2 h（b）、GVMD+4 h（c）、GVD+6 h（d）、GGBD+8 h（e）、GVBD+10 h（f）、GVLD+12 h（g）和GVBD+16 h（减数分裂II期）（h）时的RBX1（绿色）和DNA（红色）免疫染色，兔IgG用作阴性对照（i）。B） 用抗RBX1和α-微管蛋白抗体双重染色的体内成熟卵子图像：绿色，α-微管蛋白；红色，RBX1；蓝色，染色质；黄色，RBX1和α-微管蛋白重叠。C） 诺卡唑处理的卵母细胞图像用于纺锤体扰动，然后用新鲜培养基处理以恢复纺锤体。将中期I期和中期II期卵母细胞用诺克唑处理后进行纺锤扰动，然后将MII卵母细胞洗去诺克唑后转移到新鲜的CZB中进行纺锤恢复。绿色，RBX1；红色，DNA。
图3
图3。击倒卢比x1在GV期卵母细胞中。
A） 实时PCR结果证实了卢比x1表达式。误差条代表SD(*P（P）< 0.01). 第一PBE的比率显著下降也是由于卢比x1敲除后，只计算和计数了带有GVBD的卵母细胞，五个独立实验的结果如图3B所示(*P（P）<0.01）。
图4
图4。蛋白质印迹分析卢比x1-击倒卵母细胞。
结果证实RBX1在蛋白水平上下调，Emi1、cyclin B1和securin的表达明显增加。
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